針刺不同腧穴對急性尿潴留大鼠膀胱功能的影響＊

何 婷，楊 碩，莫 倩

（貴州中醫藥大學針灸骨傷學院 貴陽 550001）

尿潴留（Urinary Retention，UR）是膀胱內充滿尿液而不能正常排出的一種臨床表現[1]，分急性尿潴留（Acute Urinary Retention，AUR）和慢性尿潴留（Chronic Urinary Retention,CUR）,其中，AUR是臨床常見急癥之一，尤以老年男性多見，若不及時處理，易繼發尿路感染和反流性腎病，甚至導致腎衰竭、膀胱破裂等一系列嚴重并發癥[2,3]。AUR 最常見的病因為尿道機械性梗阻和藥物相關性尿潴留[4]。目前臨床上多采用引流尿液的方法被動等待膀胱功能的恢復，但這種治療方法對減輕膀胱損害、促使膀胱功能恢復作用甚微，甚至容易發生尿路感染[5,6]。既往臨床研究表明針刺可以促進患者膀胱自主運動,對于改善患者排尿障礙癥狀療效較好[7-10]，本實驗從穴位特異性入手，考慮針刺治療本病的療效與所選腧穴神經節段可能相關，觀察針刺不同腧穴對AUR大鼠的尿動力學指標的影響，從而探討針刺治療AUR的穴位特異性，進一步為臨床實踐選穴提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

2 月齡SPF 級雄性Sprague-Dawley 大鼠40 只，體重180-220 g，由第三軍醫大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（渝）2017-0002。

飼養條件：室內溫度20-25℃，相對濕度（45±5）%，標準顆粒飼料飼養，自由飲水，適應性喂養72 h。本項研究的動物實驗過程均遵守美國國立衛生院倡導的實驗動物關懷和使用指導原則（Guide of Care and Use of Laboratory Animals，NIH）和以“減少（Reduction）、替代（Replacement）和優化（Refinement）為核心的動物實驗3R”原則。

1.2 倫理審查

實驗經過貴州中醫藥大學第二附屬醫院倫理委員會審查，編號2016097。

1.3 主要試劑和儀器

1.3.1 試劑

10%氨基甲酸乙酯（Ethyl carbonate，C3H7NO2，批號：30191228，國藥集團化學試劑有限公司），0.9%氯化鈉注射液（normal saline,NS，批號：國藥準字H32025237，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司）。

1.3.2 儀器

ML866 型Powerlab4/30 數據采集系統（埃德儀器國際貿易上海有限公司），ML221型Bridge Amp橋式放大器（埃德儀器國際貿易上海有限公司），MLT0380 型壓力傳感器（埃德儀器國際貿易上海有限公司），微量注射泵（浙江史密斯醫學儀器有限公司），69001 型恒溫控制板（深圳市瑞沃得生命科技有限公司），便攜式電子天平（長沙湘平科技發展有限公司），硬膜外導管、50 mL 一次性使用無菌溶藥注射器（山東威高集團醫用高分子制品股份公司），一次性無菌針灸針（Φ0.20×25 mm，蘇州醫療用品廠有限公司）。

2 方法

2.1 實驗前準備

2.1.1 儀器設置

Chart記錄系統的參數設置：采樣頻率：20 kHz；橋式放大通道低通濾波：10 kHz；數字濾波低通：1Hz。將壓力感應器通過醫用T 形三通管與硬膜外導管連接。將醫用T 形三通管、壓力感應器和硬膜外導管中充滿0.9%氯化鈉溶液，在醫用T 形三通管通過硬膜外導管開到通大氣狀態時，將系統壓力調零。

2.1.2 動物麻醉

大鼠以10%氨基甲酸乙酯溶液（5 mL·kg-1）腹腔注射進行麻醉，將其置于恒溫控制板上以維持其體溫在38℃左右。以有齒鑷子給予大鼠下肢疼痛刺激時，若大鼠無疼痛反射，角膜反射存在，視為麻醉成功。實驗過程中，若大鼠出現下肢收縮，可用10%氨基甲酸乙酯溶液1 mL·kg-1腹腔注射進行補充麻醉一次。

2.2 急性尿潴留大鼠模型制備

參照文獻[11]所建立膀胱過度充盈模型進行，利用Chart 7軟件以實時記錄大鼠基礎膀胱內壓，造模后大鼠基礎膀胱內壓遠高于正常狀態，說明尿潴留現象存在，造模成功。

