海洋酸化對海洋魚類行為的影響及機制研究進展

趙信國,劉廣緒,陳碧鵑,曲克明,夏 斌,*,單秀娟

1 農業部海洋漁業可持續發展重點實驗室,中國水產科學研究院黃海水產研究所, 青島 266071 2 青島海洋科學與技術國家實驗室海洋生態與環境科學功能實驗室, 青島 266237 3 浙江大學動物科學學院, 杭州 310058

海洋酸化(Ocean Acidification)是由于人源CO2的大量排放,致使海洋吸收過量CO2,造成海水pH值降低(酸度增加)和碳酸鹽平衡體系變化的現象[1- 3]。當前表層海水pH值約為8.1—8.2,據預測到21世紀末pH值將降低至7.7—7.8,到2300年將降低至7.3—7.4[4-5]。研究表明日趨嚴重的海洋酸化現象,將對海洋生物產生深遠影響,已經成為威脅海洋生態系統穩定和功能的又一重大環境問題[6- 8]。作為魚類對外界或內部刺激的外在反應,行為在魚類的繁殖、捕食、抵御捕食等一系列生命過程中發揮著關鍵作用[9]。鑒于行為的重要生物學意義和對海洋酸化潛在生態風險的擔憂,已有越來越多學者(尤其是國外學者)開始關注海洋酸化是否以及如何影響海洋魚類的行為[10- 12]。當前研究結果顯示海洋酸化不僅會顯著干擾包括嗅覺、聽覺、視覺在內的魚類感官功能,還將對神經生理功能和細胞信號傳導等過程產生不利影響,繼而改變海洋魚類的捕食、逃避捕食、行為側向化、棲息地識別與選擇等行為[13- 15]。可以預見,行為的改變不僅會影響海洋魚類種群本身的生存與繁衍,還將進一步威脅海洋生態系統的穩定與功能。

我國海岸線漫長,海域遼闊,魚類資源豐富,魚類捕撈和養殖業發達。但與國外相比,國內相關研究十分匱乏,僅見零星報道[13,16-17],這種現狀嚴重制約了我國相關應對策略的制定,對我國海洋生態保育和漁業發展非常不利。此外,當前的研究也還存在研究范圍窄、研究手段不合理、潛在機制及生態效應考察不足、研究結果難以整合等問題亟待改進。為此,本文對國內外相關研究進展進行了梳理和總結,同時分析了現有研究的特點,并對未來的研究進行了展望,以期彌補上述缺憾,促進國內相關研究的廣泛開展。

1 海洋酸化對海洋魚類行為的影響

目前,相關研究涉及的主要是魚類的捕食、逃避捕食、行為側向化、棲息地識別與選擇等行為,也少量研究涉及到了魚類的趨性行為、生殖行為、集群行為、勇氣水平(焦慮水平)等,研究結論以海洋酸化對行為的不利影響為主(表1)。由此可見,未來海洋酸化極有可能會對海洋魚類的行為產生廣泛影響,從而威脅海洋生態系統的穩定和功能。

表1 海洋酸化對海洋魚類行為的影響

海水pCO2/pH(實驗條件)一欄中,海水pCO2較小或pH較大者為相應文獻中的對照組,其余為海洋酸化處理組

1.1 海洋酸化對捕食及逃避捕食的影響

捕食行為是捕食者為了獵食食物而采取的一系列動作,包括搜尋、追逐、捕捉、處理及攝入等過程。然而,通過食物氣味追逐實驗,Dixson等發現海洋酸化暴露使玲瓏星鯊(M.canis)成魚對食物氣味的反應遲鈍,追逐時間縮短,追逐次數減少[22]。這意味著海洋酸化將削弱魚類對食物的感知能力,并最終損害其捕食行為。其實,在捕食者捕食的過程中,作為食物的一方并非坐以待斃,當感知到危險來臨時,它們也會采取逃跑、擬態等多種措施來躲避捕食。即便最后不幸受傷或被捕食,也會釋放化學信號,警示同類個體采取防御措施。不過,Munday等發現經過4天海洋酸化處理后,澳氏雀鯛(P.wardi)仔魚對捕食危險信號敏感性下降,在捕食威脅環境中的停留時間延長[28]。這說明海洋酸化也將削弱魚類對捕食危險的感知能力,從而使其不能快速有效的采取行動以躲避捕食。

