基于尿pH 研究麻黃對高尿酸血癥模型大鼠血尿酸的影響

應帥兵 黃繼勇

高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）是以血尿酸（serum uric acid，SUA）水平升高為特征的代謝性疾病，是痛風、高血壓、高血脂、糖尿病和代謝綜合征等病的獨立危險因素[1-2]。常用藥物別嘌醇、非布司他、苯溴馬隆等控制尿酸水平不僅存在長期用藥的管理問題，更有皮膚黏膜、消化系統、肝腎功能損害等嚴重的不良反應[3]。中藥穿山龍、車前草等均有降尿酸作用，但其降尿酸水平有限[4-5]。麻黃辛溫解表，具有宣肺利水功效。黃柏善清下焦濕熱，具有瀉腎功效。本研究通過灌胃次黃嘌呤（hypoxanthine，HX）和腹腔注射氧嗪酸鉀（oteracil potassium，OP）聯合法建立HUA 模型，并予麻黃、黃柏水煎液干預，與別嘌醇進行比較，以尿pH 和腎功能變化為切入點，評估麻黃及黃柏降尿酸的效果及其機制，報道如下。

1 實驗材料

1.1 動 物 健康雄性SD 大鼠30 只，5 周齡，體質量（200±20）g，購自上海斯萊克有限責任公司，許可證號：SCXK（滬）2017-0005，合格證號：0345203，飼養于浙江中醫藥大學動物實驗中心，許可證號：SYXK（浙）2018-0012，飼養環境：全封閉隔離飼養，溫度范圍20℃～25℃，相對濕度范圍40%～60%，每天光照12h。本實驗符合動物實驗倫理相關要求（實驗動物管理與倫理審查決議編號：ZSLL-2018-036）。

1.2 主要藥品與試劑 次黃嘌呤（Amresco 公司，批號20180121），氧嗪酸鉀（Sigma 公司，批號S27869-095），麻黃和黃柏（浙江中醫藥大學中藥飲片廠，批號20180310），別嘌醇片（重慶科瑞制藥，批號H50020455，規格：0.1g/片），尿酸測定試劑盒、肌酐測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20180314、20180321）；

1.3 主要儀器 多功能酶標儀；pH 計；日立7020 全自動生化分析儀（日本日立公司產品）。

2 實驗方法

2.1 藥物混懸液配置 HX 混懸液：HX 溶于3%可溶性淀粉溶液配置成25mg/mL 混懸液，OP 混懸液：OP 溶于生理鹽水配置成80mg/mL 混懸液；別嘌醇片混懸液：取別嘌醇片溶于無菌蒸餾水配置成1mg/mL；中藥水煎液：取麻黃、黃柏各100g，麻黃水煎液濃縮至2g/mL，使用時蒸餾水稀釋至0.05g/mL，黃柏水煎液濃縮至0.1g/mL，使用時用蒸餾水稀釋至0.1g/mL。置冰箱內保存。

2.2 模型制備及處理 大鼠適應性養殖1 周后按隨機數字法分為正常組、模型組、麻黃組（0.5g/kg）、黃柏組（1.0g/kg）、別嘌醇組（200mg/kg），每組6 只。所有大鼠均予基礎飼料，自由采食飲水。除正常組外，其余各組大鼠選用尿酸前體物質HX 和尿酸酶抑制劑OP 聯合建立HUA 模型[6]，每間隔24h 灌服HX 500mg·kg-1·d-1，腹腔注射OP 200mg·kg-1·d-1，連續灌胃1 周后建立HUA 模型。模型標準：（1）精神狀態：精神不振，閉眼發呆；（2）外形：皮毛松亂、脫落，無光澤，皮膚灰污；（3）SUA：造模第7 天，給藥6h 后內眥靜脈采血，3500r/min 離心15min，取血清測定SUA，與正常組比較SUA 水平檢驗造模成功與否[7]。造模成功后，除正常組外各組繼續灌胃HX 和腹腔注射OP，以60kg 體質量成人用量麻黃6g，黃柏12g 換算大鼠生藥給藥劑量分別為0.5g·kg-1·d-1和1.0g·kg-1·d-1，別嘌醇給藥劑量為200mg·kg-1·d-1。按20mL/kg 灌胃量配置不同濃度的藥物：別嘌醇組2mg/mL；麻黃組濃度0.05g/mL，黃柏組0.1g/mL；同時正常組和模型組予以20mL·kg-1·d-1蒸餾水灌胃。各組大鼠分籠飼養，給藥時間1 周，每天固定時間段內進行灌胃操作，期間所有大鼠標準飲食，自由飲水。