2.3 尿動力學評價

大鼠腹部備皮，以75%酒精局部消毒腹部，在下腹部沿正中線作約1 cm 縱向切口，逐層打開腹腔，暴露膀胱。膀胱頂部插入靜脈留置針留置。打開Chart7軟件以實時記錄膀胱灌注期間大鼠基礎膀胱內壓、排尿時膀胱最大壓力、排尿間隔時間、排尿時膀胱收縮時間等尿動力學指標。

2.4 實驗分組及干預方法

將大鼠按隨機數字表法隨機分為4組：模型組、三陰交組、合谷組、中髎（次髎）組，每組各10只。造模成功后各組進行相應的干預：①模型組：不給予干預；②三陰交組：垂直進針3-4 mm；③合谷組：垂直進針1-1.5 mm；④中髎（次髎）組：垂直刺入第2 骶后孔，深度約15 mm。

各針刺組均采用手法運針5 min，提插（頻率80-120次·min-1），捻轉（頻率80-120次·min-1，每隔10 min進行上述的手法操作，共計3 次。同時打開Chart7 軟件以實時記錄尿動力學數據。

2.5 取穴

①三陰交：于后肢內踝尖直上10 mm左右[12]；②合谷：于前肢第一、二掌骨之間[12]；③中髎（次髎）：因大鼠只有三對骶后孔[13]，并以第2 骶神經對膀胱功能的調控為主[14]，所以大鼠第2 骶后孔相當于人類的中髎和次髎穴，其中髎（次髎）在第2、3 骶骨棘突間隙正中旁開約5 mm[15]。

2.6 統計學方法

本研究采用Chart 7 軟件記錄排尿時膀胱收縮時間、最大逼尿肌收縮壓、排尿間隔時間、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓等圖形轉化為數據。采用SPSS23.0 軟件進行統計分析。實驗數據均為正態分布的計量資料，以均數±標準差（xˉ±s）表示。各組數據自身前后比較采用配對t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，繼以SNK 檢驗做兩兩比較。以P ＜0.05 作為差異具有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 大鼠正常生理狀態與AUR狀態尿動力學比較

AUR 狀態下，模型組大鼠基礎膀胱內壓遠高于正常基線（P ＜0.01），說明尿潴留現象存在，造模成功；與正常基線相比，模型組最大逼尿肌收縮壓下降（P ＜0.01），說明尿潴留后逼尿肌收縮能力下降；收縮后膀胱內壓高于正常基線（P ＜0.01），說明膀胱收縮后膀胱內仍存大量殘余尿；排尿閾值壓亦上升（P ＜0.05）；排尿間隔時間遠長于正常基線，但其膀胱收縮時間未見顯著差異（P ＞0.05）（表1）。

3.2 針刺對各組AUR大鼠最大逼尿肌收縮壓、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓的影響

AUR 狀態下，針刺前各組大鼠最大逼尿肌收縮壓、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓與模型組相比差異無統計學意義（P ＞0.05），說明各組具有可比性。針刺治療后，三陰交組、中髎（次髎）組最大逼尿肌收縮壓較針刺前明顯升高（均P ＜0.01），收縮后膀胱內壓較針刺前明顯減少（均P ＜0.01），排尿閾值壓未見明顯變化（P ＞0.05）；兩組組間比較，最大逼尿肌收縮壓、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓未見顯著差異（P ＞0.05）；合谷組最大逼尿肌收縮壓、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓未見明顯變化（P ＞0.05）（表2）。

表1 大鼠正常生理狀態與AUR狀態尿動力學比較（xˉ±s，n=10）

3.3 針刺對各組AUR大鼠排尿時膀胱收縮時間、排尿間隔時間的影響

AUR 狀態下，針刺前各組大鼠排尿時膀胱收縮時間、排尿間隔時間與模型組相比差異無統計學意義（P ＞0.05），說明各組具有可比性。針刺治療后，三陰交組、中髎（次髎）組排尿時膀胱收縮時間較針刺前增加（均P ＜0.05），排尿間隔時間縮短（均P ＜0.01）；兩組組間比較，排尿時膀胱收縮時間、排尿間隔時間未見顯著差異（P ＞0.05）；合谷組排尿時膀胱收縮時間、排尿間隔時間未見顯著差異（P ＞0.05）（表2）。