為了更加真實的反映海洋酸化對捕食者-獵物相互作用過程(predator-prey dynamics)的影響,近年來已有不少學者嘗試同時對獵物和捕食者進行實驗。例如,Allan等將棕擬雀鯛(P.fuscus)和食物安邦雀鯛(P.amboinensis)同時進行酸化暴露和捕食實驗,發現安邦雀鯛(P.amboinensis)逃避棕擬雀鯛(P.fuscus)捕食的能力被嚴重削弱,棕擬雀鯛(P.fuscus)對安邦雀鯛(P.amboinensis)的捕食能力沒有明顯變化,使得最終捕食率增加[47]。與之類似,McCormick等通過同時實驗,發現棕擬雀鯛(P.fuscus)對澳氏雀鯛(P.wardi)的捕食積極性降低,追逐距離變短,攻擊速度減小,與此同時澳氏雀鯛(P.wardi)逃避棕擬雀鯛(P.fuscus)捕食的能力也降低,使得最終的捕食率并沒有明顯變化[25]。這些研究說明海洋酸化雖然不一定影響最終的捕食成功率,但必然會使捕食者-獵物相互作用的動態過程發生變化。

在自然環境中,其實有多種獵物可供捕食者捕食。由于捕食難度等限制,捕食者往往選擇捕食某些特定的獵物,這便是捕食者的食物選擇性。獵物的捕食難度與捕食者的捕食能力及自身躲避捕食的能力密切相關,因此不難推測海洋酸化造成的捕食和逃避捕食行為變化,極有可能改變捕食者的食物選擇性(food selectivity)。Ferrari等通過對棕擬雀鯛(P.fuscus)和它的4種食物黃雀鯛(P.moluccensis)、安邦雀鯛(P.amboinensis)、長崎雀鯛(P.nagasakiensis)及白尾雀鯛(P.chrysurus)同時進行酸化暴露和捕食實驗,證實了這一推論,發現棕擬雀鯛(P.fuscus)對4種食物的選擇性發生改變,由喜好捕食長崎雀鯛(P.nagasakiensis)和白尾雀鯛(P.chrysurus)轉變為喜好捕食黃雀鯛(P.moluccensis)和安邦雀鯛(P.amboinensis)[58]。

1.2 海洋酸化對行為側向化的影響

行為側向化(behavioral lateralization)是動物進行某一行為時,偏好使用某一側肢體或感覺器官的現象[80],是大腦功能非對稱性的一種外在表現,能有效縮短動物的決策時間,提升動物對環境的適應能力(fitness)。T形迷宮實驗證實海洋酸化能顯著改變魚類的行為側向化強度。例如,經過4天酸化暴露后,黃尾新雀鯛(N.azysron)仔魚的行為側向化絕對指數相比對照組顯著減小[52-53]。不過,Jutfelt等發現經過30天酸化暴露后,大西洋鱈魚(G.morhua)稚魚的行為側向化絕對指數與對照組并無明顯差異[65],但這與上述研究并不矛盾,因為其絕對指數仍表現出了下降趨勢。Green等則發現海洋酸化使小斑星鯊(S.canicula)稚鯊的行為側向化絕對指數顯著升高[24]。

不僅如此,T形迷宮實驗證實海洋酸化甚至還能轉變魚類行為側向化的方向。例如,酸化暴露不僅降低了三刺魚(G.aculeatus)成魚行為側向化的絕對指數,還使其在群體水平表現出一定的左側側向化[73- 75]。Domenici等的研究更是直接證實了這一推論,他們發現經過7天酸化暴露后,澳氏雀鯛(P.wardi)稚魚的行為側向化方向由右側轉變至左側[27]。與之相同,Sundin等發現經過酸化處理后,黃體尻鰕虎魚(G.flavescens)成魚的行為側向化方向,同樣由右側轉變至左側[36]。對魚類而言,行為側向化與其捕食、逃避捕食、空間定位、集群等行為密切相關[13, 81-82],這意味著海洋酸化所引起的行為側向化強度和方向變化將對海洋魚類產生深遠影響。

