系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清IL-17和IL-35水平及其與腎損害的關(guān)系

趙 冕，朱桂晉，周 蕾

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，天津300052）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種以免疫功能紊亂為突出表現(xiàn)的具有全身多系統(tǒng)損害的常見自身免疫病，免疫紊亂發(fā)生在多個環(huán)節(jié)，前期研究證實(shí)輔助性T細(xì)胞（Th細(xì)胞）失調(diào)控與SLE發(fā)病密切相關(guān)。作為Th細(xì)胞家族新成員[1-2]，Th17擴(kuò)增和Treg下降在SLE患者并存[3]，前者分泌的IL-17與后者分泌的IL-35分別發(fā)揮著促炎作用和免疫抑制作用，關(guān)于IL-17/IL-35與SLE的關(guān)系目前尚無系統(tǒng)研究報道。本研究通過檢測SLE患者血清IL-17和IL-35水平，初步探討它們在SLE中的作用及相互關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 對象 選擇2017年8月-2018年5月于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科確診的SLE患者55例，入院前均未使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑或停用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑至少6個月，其中男性5例，女性 50例，平均（39±13）歲，所有患者均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）推薦的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)[4]，其中狼瘡腎炎（LN）[5]患者30例。依據(jù)SLEDAI評分[6]將SLE患者分為活動組（SLEDAI≥10分）27例和非活動組（SLEDAI＜10分）28例。選擇與SLE患者性別、年齡相匹配的健康志愿者25例作為對照組，其中男3例，女22例，平均（35±6）歲。所有入選者均除外感染、腫瘤和其他自身免疫病。

1.2 方法 入選者清晨空腹采靜脈血3 mL，分離血清，-80℃冰箱保存，待測。IL-17、IL-35采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測，其他指標(biāo)為同期天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院檢驗(yàn)中心檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用統(tǒng)計軟件SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，變量間相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組間血清IL-17、IL-35水平的比較 血清IL-17水平，SLE組高于對照組，SLE活動組高于非活動組；血清IL-35水平，SLE組低于對照組，SLE活動組低于非活動組。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表 1。

2.2 SLE患者血清IL-17、IL-35水平與SLEDAI評分的相關(guān)性 SLE患者血清IL-17水平和SLEDAI評分正相關(guān)（圖1A），IL-35水平和SLEDAI評分負(fù)相關(guān)（圖1B）。

2.3 SLE患者血清IL-17和IL-35水平的相關(guān)性分析 SLE患者血清IL-17和IL-35水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.78，P＜0.05），見圖 2。

表1 不同組間血清IL-17、IL-35水平的比較（±s，pg/mL）Tab 1 Comparison of serum IL-17 and IL-35 levels among different groups(±s,pg/mL)

表1 不同組間血清IL-17、IL-35水平的比較（±s，pg/mL）Tab 1 Comparison of serum IL-17 and IL-35 levels among different groups(±s,pg/mL)

項目 S L E組 對照組 t P S L E活動組 S L E非活動組 t P I L-1 7 1 4 4.0 5±1 8.0 0 1 2 2.2 5±1 4.6 1 -5.3 1 ＜0.0 1 1 5 3.8 1±1 3.6 1 1 3 4.6 3±1 6.8 0 -4.6 4 ＜0.0 1 I L-3 5 5 4.1 5±6.6 6 6 1.7 3±5.0 5 5.6 0 ＜0.0 1 5 0.9 2±5.2 1 5 7.2 7±6.4 9 4.0 0 ＜0.0 1

圖1 SLE患者血清IL-17（A）和IL-35（B）水平與SLEDAI評分的關(guān)系Fig 1 Correlationsof serum IL-17 levels(A)and IL-35 levels(B)with SLEDAI scores in SLE patients

2.4 LN和非LN患者血清IL-17、IL-35水平的比較 LN患者血清IL-17水平高于非LN患者，IL-35水平低于非LN患者。差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

圖2 SLE患者血清IL-17和IL-35水平的相關(guān)性Fig 2 Correlation between serum IL-17 and IL-35 levels in SLE patients

表2 LN和非LN患者血清IL-17、IL-35水平的比較（±s，pg/mL）Tab 2 Comparison of serum IL-17 and IL-35 between LN patients and SLE without nephritis(±s,pg/mL)

表2 LN和非LN患者血清IL-17、IL-35水平的比較（±s，pg/mL）Tab 2 Comparison of serum IL-17 and IL-35 between LN patients and SLE without nephritis(±s,pg/mL)

項目 L N患者 非L N患者 t P I L-1 7 1 4 8.8 9±1 7.8 7 1 3 8.2 4±1 6.6 9 0.0 3 ＜0.0 5 I L-3 5 5 2.3 3±7.1 0 5 6.3 4±5.4 6 0.0 3 ＜0.0 5

2.5 LN患者血清IL-17和IL-35水平與24 h尿蛋白定量的相關(guān)性 IL-17水平與24 h尿蛋白正相關(guān)（r=0.76，P＜0.01）（圖 3 A），IL-35 水平與 24 h 尿蛋白負(fù)相關(guān)（r=-0.69，P＜0.01）（圖 3 B）。

