外周血miR-197表達水平與子宮肌瘤患者病情及治療效果的相關性研究

楊 詠

重慶醫科大學附屬南川人民醫院婦科，重慶市 408400

子宮肌瘤是婦科常見的一種不同年齡段女性均能患病的生殖系統良性腫瘤，育齡期婦女的患病率超過25%，而圍絕經期婦女的患病率更是高達40%以上[1]。子宮肌瘤可引起子宮異常出血，腫瘤體積過大時可產生腹痛和壓迫癥狀，嚴重時甚至導致不孕[2]。目前臨床上治療子宮肌瘤的藥物療效不佳，主要還是以手術切除為主,考慮到部分患者的生育需求或心理因素，手術方法以子宮肌瘤剔除術為主。最近，有研究報道了miRNAs可以調控腫瘤細胞的增殖、遷移以及凋亡，并受雌激素的調節，在子宮肌瘤的發生發展中具有重要功能[3]。miR-197已被多項研究證實在胃癌、肝癌、乳腺癌等多種腫瘤疾病中具有特異性高/低表達[4-5]。而在子宮肌瘤中，miR-197被報道在腫瘤組織中具有特異性低表達[6]，但是miR-197在子宮肌瘤患者外周血中的表達水平及其與患者病情和治療效果的相關性還未有報道。本研究通過對比100例子宮肌瘤患者術前、術后以及與對照組間miR-197表達水平的差異，來探究其在該病中的意義，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2016年9月—2018年9月于我院婦科就診的100例子宮肌瘤患者作為觀察組。子宮肌瘤的診斷符合《婦產科學》[7](第8版)中的診斷標準。納入標準：(1)年齡≥18歲；(2)經期規律；(3)符合行子宮肌瘤剔除術的手術指征；(4)最近1個月內沒有使用過激素藥物治療。排除標準：(1)合并有其他惡性腫瘤；(2)合并有子宮內膜異位；(3)合并有子宮腺肌病；(4)合并其他重要臟器的功能不全；(5)合并嚴重的代謝性疾病；(6)存在心理障礙。觀察組年齡21～50歲，平均年齡(36.78±7.14)歲，病程4個月～3年，平均病程(2.16±0.68)年。選取同期于我院體檢的100例健康婦女作為對照組，年齡20～50歲，平均年齡(35.94±8.26)歲。兩組年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有較好的可比性。

1.2 外周血miR-197表達水平檢測 所有研究對象于清晨同一時間抽取空腹狀態下肘部靜脈血2ml，1 500rpm轉速離心5min后取上層血清，用trizol試劑(美國invitrogen公司)提取外周血總microRNAs，后使用miRNA逆轉錄試劑盒(日本takara公司)按步驟說明書逆轉錄后加入miR-197上下游引物進行實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)， 讀取各樣本的Ct值。

1.3 腫瘤組織切片ER免疫組化 觀察組患者經子宮肌瘤剔除術后切除腫瘤組織，使用快速冰凍切片對腫瘤組織雌激素受體(ER)進行免疫組化染色，染色的強度評分為：無明顯著色計1分，淺棕色計2分，深棕色計3分；光鏡下隨機選取觀察窗，無陽性染色細胞計0分，陽性染色細胞占視野下不超過1/4計1分，陽性染色細胞占視野下不超過1/2計2分，陽性染色細胞占視野下超過1/2計3分，ER得分=染色強度總分×陽性細胞比例得分[8]。

1.4 子宮體積和子宮肌瘤體積測量 測量觀察組患者治療前、后子宮體積和子宮肌瘤體積大小，患者手術前、后經陰道彩超測量子宮或腫瘤的長(cm)、寬(cm)、高(cm)，體積=長×寬×高(cm3)。

1.5 統計學方法 所有數據均采用SPSS20.0軟件進行分析，計量資料采用均數±標準差表示，兩組數據間的比較采用student-t檢驗，采用Pearson相關性分析。當P<0.05時認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療前兩組患者外周血miR-197水平和子宮體積比較 治療前，觀察組患者的外周血miR-197水平明顯低于對照組，子宮體積明顯大于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。相關性分析顯示，患者外周血miR-197水平與子宮體積無明顯相關性(r=-0.43，P=0.541)。

