高效液相色譜示差法測定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖

□ 張銳波 呂亞寧 廣東東方縱橫檢測有限公司

1 材料與方法

1.1 實驗試劑

利用高效液相色譜示差法來測定蜂蜜中果糖、葡萄糖和蔗糖的含量，需要利用這三種糖類的標準品，還需要兩種融合劑：乙腈和去純水。值得注意的是，這里的水是去離子水，是反滲透去離子水純水機制造出來的。

表1 不同質量樣品溶解在水中的測定結果及相對偏差

1.2 實驗儀器

該實驗用到的實驗儀器有2695-2414型高效液相色譜儀、碳水化合物分析柱、RO DI型反滲透去離子純水機。

1.3 測定方法

實驗開始之后，要分別取果糖、葡萄糖、蔗糖標準品各5 g，取樣的時候每種標準品都需要精確到0.000 1 g，將這三種標準品加入60 mL水進行溶解，再用乙腈定容到100 mL，并搖勻作為標準母液[1]。取4支10 mL容量瓶，分別向其中注入1、2、3、4 mL標準母液，再用乙腈水溶液定容到刻度，配制成含有果糖、葡萄糖、蔗糖的標準溶液，其含量分別是5、10、15、20 mg/mL。

樣品將采用兩種方法進行處理。第一種直接采用純水進行處理，首先取0.5～3 mL的均勻樣品放入25 mL比色管中，值得注意的是，取樣一定要精確至0.000 01 g。因為蜂蜜有時候會出現結晶狀態，對于有結晶的蜂蜜樣品可以采取加入水后，再放入40～50 ℃的溫水中進行振蕩溶解，溶解過后再下降到室溫進行定容，定容到刻度再經0.45 μm濾膜過濾，之后再由液相測譜儀進行測定。而那些結晶的蜂蜜可以加去離子水進行溶解。第二種方法是采用乙腈混合液進行處理，取出0.5～1 g樣品放入25 mL的比色管中，這次取樣也需要精確到0.000 1 g，再用乙腈混合液進行定容，然后再利用液相色譜進行測定，測定前也需要經過過濾。

2 結果分析

2.1 樣品在純水溶液中測定的結果分析

對同一樣品分別取出0.5～3 g，然后用純水定容至刻度，測驗結果見表1。

從表1的數據可以看出，利用水當溶劑是非常可取的，因為可以避免溶液出現分離現象，如果溶液分離可能會導致提取不徹底。利用水當溶劑來提取這三種糖類，測定的結果具有穩定性。

2.2 樣品在不同溶液中溶解比較

蜂蜜能溶于水，卻不能完全溶于乙腈溶液，所以說在利用乙腈-水混合液來對樣品進行溶解的時候，必須要做到完全溶解才能對樣品進行測定[2]。

3 結論

該實驗通過利用高效液相色譜示差法來對蜂蜜中的葡萄糖、果糖和蔗糖進行測定，通過實驗對比，筆者發現將樣品溶于水之后，再用乙腈進行定容，既能快速提取蜂蜜中的這三種糖類物質，又能保證數據的準確性。