家兔溶血性黃痘實驗病理學研究

朱凱 李曉明

摘要：為探討溶血性黃疸的發病機制和病理學特征，為其防治提供依據。方法：經耳緣靜脈注射1%鹽酸苯肼，復制家兔溶血性黃疸的病理模型，檢測其血常規、尿常規、血清膽紅素含量，觀察臨床表現和肝、腎的病理變化。結果：在第3次注射鹽酸苯肼后，試驗兔出現貧血、黃疸、血紅蛋白尿等癥狀，外周血液紅細胞數量、血紅蛋白含量和紅細胞壓積明顯下降，有核紅細胞增多，血清膽紅素含量明顯升高;尿膽紅素、尿膽原和潛血陽性;肝細胞和腎小管上皮變性、壞死。結論：靜脈注射鹽酸苯肼可引起家兔溶血性黃疸、貧血和血液性缺氧。

關鍵詞：家兔;鹽酸苯肼;溶血性黃疸;病理變化

中圖分類號：S829.1 文獻標識碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.19.001

0 引言

溶血性黃疸又稱肝前性黃疸，是由于紅細胞大量破壞，血液中膽紅素大量堆積引起相關組織黃染的病理現象，發病原因主要是免疫性溶血、異型輸血及中毒等[1]。鹽酸苯肼是一種工業原料，能引起嚴重的溶血反應，導致高膽紅素血癥和貧血[2]。試驗通過靜脈注射鹽酸苯肼在家兔上復制溶血性黃疸的病理模型，并對其臨床表現、血液學變化和肝、腎的病理性損害進行觀察，可為進一步揭示其致病機理提供依據。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

鹽酸苯肼（上海化學試劑廠，AR），常規手術器械，AU5800全自動生化分析儀，DxH600血細胞分析儀，IQ200自動尿液分析儀，Leica RM2125手動輪轉式切片機，Olympus顯微鏡，采血針，抗凝管。

1.2 試驗動物與分組

中國白兔10只，雌雄各半，體重約2.0kg。隨機分成試驗組和對照組，每組5只。試驗前進行2d的適應性飼養。

1.3 方法

1.3.1 模型建立

試驗組經耳緣靜脈注射1%鹽酸苯肼溶液（2mL/kg體重），1次/d，連續3d;對照組以生理鹽水代替苯肼溶液。觀察動物的心率，呼吸，精神狀態，皮膚、黏膜、結膜和尿液的顏色。

1.3.2 血、尿相關指標檢測

在第3次注射鹽酸苯肼后第2天，采集血、尿樣品，分別檢測血清直接膽紅素、間接膽紅素、總膽紅素含量、血常規和尿常規。檢測結果用PASS統計軟件進行t檢驗及方差分析。

1.3.3 病理學觀察

處死動物并進行尸檢，觀察皮膚、結膜、內臟的顏色和肝、腎的變化。從肝、腎不同部位取材，10%中性福爾馬林固定，石蠟切片、HE染色，鏡檢。

2 結果

2.1 臨床表現

試驗期間，2組家兔均未中途死亡。試驗組在連續3d靜注鹽酸苯肼后精神沉郁，活動減少，食欲減退，心率、呼吸加快，口唇粘膜、眼結膜顏色變淡，以后呈淡黃色（見圖1）;排尿次數和尿量減少，尿色變深，呈濃茶色。

2.2 血、尿檢測結果

試驗組在第3次注射鹽酸苯肼后第2天，外周血液中紅細胞數量、血紅蛋白含量、紅細胞壓積均明顯低于對照組（P<0.01）;有核紅細胞絕對值和百分比均明顯升高，與對照組差異極顯著（P<0.01）。見表1。