1.3 海洋酸化對棲息地識別與選擇的影響

棲息地識別與選擇是指魚類在化學(嗅覺)信號、聲音(聽覺)信號、光(視覺)信號等的指引下,尋找、定位并選擇適宜棲息地定居的行為。作為魚類種群補充的重要來源,幼魚在完成浮游期后,需要尋找適宜的環境定居,能否順利完成這一過程直接關系到魚類種群能否維持。Munday等發現經過11天的酸化暴露后,珊瑚礁魚類三帶雙鋸魚(A.percula)仔魚通過化學信號識別棲息地的能力下降,在珊瑚礁中的停留時間縮短[64]。這意味著在日趨嚴重的海洋酸化影響下,幼魚完成定居行為的難度增大。在針對安邦雀鯛(P.amboinensis)、白尾雀鯛(P.chrysurus)和黃雀鯛(P.moluccensis)仔魚的實驗中,Devine等則發現海洋酸化不僅會削弱它們借助化學信號識別棲息地的能力,甚至還會改變它們定居的時間節律[55]。研究顯示海洋酸化也會影響魚類通過聲音信號識別棲息地的能力。例如,經酸化暴露后,日本白姑魚(A.japonicus)仔魚[41]和大眼長臀鰕虎魚(P.pictus)仔魚[38]對棲息地聲音信號不再敏感、識別能力下降、定居成功率降低。不僅如此,海洋酸化甚至還會造成幼魚被無關聲音信號吸引。例如,Rossi等研究發現尖吻鱸(L.calcarifer)幼魚在經過酸化暴露后,對棲息地聲音信號識別力下降,并被無關聲音信號吸引[70]。

與幼魚類似,海洋酸化也會影響成魚對棲息地的識別能力,繼而影響后續的棲息地定位和定居行為。Devine等研究發現經過4天酸化暴露后,六線巨齒天竺鯛(C.quinquelineatus)成魚對棲息地化學(嗅覺)信號的敏感度降低、識別能力下降,最終的成功歸巢率僅為對照組的69%—78%[54]。不僅如此,海洋酸化甚至還能改變海洋魚類對棲息地的偏愛性。例如,原本喜好棲息于尖枝列孔珊瑚(S.hystrix)周圍的黃副葉鰕虎魚(P.xanthosomus)成魚,在經過4天酸化暴露后,不再喜好棲息于尖枝列孔珊瑚 (S.hystrix)周圍[39]。

1.4 海洋酸化對其他行為的影響

除上述行為外,也有少量研究報道了海洋酸化對魚類趨性行為、生殖行為、集群行為(shoaling behavior)及膽量(boldness)的影響。例如,Forsgren等發現海洋酸化使黃體尻鰕虎魚(G.flavescens)仔魚對光源的敏感性增強、趨光個體數量增加、正趨光性增強[37]。與之不同,Hamilton等發現使裂吻平鲉(S.diploproa)稚魚的焦慮水平升高、膽量變小、行為謹慎、偏好駐留于暗處[78]。不論如何,這說明海洋酸化能顯著改變浮游期幼魚的趨光行為和勇氣水平。不難推測,這有可能會進一步影響浮游期幼魚的擴布(dispersal)。此外,海洋酸化也會影響海洋魚類的集群行為。例如,Lopes等發現經過7天酸化暴露后,沙真銀漢魚(A.presbyter)仔魚的集群強度相比于對照組顯著降低[43]。與之類似,Maulvault等發現海洋酸化使大西洋白姑魚(A.regius)稚魚的集群時間顯著縮短[40]。另外,海洋酸化也能損害海洋魚類的生殖行為,從而威脅種群的繁衍。例如,Milazzo等發現海洋酸化會顯著降低睛斑扁隆頭魚(S.ocellatus)的求偶和交配效率,使求偶和交配持續時間延長[76]。

2 海洋酸化影響海洋魚類行為的生態效應

如前所述,海洋酸化會導致海洋魚類的眾多行為異常。不難推測,這些變化極有可能將削弱魚類的適應能力,降低其繁殖和生存能力,從而危及種群規模和種群結構的維持,并影響種群內部的競爭及合作關系。例如,Munday等發現海洋酸化在削弱澳氏雀鯛(P.wardi)仔魚逃避捕食能力的同時,還造成仔魚成活率降低、數量減少,從而嚴重制約魚群的補充(recruitment)和恢復(replenishment)[28]。另外,在前文中,我們提到海洋酸化會損害沙真銀漢魚(A.presbyter)[43]和大西洋白姑魚(A.regius)的集群行為[40]。由于集群行為在魚類的繁殖、擴布、洄游(migration)、捕食、逃避捕食等過程中發揮著至關重要的作用[84-85],因此可以預見海洋酸化將通過這一方式,進一步削弱魚類的適應能力。