4 討論

目前，國際上普遍認為AUR多由于下尿路機械性梗阻突然加重，尿液不能排出，膀胱過度充盈導致盆神經和陰部神經電活動減低以及逼尿肌收縮力下降而引起[16,17]。因此，本實驗中急性尿潴留模型參照文獻[11]所建立膀胱過度充盈模型進行，采用結扎大鼠外尿道造成梗阻，同時予生理鹽水進行膀胱灌注導致膀胱過度充盈進行制備。造模后模型組大鼠基礎膀胱內壓遠高于正常基線，與文獻報導[11]一致，說明尿潴留現象存在，造模成功。

表2 針刺對AUR大鼠尿動力學指標的影響（xˉ±s；n=10）

本實驗研究結果顯示，與正常基線相比，模型組最大逼尿肌收縮壓下降，收縮后膀胱內壓、排尿閾值壓升高，排尿間隔時間延長，與以往文獻報道[16]一致，這可能與AUR大鼠膀胱過度充盈導致膀胱炎癥滲出、上皮調亡細胞增多,盆神經和陰部神經電活動減低、逼尿肌收縮能力下降有關[17-20]。

既往實驗研究表明[22,23]AUR 損害最嚴重集中在尿潴留及排空后的l-4 h，故本實驗在設計上主要觀察其AUR 造模后膀胱功能受損最嚴重的時間段,以排尿時膀胱收縮時間、最大逼尿肌收縮壓、排尿間隔時間、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓為觀察指標，目的在于試圖證實針刺在AUR 受損最嚴重時段對其膀胱功能的調節作用。從實驗結果看，針刺干預后，三陰交組、中髎（次髎）組與針刺前相比，最大逼尿肌收縮壓明顯升高，收縮后膀胱內壓明顯減少，排尿時膀胱收縮時間增加，排尿間隔時間縮短；合谷組最大逼尿肌收縮壓、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓、排尿時膀胱收縮時間、排尿間隔時間均未見顯著差異。說明針刺在AUR 受損最嚴重時段對其膀胱功能有一定的調節作用，且這種調節作用可能與所選穴位的位置有關。

在本實驗中，我們選取的中髎/次髎穴位于腰骶部,適對S3/S2骶后孔,從神經節段位置看，其深處有S3/S2 神經根前支。相關研究[24]表明,當大鼠逼尿肌處于相對靜止狀態時，針刺上述腧穴可起到興奮作用，但其深度必須達到骶神經根前支位置（因大鼠只有3 對骶后孔,我們刺激到的骶神經根前支為S2,相當于人類的S2/S3）才能達到良好的調節膀胱功能的效應。三陰交穴位于脛骨的內側面，從神經節段位置看其感覺神經由L4的隱神經分布，而其運動神經由L5及S1支配，深處有脛后神經[25]。針刺與膀胱同神經節段但遠離病變部位穴位三陰交及同神經節段且相鄰病變部位的穴位中髎（次髎）都使AUR大鼠最大逼尿肌收縮壓升高，收縮后膀胱內壓減少，排尿時膀胱收縮時間延長，排尿間隔時間縮短，這可能與三陰交、中髎（次髎）與低位的骶髓排尿中樞多有重疊有關。而合谷穴在手背第一、二掌骨之間，略近于第二掌骨中點處，其下有橈神經淺支、尺神經深支分布[26]，其神經分布與排尿中樞及膀胱神經節段無重疊，對膀胱調節效應不大。

在本研究中，三陰交組與中髎（次髎）組針刺后排尿時膀胱收縮時間、最大逼尿肌收縮壓、排尿間隔時間、排尿閾值壓、收縮后膀胱內壓未見顯著差異，這可能與三陰交、中髎（次髎）的神經節段均與骶髓排尿中樞多有重疊有關。由于本實驗尚未對針刺后神經電活動進一步探查，故深刺三陰交、中髎（次髎）后逼尿肌的肌電活動、盆神經傳入電活動是否有顯著差異有待于進一步研究。

綜上所述，針刺治療AUR大鼠效應具有穴位特異性，主要是通過刺激相關神經節段腧穴從而使AUR大鼠最大逼尿肌收縮壓升高、收縮后膀胱內壓減少、排尿時膀胱收縮時間增加、排尿間隔時間縮短，這也提示我們今后臨床選擇治療與膀胱相關的疾病時，可以選擇與膀胱神經節段相關的腧穴來提高臨床療效。