圖3 LN患者血清IL-17（A）和IL-35（B）水平與24 h尿蛋白定量的相關(guān)性Fig 3 Correlationsof serum IL-17 levels(A)and IL-35 levels(B)with 24-h proteinuria in SLE patients with nephritis

3 討論

IL-17是Th17分泌的主要促炎因子，IL-35是Treg分泌的主要免疫抑制因子，作為一對緊密相關(guān)的促炎/抗炎細(xì)胞因子，在生理狀態(tài)下，它們的表達(dá)水平保持相對平衡。本研究中，與正常對照者相比，SLE患者血清IL-17水平升高而IL-35水平降低，且SLE活動組的IL-17水平高于非活動組，IL-35水平低于非活動組，提示SLE患者血清IL-17、IL-35水平異常表達(dá)，且與疾病活動相關(guān)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)血清IL-17水平與SLEDAI評分正相關(guān)而血清IL-35水平與SLEDAI評分呈負(fù)相關(guān)，也印證了上述結(jié)果。SLE患者存在細(xì)胞凋亡缺陷，異常釋放的雙鏈DNA等抗原與自身抗體形成免疫復(fù)合物，激活樹突狀細(xì)胞，分泌 IL-6、IL-23、IL-1β，促進(jìn) Th17 的特征性轉(zhuǎn)錄因子RORγt表達(dá)[7]，誘導(dǎo)初始CD4+Th細(xì)胞向Th17分化[8-9]，過表達(dá)的RORγt與Treg特征性轉(zhuǎn)錄因子FOXP3的基因啟動子區(qū)域結(jié)合，抑制FOXP3的轉(zhuǎn)錄[10]；此外，IL-6也能通過激活NF-κB通路抑制FOXP3表達(dá)[11]，使Treg分化受到抑制。一方面，活化的Th17分泌大量的IL-17，通過G蛋白信號調(diào)節(jié)因子Rgs13、Rgs16降低B細(xì)胞的趨化反應(yīng)，阻斷B細(xì)胞的遷移，誘導(dǎo)生發(fā)中心形成[12]，產(chǎn)生大量自身抗體，并與相應(yīng)抗原形成免疫復(fù)合物沉積在血管基底膜中，IL-17還可以促進(jìn)局部組織細(xì)胞分泌趨化因子（CXCL1、CXCL2、CXCL5），吸引中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等聚集[13]，最終導(dǎo)致局部組織炎性浸潤和損傷。另一方面，Treg的分化受到抑制，IL-35分泌相應(yīng)減少，IL-35通過抑制RORγt表達(dá)來抑制IL-17生成的作用減弱，也促進(jìn)了SLE患者的免疫炎癥反應(yīng)進(jìn)一步活躍。本組SLE患者的血清IL-17水平與IL-35水平呈負(fù)相關(guān)，也印證了兩者之間存在相互制約作用。IL-17/IL-35失衡可能參與了SLE的免疫紊亂和疾病發(fā)生。

腎臟是SLE最常受累的器官之一。有研究發(fā)現(xiàn)，IV型LN患者腎小球基底膜IL-17表達(dá)水平升高且與組織學(xué)活動指數(shù)及組織壞死程度正相關(guān)[14]，而He等[15]發(fā)現(xiàn)LN患者血清IL-35水平和血肌酐負(fù)相關(guān)，和腎小球?yàn)V過率正相關(guān)。本研究中，與非LN患者比較，LN患者的血清IL-17水平升高而IL-35水平減低，且LN患者血清IL-17水平與尿蛋白定量正相關(guān)，IL-35水平與尿蛋白定量負(fù)相關(guān)，提示血清IL-17水平升高和IL-35水平減低可能與SLE的腎損害相關(guān)。研究證實(shí)IL-17可以促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞等腎臟固有細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，并募集大量的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，最終導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的腎臟損傷[16]，而IL-35可能是通過抑制IL-17的生成而對腎臟起保護(hù)作用。IL-17/IL-35平衡失調(diào)，促炎作用活躍，保護(hù)作用削弱，共同參與了SLE患者的腎臟損傷過程。

綜上所述，IL-17和IL-35是一對緊密相關(guān)的促炎/抗炎細(xì)胞因子，共同發(fā)揮著免疫調(diào)控作用。IL-17水平升高、IL-35水平下降，兩者的平衡失調(diào)，參與了SLE的疾病發(fā)生及其腎臟損傷過程。敲除IL-17基因后的狼瘡鼠血清中IgG、抗dsDNA抗體、抗nRNP抗體滴度下降[17]；尾部注射IL-35治療的狼瘡鼠血漿促炎細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6、IL-17A）濃度下降而抗炎細(xì)胞因子（IL-2、IL-10）濃度升高，且ANA滴度和抗dsDNA抗體滴度也明顯下降[18]；Ouyang等[19]發(fā)現(xiàn)經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療后SLE患者降低的血清IL-35水平可以恢復(fù)正常。將IL-17/IL-35作為一個整體，進(jìn)一步深入研究對探討SLE及LN的發(fā)生機(jī)制具有重要意義，并有望為今后尋找新的治療靶點(diǎn)提供依據(jù)。