除對種群本身的影響外,魚類行為變化還將影響種間關系(species interaction)。其中,最為突出的就是對捕食關系的影響,造成捕食率、捕食偏好性的改變。另外一個就是對共生關系的影響,改變魚類對生境的利用(habitat use)。例如,Nagelkerken等發現原本存在共生關系的新西蘭竹莢魚(T.novaezelandiae)和馬賽克水母(C.mosaicus),在新西蘭竹莢魚(T.novaezelandiae)經過7—8天的酸化暴露后,兩者在一起的時間縮短,嘗試靠近的次數減少[42]。其實,由棲息地識別能力下降,造成的三帶雙鋸魚(A.percula)等珊瑚礁魚類棲息率降低現象,也屬于這一范疇。野外原位研究證實由魚類行為變化引起的種間關系改變,會進一步造成魚類豐度和群落生物多樣性的變化[86]。

由此可見,海洋酸化對魚類各個生命時期行為的影響,將導致魚類種群動力學和種間關系的改變,進而引發生物多樣性降低等一系列生態后果(圖1)。不過,慶幸的是有研究顯示海洋魚類似乎能做出適應性調整,以保持行為正常。例如,Heinrich等發現在自然環境中經常遭受酸化、缺氧等脅迫的斑點長尾須鯊(H.ocellatum),在經過30天酸化暴露后,識別及尋找棲息地的能力保持不變[18]。

圖1 海洋酸化影響魚類行為的生態效應(修改自文獻[83])Fig.1 Ecological consequences of marine fish behavior alteration due to ocean acidification (modified from reference [83])

3 海洋酸化影響海洋魚類行為的潛在機制

魚類行為的觸發包括外界信號識別與傳導、神經中樞處理信號并發出指令、效應器官做出動作3個環節,其中任何一個環節出現問題都會導致魚類行為異常。不過,當前研究主要集中在前兩個環節,即感官功能和神經功能方面。如圖2所示,海洋酸化可以通過干擾多種感官功能和神經功能,造成海洋魚類行為異常。

圖2 海洋酸化影響海洋魚類行為的潛在機制Fig.2 Potential mechanisms leading to marine fish behavior alteration

3.1 海洋酸化對海洋魚類感官功能的影響

同許多動物一樣,魚類也擁有嗅覺、視覺、聽覺等感官功能。正是在這些感官功能的協助下,外界的各種信號才得以被魚類識別,進而觸發各種行為。從表1可知,由嗅覺介導的魚類行為(olfactory-mediated behavior)是當前研究的主要對象。研究發現正是由于海洋酸化妨礙了嗅覺功能,才導致這些行為異常。充當魚類化學(嗅覺)信號的化學物質包括嘌呤類、蝶呤類、固醇類、氨基酸類、多肽類等[87-88],而這些物質的質子化和去質子化過程恰恰對pH極為敏感[89]。因此海洋酸化極有可能通過影響質子化和去質子化過程,改變化學信號物質的構象,造成海洋魚類化學信號識別異常。盡管對海洋魚類而言,尚無研究報道直接證實這一觀點。但該機制早已被證實是海洋酸化造成海洋無脊椎動物行為異常的原因之一。例如,Roggatz等通過核磁共振確認海洋酸化會改變信號肽GGR的構象,從而影響信號肽的識別,造成普通濱蟹(Carcinusmaenas)卵通氣次數減少[90]。與此同時,類似機制也早已被廣泛證實同樣是造成淡水魚類行為異常中的原因之一[12]。這說明該機制在海洋魚類應該也普遍存在。此外,劉廣緒等發現海洋酸化會阻礙信號在細胞內的信號傳導過程,從而抑制黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)的覓食行為(在審)。由此可見,化學信號識別及傳導異常是造成海洋魚類嗅覺功能和相關行為損傷的原因。