試驗組在第3次注射鹽酸苯肼后第2天，血清總膽紅素、結合膽紅素和未結合膽紅素含量均明顯升高，與對照組相比，差異極顯著（P<0.01）。見表2。

試驗組在第3次注射鹽酸苯肼后第2天，尿液中的尿膽原、膽紅素、尿蛋均呈陽性，同時出現大量隱血。見表3。

2.3 病理變化

（1）試驗組家兔尸體消瘦，被毛粗亂，眼結膜和口腔粘膜黃染;血液稀薄，不易凝固;皮下散在出血點;胸、腹腔有少量淡黃色積液，腹膜顏色灰黃，濕潤，表面光滑。見圖1。

（2）肝臟。略腫大，被膜緊張，邊緣變鈍，土黃色，呈斑駁狀，質脆，切面有多量暗紅色血液流出。鏡檢，肝小葉結構清晰，部分肝小葉中央靜脈和肝竇擴張、淤血;肝細胞腫脹，彌漫性脂肪變性和散在性壞死，見圖2。

（3）腎臟。輕度腫大，質軟，土黃色，被膜緊張，易剝離，切面皮質略厚，皮、髓質界限清晰。鏡檢，腎小球充血;腎小管腔變小、形狀不規則，嚴重者閉鎖;腎小管上皮水泡變性，部分壞死崩解，少數腎小管內可見均質、紅染的蛋白管型。見圖3。

3 討論與結論

（1）鹽酸苯肼是一種化工原料，廣泛用于染料、醫藥和農藥的生產。因其能促進氧自由基產生，破壞紅細胞膜，使血紅蛋白變性，故可引起溶血性黃疸和貧血[3]。試驗組家兔連續3d注射鹽酸苯肼后，由于血液中的紅細胞大量崩解，血常規檢查可見紅細胞數量、血紅蛋白含量、紅細胞壓積均明顯低于對照組;同時，由于貧血引起血液性缺氧，動物表現出精神沉郁、活動減少、心率和呼吸頻率加快等癥狀，并通過骨髓造血機能代償性增強，使血液中未成熟的有核紅細胞增多。此外，嚴重溶血引起血紅蛋白尿，使尿液顏色加深，并對腎臟產生毒性作用。

（2）生理情況下，動物體內膽紅素主要來源于衰老死亡的紅細胞。紅細胞破壞后，血紅素降解形成未結合膽紅素，后者經肝細胞醋化處理轉化為結合膽紅素，隨膽汁排入腸道[4]。由于鹽酸苯肼引起嚴重溶血，使血液中未結合膽紅素含量明顯升高;同時由于鹽酸苯肼對肝臟的損傷，部分肝細胞壞死后釋放的結合膽紅素進入血液，使血液中結合膽紅素含量也增高，膽紅素在有關組織中沉積，引起黃疸。血液中的結合膽紅素能從尿中排出，使尿中膽紅素均呈陽性，并進一步對腎臟造成損傷。

（3）鹽酸苯肼除能引起溶血外，對實質細胞也可產生毒性作用[5]。試驗組肝臟和腎臟均出現不同程度的變性和壞死，尤其是腎臟，表現為腎小管上皮廣泛的水泡變性、壞死和崩解，堵塞腎小管。此外，因溶血引起的血紅蛋白尿在腎小管中形成蛋白管型加重了腎臟的損傷，這也是造成尿潛血的主要原因。

參考文獻

[1]馬學恩，王鳳龍.家畜病理學2版[M].北京：中國農業出版社，2015：214-217.

[2]章茹，吳銀枝，鄭典模.鹽酸苯肼的合成[J].南昌大學學報（理科版），2002（4）：394-396.

[3]任德旺，葉淳渟，倪必輝，等.鹽酸苯肼致小鼠化學損傷性血虛證模型的改良[J].遼寧中醫藥大學學報，2015，17（8）：108-110.

[4]譚潔，田霞.溶血性黃疸[J].醫學新知雜志，2015，25（1）：16-18.

[5]李永富，馬月蘭，聶玲，等.新生豬溶血性黃疸模型的制備與驗證[J].中國當代兒科雜志，2016，18（5）：66-68.

作者簡介：朱凱（1997-），男，內蒙古烏拉特人，在讀本科生。

通信作者：李曉明（1964-），男，甘肅甘谷人，博士，教授，甘肅農業大學動物醫學院工作。