表1 治療前兩組患者外周血miR-197水平和子宮體積比較

2.2 觀察組治療前、后外周血miR-197水平和子宮體積比較 觀察組患者治療后外周血miR-197水平明顯高于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)；觀察組患者治療后子宮體積明顯小于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組治療前、后外周血miR-197水平和子宮體積比較

2.3 觀察組外周血miR-197水平與腫瘤體積及ER相關性 觀察組治療前外周血miR-197平均水平為0.74±0.12，腫瘤體積為(63.24±21.04)cm3，ER評分為(12.72±4.83)分，Pearson相關性分析顯示患者外周血miR-197表達水平與ER表達水平呈負相關(r=-0.67，P=0.012)，與腫瘤體積大小呈負相關(r=-0.58，P=0.034)。

3 討論

子宮肌瘤作為各年齡段女性的高發性疾病，其確切的病因和發病機制還沒有被完全闡明，主流學說認為子宮肌瘤是一種性激素(雌激素和孕激素)依賴性的良性腫瘤，主要是與雌激素和孕激素的水平不穩定，產生較大的波動有關系[9]。大量的臨床研究、基礎實驗以及循證醫學研究顯示雌孕激素可以促進腫瘤細胞的增殖和遷移能力[10-11]。動物實驗報道了異種移植的平滑肌瘤小鼠模型中雌激素和孕激素都是腫瘤細胞增殖以及分泌細胞外基質(ECM)所必需的物質，另外雌激素和孕激素還可以調控各種細胞因子、炎癥因子的相互作用[12]。通過對比分析子宮肌瘤患者切除的腫瘤組織的冰凍切片顯示，腫瘤組織中雌激素受體和孕激素受體的表達水平均明顯高于正常子宮肌層組織，且激素受體的表達水平越高，腫瘤的生長速度越快[13]。臨床研究報道了藥物治療的子宮肌瘤患者，腫瘤體積的縮小比例和ER免疫組化呈陽性的細胞百分比呈明顯的正相關性[14]。有一項研究報道了處于妊娠期的子宮肌瘤患者，腫瘤組織中的ER表達水平與正常肌層組織中的ER表達水平無明顯差異，而PR表達量明顯高于正常肌層組織，這一結果解釋了妊娠期子宮肌瘤的腫瘤體積不會持續增大的原因是ER的低表達，使腫瘤細胞對雌激素的敏感性差，腫瘤細胞的增殖受阻[15]。因此，雌激素是子宮肌瘤發生發展的必需條件。在本次研究結果中，Pearson相關性分析顯示患者外周血miR-197表達水平與ER表達和腫瘤體積大小均呈負相關(P<0.05)。這表明子宮肌瘤患者外周血miR-197表達水平是可以反映患者病情的有效指標之一。

已有多項研究證實miRNAs在子宮肌瘤以及子宮平滑肌細胞中廣泛表達并對腫瘤的生長具有重要的正性/負性調節作用。miR-197是眾多miRNAs中的一員，且已被報道其參與細胞的多種生物學功能，尤其是參與了多種腫瘤疾病的發病過程。細胞學實驗證實，miR-197可以通過調控上皮—間充質轉化(EMT)來抑制乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲[16]。miR-197在甲狀腺濾泡癌中的表達水平明顯高于其他類型的甲狀腺癌[17]。在子宮肌瘤中，miR-197在腫瘤組織中的表達水平明顯低于周圍正常的肌組織[6]，該研究表明miR-197與子宮肌瘤的發病過程密切相關，但是檢測腫瘤組織中的miR-197表達水平過程復雜，不易實現，限制了miR-197的臨床應用潛能。在本次研究中，子宮肌瘤患者的外周血miR-197表達水平明顯低于正常對照人群，且腫瘤組織體積越大，ER表達水平越高，miR-197的表達水平越低。而手術后，患者的外周血miR-197表達水平明顯升高，這些結果均說明外周血miR-197表達水平在一定程度上可以反映子宮肌瘤患者的腫瘤大小、ER表達水平，且治療后患者外周血miR-197水平明顯升高，是患者病情及治療的良好觀察指標，值得在臨床上推廣應用。