除嗅覺外,海洋酸化也會干擾聽覺功能,從而導致海洋魚類行為異常。例如,Simpson等發現海洋酸化使三帶雙鋸魚(A.percula)依賴于聽覺的躲避行為受損,對珊瑚礁噪音的躲避能力下降[61]。又如,我們在前文中提及的,多種浮游期幼魚通過聲音識別棲息地的能力下降[38, 41, 70]。研究發現海洋酸化會影響耳石的發育,致使耳石形態和密度等發生改變[17, 91-92]。而魚類的聽覺功能與耳石密切相關,因此目前普遍認為耳石的變化可能是導致魚類聽覺功能異常的原因。例如,在海洋酸化影響下,軍曹魚(R.canadum)仔魚耳石體積和密度增大,根據模型預測這將使其聽覺增強,能夠辨識到更多聲音[48]。對海水魚類而言,聽覺功能增強可能并非好消息,這可能會導致魚類被無關聲音干擾,增加靶標聲音的辨識難度。例如,海洋酸化使日本白姑魚(A.japonicus)耳石增大、聽覺增強,但卻使其通過聲音辨別棲息地的能力和定居率下降[41]。尖吻鱸(L.calcarifer)幼魚對棲息地聲音識別能力下降,并被無關聲音吸引[70]。

此外,海洋酸化還將損害海洋魚類的視覺功能,致使依賴于視覺的行為異常[93]。例如,L?nnstedt等發現海洋酸化使安邦雀鯛(P.amboinensis)依賴于視覺(光)信號的逃避捕食行為受損[46]。研究發現魚類視覺功能損傷主要是由視網膜功能異常或眼睛發育異常所致。例如,Chung等發現海洋酸化通過降低多棘雀鯛(A.polyacanthus)視網膜的最大閃爍頻率,從而危及視網膜功能,致使視覺水平下降[34]。Wang等發現海洋酸化引起黑點青鳉(O.melastigma)眼睛發育異常,導致眼睛畸形或缺失,影響視覺功能,最終導致其“C”形啟動的逃跑行為異常[16]。

除上述已探明的感官功能外,海洋酸化也極有可能會影響魚類的味覺、觸覺、電感應、磁感應等功能,但目前尚無相關研究報道。

3.2 海洋酸化對海洋魚類神經功能的影響

2012年,Nilsson等報道稱經酸化暴露后,三帶雙鋸魚(A.percula)仔魚對捕食者化學(嗅覺)信號的敏感性降低、在捕食威脅中的駐留時間延長、逃避捕食行為受損,黃尾新雀鯛(N.azysron)仔魚的行為側向化強度降低,但這兩種行為損傷都能被GABAA受體的特異性拮抗劑gabazine逆轉,他們據此推測海洋酸化通過影響GABAA受體的功能,進而改變兩種魚類的行為[52]。這是科學家首次從神經功能角度,解釋海洋酸化引起海洋魚類行為變化的原因。利用類似研究方法,隨后有越來越多的研究相繼證實這一機制在海洋魚類中普遍存在,并將其被命名為GABAA受體模型(GABAAR model)[14]。

作為一類脊椎動物,海洋魚類擁有相對發達的神經系統,但除GABAA受體外,海洋酸化是否還會影響神經系統的其他方面,如甘氨酸受體(glycine receptor, GlyR),外周CO2感受神經元(CO2-sensing peripheral neuron)和神經元網絡動力學(neuronal network dynamics)等,目前尚不可知[96]。因此仍需深入研究,以全面揭示海洋酸化影響海洋魚類行為的神經機制。

4 結語與展望

圖3 現有文獻分類概況(括號內數字表示相關文獻數量) Fig.3 Available studies assessed the effects of ocean acidification on marine fish behavior (values in parentheses indicate the total number of publications of the corresponding group)