2.3 指標檢測 （1）一般情況：每天觀察各組大鼠毛色、體質量（body weight，BW）、飲食、體態、靈敏度和精神狀況；（2）肝臟指數（liver index，LI）、腎臟指數（kidney index，KI）：禁食24h 后稱重，在10%水合氯醛按0.3mL/100g 體質量標準行腹腔注射麻醉，解剖腹腔分離大鼠左側腎臟，于腎門處剪斷腎蒂，快速剝離腎臟包膜后以濾紙吸干并稱重，計算KI；分離大鼠肝臟，濾紙吸干稱重，計算LI。KI=[腎臟質量（g）/體質量（g）]×100%，LI=[肝臟質量（g）/體質量（g）]×100%；（3）生化指標SUA 和SCr 檢測：經腹主動脈收集血液標本，離心取血清，酶比色法SUA 測定，具體操作步驟按試劑盒說明進行；肌氨酸氧化酶法測定SCr，具體操作步驟按試劑盒說明進行；（4）尿量和尿液pH：處死前24h 將大鼠放入代謝籠，禁食收集尿液，離心取上清液用pH 計測定尿pH。

2.4 統計學方法 應用SPSS19.0 統計軟件進行統計學分析，所有數據先進行正態性檢驗和方差齊性檢驗，正態分布及滿足方差齊性的計量資料以均數±標準差（s） 表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），不符合條件數據進行非參數檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠一般情況、BW、KI 及LI 比較 正常組大鼠精神狀態良好、毛色光澤、尿量正常，糞便成麥粒狀，模型組大鼠在實驗期間均表現出精神萎靡、毛發無光澤易脫落、多尿、便稀等癥狀，治療組有類似表現。造模前各組大鼠體質量差異無統計學意義（P＞0.05），2 周后，與正常組比較，各組大鼠BW 增長緩慢。與正常組比較，模型組和別嘌醇組大鼠KI 較大（P＜0.05），麻黃組和黃柏組大鼠KI 明顯偏大（P＜0.01）。與模型組比較，麻黃組大鼠KI 較大（P＜0.05），黃柏組和別嘌醇組大鼠差異無統計學意義（P＞0.05）。各組大鼠LI 差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠BW，KI 及LI 比較（%

表1 各組大鼠BW，KI 及LI 比較（%

注：與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05；BW：體質量；KI：腎臟指數；LI：肝臟指數

組別正常組模型組別嘌醇組麻黃組黃柏組鼠數6 6 6 6 6 BW（g）222.50±6.89 198.67±17.2△△205.33±10.23△196.67±15.06△△204.67±5.65△KI 0.90±0.05 1.10±0.07△1.07±0.04△1.28±0.17△△*1.18±0.14△△LI 3.27±0.12 3.28±0.28 3.23±0.14 3.30±0.33 3.24±0.30

3.2 各組大鼠SUA 和SCr 水平比較 與正常組大鼠比較，模型組大鼠SUA 水平明顯升高（P＜0.01)，別嘌醇組、麻黃組和黃柏組大鼠差異無統計學意義（P＞0.05）。與模型組大鼠比較，別嘌醇組、麻黃組及黃柏組大鼠SUA 水平明顯降低，麻黃組大鼠降尿酸效果與別嘌醇組、黃柏組大鼠比較差異無統計學意義（P＞0.05）。各組大鼠SCr 差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠SUA 和SCr 水平比較（

