超聲提取-HPLC法快速檢測(cè)牡丹籽油中苯并[ɑ]芘

□ 陳 軍 深圳市測(cè)達(dá)農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)有限公司

苯并[ɑ]芘是一種高活性間接致癌物，被歐盟食品科學(xué)委員會(huì)（SCF）推薦作為評(píng)價(jià)PAHs致癌性的標(biāo)記物[1]。牡丹籽油中BaP的主要來(lái)源是植物生長(zhǎng)過(guò)程中吸收和富集工業(yè)廢氣與車(chē)輛尾氣排放的顆粒物污染，以及晾曬油料種子、加工過(guò)程中的熱處理和提取等環(huán)節(jié)[2]。目前主要的提取技術(shù)有溶劑萃取、固相萃取、凝膠色譜等[3]，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有GB/T 5009.27-2016、GB/T 22509-2008等，這些標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)籌所有實(shí)驗(yàn)室條件，不太符合基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)際所面臨的情況，實(shí)用性不高，因此，探尋更為簡(jiǎn)便、快速、適合于基層實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法具有重要意義和價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

Agilent1260、自動(dòng)進(jìn)樣器和FLD；KQ5200E可控溫超聲波振蕩提取器；YS2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。

1.1.2 試劑

乙腈、甲醇、正己烷、石油醚。

1.1.3 樣品

牡丹籽油（由深圳市南山區(qū)農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)配送中心提供）。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

稱(chēng)取0.4 g油樣于50 mL比色管中，加入30 mL乙腈，渦旋混勻，于50℃水浴超聲提取2.5 h，取出轉(zhuǎn)入100 mL濃縮瓶中，45 ℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1 mL左右待凈化。

用30 mL正己烷活化中性氧化鋁柱，將待凈化液轉(zhuǎn)入柱子，收集凈化液，再用60 mL正己烷洗脫，收集合并凈化液，將凈化液于40 ℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1 mL左右，轉(zhuǎn)入氮吹管40 ℃氮吹至近干，用1 mL乙腈渦旋復(fù)溶，過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜，待上機(jī)。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

取濃度為100 μg/mL的BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇逐級(jí)稀釋得到0.1 μg/mL的BaP標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別取0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL使用液于棕色10 mL容量瓶，稀釋定容即得1.0、5.0、10、20、30、50 μg/L標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線梯度。

表1 流動(dòng)相選擇參數(shù)情況表

圖1 BaP標(biāo)準(zhǔn)曲線

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

分別對(duì)比了V乙腈/V水為97∶3、90∶10、80∶20時(shí)目標(biāo)峰的出峰時(shí)間、峰型、峰面積，具體參數(shù)情況見(jiàn)表1。

經(jīng)過(guò)表1比較分析當(dāng)V乙腈/V水=90∶10時(shí)，BaP的峰與樣品基質(zhì)雜峰完全分離，出峰時(shí)間較短，峰型呈正態(tài)分布，峰面積有利于積分定量。

2.1.2 苯并芘標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

在 1～50 μg/L 濃 度 梯 度 范 圍內(nèi)，以標(biāo)準(zhǔn)系列濃度的峰面積為縱坐標(biāo)，其濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為y=0.986 774 13x+0.050 982，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，BaP峰面積與質(zhì)量濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系見(jiàn)圖1，可用于BaP的定量檢測(cè)。

表2 樣品凈化條件優(yōu)化

表3 牡丹籽油的加標(biāo)回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

2.2 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.2.1 提取條件的優(yōu)化

采用恒溫加熱超聲提取的方法進(jìn)行樣品處理，并對(duì)提取的條件參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，主要設(shè)計(jì)參數(shù)有提取劑W（乙腈、甲醇、正己烷、石油醚）、溫度C（30、40、50、60 ℃）和提取時(shí)間h（0.5、1.5、2.5、3 h）。對(duì)W、C、h這三個(gè)參數(shù)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)和方差分析，以目標(biāo)物的提取效率為考察標(biāo)準(zhǔn)，綜合結(jié)果發(fā)現(xiàn)BaP在乙腈作為提取劑，溫度50 ℃，提取時(shí)間為2.5 h時(shí)提取效率最高。

2.2.2 凈化條件的優(yōu)化

結(jié)合成本和凈化效果，本方法主要對(duì)比了中性氧化鋁柱、分子印跡柱和Florisil-SPE柱的凈化效果，以目標(biāo)物的加標(biāo)回收率為考察指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知：樣品經(jīng)過(guò)中性氧化鋁柱和分子印跡柱的回收率比Florisil-SPE柱要高，結(jié)合洗脫試劑的毒性、批量實(shí)驗(yàn)和回收率穩(wěn)定性，本方法采用中性氧化鋁柱作為凈化柱。

2.3 方法參數(shù)指標(biāo)的核準(zhǔn)

2.3.1 方法的檢出限和定量限

本實(shí)驗(yàn)采用3倍信噪比來(lái)計(jì)算方法檢出限（LOD，S/N=3）,10倍信噪比計(jì)算定量限（LOQ，S/N=10），測(cè)得為L(zhǎng)OD 0.1 μg/kg，LOQ 為 0.4 μg/kg。

2.3.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

選取陰性樣品加入高中低三個(gè)濃度的BaP目標(biāo)物，進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）,具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知：在曲線濃度添加范圍內(nèi)，BaP的平均回收率為86.21%～105.66%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.49%～4.13%，表明方法的準(zhǔn)確度和精密度良好，可以滿(mǎn)足定量測(cè)定要求。

2.4 方法應(yīng)用和樣品檢測(cè)

采用本方法測(cè)定了南山農(nóng)批市場(chǎng)中20家成品牡丹籽油樣品，其中16個(gè)樣品中的BaP低于方法檢出限，4個(gè)樣品約有檢出，但低于我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2762-2012規(guī)定食用油中BaP的限量 10 μg/kg。

3 結(jié)論

本文建立了超聲提取-HPLC法快速檢測(cè)牡丹籽油中苯并[ɑ]芘的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法的加標(biāo)回收率為86.21%～105.66%，最低檢出限為0.1 μg/kg，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)食用油中苯并[ɑ]芘的檢測(cè)要求，該方法簡(jiǎn)優(yōu)化了樣品的提取和凈化過(guò)程，使得樣品能夠批量處理，節(jié)省了檢測(cè)成本，提高了檢測(cè)效率，對(duì)大部分基礎(chǔ)檢測(cè)機(jī)構(gòu)測(cè)定牡丹籽油中的苯并[ɑ]芘具有一定的參考價(jià)值。