如前所述,日趨嚴重的海洋酸化現象已經成為危害海洋生態安全的又一重大問題。當前,海洋酸化對海洋魚類行為的影響受到了越來越多的關注。現有研究結果表明海洋酸化能通過干擾生理狀態、外界信號感知與識別、神經傳導等多種方式,改變海洋魚類的捕食、逃避捕食、行為側向化、棲息地識別與選擇等行為。鑒于海洋魚類的重要漁業價值和生態功能,因此我們需要對海洋酸化的后繼風險保持足夠警惕。不過,與國外繁榮的研究現狀相比,國內該方向研究匱乏,僅見零星報道[13, 16-17],這極大限制了我國相關應對策略的制定。目前,相關研究涉及的大多是硬骨魚類,軟骨魚類較少,而硬骨魚類中又以熱帶珊瑚礁魚類為主,且多集中在仔稚魚時期(圖3)。盡管大多數研究表明海洋酸化會損害海洋魚類的行為,但也有部分研究顯示沒有顯著影響,甚至是有正面效應(圖3)。這意味著不同魚類、同種魚類的不同生命階段以及不同行為對海洋酸化的耐受性應該存在較大差異[97],因此在未來的研究中需要注意這一點。與此同時,有必要選擇一些有代表性的經濟魚類開展研究,以預測海洋酸化對漁業生產的影響。此外,當前研究還存在研究手段不合理、行為效應、潛在機制及生態風險考察不足、研究結果難以整合等問題亟待改進。

(1)當前絕大部分研究是通過恒定pCO2酸化(constant acidification)暴露的方式,展現海洋酸化對海洋魚類行為的影響。但在野外真實環境中,海水pCO2往往是波動的,即海水表現出的是波動型海洋酸化(oscillating acidification)。有研究發現波動型海洋酸化對海洋魚類行為的影響遠小于恒定型海洋酸化[31]。這說明短期海洋酸化對魚類行為的影響極有可能是一種可逆性的生物效應,但現有研究對此關注較少,未來需要對此加以確認。另外,當前研究大多是通過短期、單一世代暴露實驗,來模擬未來100—300年后的海洋酸化情況對海洋魚類行為的影響。但真實環境中,海洋酸化是一個相對漫長的過程,在此期間魚類是否會被海洋酸化馴化(acclimation)[29, 33]或產生適應性調節(adaptation)[98],目前僅有極個別研究對此做了考察,且結論不一,存在諸多矛盾之處。因此未來需要開展更多長期、跨世代暴露研究,以判斷海洋魚類是否能夠適應未來的海洋酸化情況。

(2)由于海洋酸化是由人源CO2引發、與全球變暖伴隨發生的又一環境問題,因此已有不少研究開始關注海洋酸化與海水升溫復合作用下,海洋魚類行為的變化[20-21, 26, 51, 57, 99-100],并發現海洋酸化與海水升溫之間存在協同效應。這意味著與單獨作用相比,兩者復合作用的生物效應更為嚴重,因此未來更應該關注復合脅迫下的魚類行為變化。不過,在海洋中,魚類還同時面臨著低氧、噪聲、重金屬、微塑料、持久性有機污染物等多種脅迫,但目前僅有極少數研究對海洋酸化與這些環境脅迫的復合效應進行了報道[25]。因此亟需開展多種脅迫下的復合效應研究,以準確評估海洋環境變化對海洋魚類行為的影響。

(3)魚類行為的觸發包括外界信號識別與傳導、神經中樞處理信號并發出指令、效應器官做出動作3個環節,其中任何一個環節出現問題都會導致魚類行為異常。但目前我們對具體機制的了解還遠遠不夠,尤其是在神經機制方面所知甚少,只關注到了GABAA受體功能的變化[14],而海洋酸化是否還影響諸如甘氨酸受體(glycine receptor, GlyR),外周CO2感受神經元(CO2-sensing peripheral neuron)和神經元網絡動力學(neuronal network dynamics)等尚不得知。并且,海洋酸化通過改變化學信號分子構象的方式,干擾海洋魚類的化學信號識別(嗅覺),這一機制也有待研究證實[12]。除上述魚類行為外,海洋酸化是否還會影響魚類的其他行為(如學習行為)也尚未可知。因此,未來要加強這幾個方面的研究。

(4)海洋酸化在直接引起海洋魚類個體行為變化的同時,會間接造成魚類種群動力學和種群規模及結構的變化,借助生物間的相互作用甚至還將對生物群落和生態系統產生深遠影響[83]。不過,目前我們的研究主要集中在個體水平,對此揭示的并不充分。因此,未來需要適度加強種群、群落水平的研究,并結合模型預測海洋酸化對漁業生產和生態系統的影響。

(5)雖然相關研究越來越多,但由于實驗方法和實驗設計上的差異,導致研究結果難以直接比較和整合,限制了海洋酸化生態效應的準確評估。近年來,有學者嘗試使用meta-analysis來整合分析已有研究結果[7, 101],這可能是一個值得借鑒的做法。