表2 各組大鼠SUA 和SCr 水平比較（

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01；SUA：血清尿酸；SCr 血清肌酐

組別正常組模型組別嘌醇組麻黃組黃柏組鼠數6 6 6 6 6 SUA（mmol/L）40.66±16.77 77.96±19.40△△46.89±9.90**42.05±8.23**51.13±13.86**SCr（μmol/L）59.41±28.00 75.61±7.07 65.76±9.85 70.75±6.81 88.00±10.90

3.3 各組大鼠尿量和尿pH 比較 各組代謝籠收集24h 尿液外觀與氣味比較無明顯差別。與正常組比較，各組大鼠尿量均明顯增加（P＜0.01）。與模型組比較，各組大鼠尿量差異無統計學意義（P＞0.05）。經pH計測定各組大鼠尿pH：與正常組比較，別嘌醇組和黃柏組大鼠尿pH 增加呈堿性（P＜0.05），麻黃組大鼠尿pH 增加顯著（P＜0.01）。與模型組比較，麻黃組大鼠尿pH 較高（P＜0.05），其余各組大鼠尿pH 差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 各組大鼠尿量和尿pH 水平比較

表3 各組大鼠尿量和尿pH 水平比較

注：與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05

組別正常組模型組別嘌醇組麻黃組黃柏組鼠數6 6 6 6 6尿量（mL）7.00±2.30 29.50±5.25△△31.17±15.37△△26.83±15.13△△34.33±4.27△△尿pH 值6.52±0.92 6.82±0.40 7.55±0.83△7.67±0.58△△*7.63±0.73△

4 討 論

HUA 病機與高脂血癥、代謝綜合征相似，多為痰濁所致，與水液代謝失常有關。HUA 治法以祛邪通絡為主，用藥貴在宣通疏泄。臨床上使用麻黃連翹赤小豆湯治療HUA[8]。麻黃生物堿（如：LEP、DPEP、LMEP）是君藥麻黃發揮治療效果的必需活性成分[9]。藥理研究表明，麻黃堿和偽麻黃堿通過降低IL-21 水平減輕腎小管上皮細胞損傷，通過改善胰島素抵抗，代謝綜合征等途徑發揮降血糖、降血脂和抗氧化作用[10-11]。本實驗結果顯示，單味麻黃可以通過堿化尿液發揮降低HUA 大鼠SUA 水平的作用，且效果與別嘌醇和黃柏差異無統計學意義。本實驗麻黃用量選取臨床常用劑量6g，探究不同濃度麻黃對尿酸的效果具有巨大潛力。

中藥治療HUA 的機制多從黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）尿酸轉運蛋白1（uric acid transporters，URAT1）入手，如土茯苓根莖，虎杖，川芎和姜黃抑制XO 的活性減少尿酸生成，而山藥，梔子和草本植物通過調節URAT1 的表達影響尿酸的重吸收[5，12-18]。臨床使用碳酸氫鈉和枸櫞酸鈉藥物調節尿pH 而增加尿酸溶解，進而抑制尿酸重吸收，但過度堿化可導致磷酸鈣、碳酸鈣等結石形成，因此調節尿pH 在適當范圍內對于增加尿酸排泄和預防尿酸性腎結石具有重要意義。已有研究表明，黃柏可以降低SUA 水平，其機制與抑制URAT1 和其mRNA 表達水平，抑制小鼠肝臟XO 活性相關[19]。本實驗結果顯示，黃柏降尿酸的效果與既往研究結果一致。實驗結果還顯示，黃柏組尿pH 與模型組無顯著差異，麻黃組尿pH 大于模型組，說明藥物影響尿酸代謝與堿化尿液有關，而尿液pH 范圍與增加尿酸排泄的關系需進一步研究。

SUA 升高同樣可引起腎臟病變，持續尿酸鈉晶體沉積于腎小管—間質可引起尿酸性腎病[20]。本實驗結果顯示，除正常組外各組均有不同程度的腎臟肉眼改變，腎臟表面出現邊界清楚，形狀不規則的白色斑塊，與正常組比較各組KI 升高，因此藥物干預對于腎臟病變有一定的影響。

本實驗結果顯示，麻黃可以顯著降低SUA 水平，且作用效果較別嘌醇與黃柏無顯著差異，其機制可能與堿化尿液有關。