不同干燥方法的當歸藥材中指標成分含量測定△

李旭，李成義，強正澤，何軍剛，祝健鴻，李波，李碩，王燕，鄭貴森

甘肅中醫藥大學 藥學院，甘肅 蘭州 730000

當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經，具有補血活血、調經止痛、潤腸通便的功效[1]。當歸所含化學成分復雜，主要有苯酞類、有機酸、多糖等[2-3]。其藥理作用廣泛，表現在對呼吸、循環、免疫、神經等多個系統的作用，如當歸中的成分阿魏酸具有抗血小板凝集、抗血栓形成、保護心肌等作用，苯酞類成分具有抗腫瘤活性、鎮痛、解痙、降壓、抗炎等作用[4-8]。因此，本研究通過HPLC同時測定當歸中有機酸(綠原酸、阿魏酸)和苯酞類物質(洋川芎內酯A、正丁基苯酞、Z-藁本內酯)的含量，對不同干燥處理后的當歸藥材進行分析比較，以期為現代干燥方法的應用提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

101型電熱鼓風干燥箱(北京科偉永興儀器有限公司)；熱泵干燥設備(天士力中天藥業)；CEM SAM-255微波干燥箱(美國CEM公司)；DAF-6020型真空干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；Agilent 1100高效液相色譜儀(G13158 DAD檢測器，美國Agilent公司)；KQ-500DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FW177型中草藥粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)；CAV214C型電子天平(美國奧豪斯公司)；BT25S型1/100 000電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)；Milli-Q Century超純水機(德國默克公司)。

1.2 材料

阿魏酸(批號：110753-201718，純度≥99.6%)、綠原酸(批號：110773-201012，純度≥99.3%)均購自中國食品藥品檢定研究院；洋川芎內酯A(批號：62006-39-7，純度≥98%)、正丁基苯酞(批號：6066-49-5，純度≥98%)、Z-藁本內酯(批號：4431-01-0，純度≥98%)均購自北京北納創聯生物技術研究院；乙酸(分析純，煙臺市雙雙化工有限公司，批號：20140103)；甲醇(分析純，批號：20171101)、甲醇(色譜純，批號：20171215)、乙腈(色譜純，批號：20180118)均購自天津市大茂化學試劑廠。

當歸新鮮樣品采自甘肅岷縣同一樣地，經甘肅中醫藥大學藥學院李成義教授鑒定，為傘形科植物當歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的根。將采集的新鮮當歸根隨機分為14份，做不同的干燥處理，得到的干燥藥材粉碎后過50目篩，樣品信息見表1。

表1 當歸樣品信息

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為TC-C18(2)色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈(A)-1%乙酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～25 min，5%～25%A；25～40 min，25%～55%A；40～60 min，55%～80%A)，流速0.6 mL·min-1，檢測波長280 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μL[9]。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱定適量的阿魏酸、綠原酸、洋川芎內酯A、正丁基苯酞于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成質量濃度為0.21、0.25、0.14、0.06 mg·mL-1的混合對照品溶液；取Z-藁本內酯對照品適量，精密稱定，甲醇溶解并定容，配制成質量濃度為3.05 mg·mL-1的Z-藁本內酯對照品溶液。對照品溶液色譜圖見圖1。

2.3 供試品溶液的制備

取當歸藥材粉末1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入20 mL 50%甲醇，精密稱定。超聲提取40 min后冷卻，再以50%甲醇補足減失的質量，搖勻，靜置。取上清液過0.45 μm微孔濾膜，即為供試品溶液。供試品溶液色譜圖見圖1。

注：A.混合對照品溶液；B.Z-藁本內酯對照品溶液；C.供試品溶液；1.綠原酸；2.阿魏酸；3.洋川芎內酯A；4.正丁基苯酞；5.Z-藁本內酯。圖1 對照品和供試品溶液色譜圖

2.4 方法學考察

2.4.1 線性范圍考察 精密吸取混合對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于5 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻。精密吸取Z-藁本內酯對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于5 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻。按2.1項下色譜條件測定。以5個成分的質量濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，得回歸方程，見表2。

表2 5個成分的回歸方程、相關系數及線性范圍

2.4.2 精密度試驗 取S4號樣品約1.0 g，精密稱定，按2.1、2.3項下方法測定，連續進樣6次，計算得5個成分含量的RSD為0.14%～1.65%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩定性試驗 取S4號樣品約1.0 g，精密稱定，按2.1、2.3項下方法測定，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣檢測，計算得5個成分含量的RSD為0.37%～2.83%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.4.4 重復性試驗 取S4號樣品6份，每份約1.0 g，精密稱定，按2.1、2.3項下方法測定，計算得綠原酸、阿魏酸、洋川芎內酯A、正丁基苯酞、Z-藁本內酯的平均質量分數分別為1.06、1.03、0.47、0.25、16.62 mg·g-1，RSD為1.26%～2.53%，表明方法重復性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取S4號樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，對照品加入量與供試品中待測定成分量之比為1∶1，按2.1、2.3項下方法測定，加樣回收率試驗結果見表3。由表中各成分回收率及RSD可以看出，該方法準確度良好。

2.5 樣品含量測定

取14批不同方法干燥的當歸藥材，每批樣品3份，每份約1.0 g，精密稱定，按2.3項下方法制備供試品溶液，2.1項下色譜條件測定，以干燥品計算，測定結果見表4。

表3 5個成分的加樣回收率試驗結果(n=6)

表4 當歸不同干燥品成分測定結果 mg·g-1

注：—表示含量很低。

3 討論

本研究采用HPLC同時測定不同干燥方法處理后當歸藥材的指標成分，發現當歸不同干燥品的指標成分含量存在差異性，同一成分的含量相差數倍。阿魏酸質量分數為0.749 1～1.486 9 mg·g-1，變幅較小，均符合2015年版《中華人民共和國藥典》規定(含阿魏酸不得少于0.050%)，其中，60 ℃熱泵干燥品阿魏酸質量分數最高，為1.486 9 mg·g-1。綠原酸以80 ℃微波干燥的藥材質量分數最高，為2.788 5 mg·g-1。洋川芎內酯A以50 ℃熱泵干燥的藥材質量分數最高，為1.068 2 mg·g-1。正丁基苯酞以40 ℃減壓干燥的藥材質量分數最高，為0.848 1 mg·g-1。Z-藁本內酯以60 ℃熱泵干燥的藥材質量分數最高，為22.270 4 mg·g-1。

干燥方式對當歸藥材外觀性狀的影響集中在表面、斷面顏色和氣味3個方面。熏干當歸表面顏色為棕褐色，其余為淺棕色。低溫干燥(如：陰干、40 ℃烘干、40 ℃熱泵干燥)當歸斷面色多黃白，較高溫干燥則為黃棕色，偶有焦斑，熏干當歸為黃褐色。陰干、低溫干燥、微波干燥、熏干當歸氣味較濃郁，微波干燥、較高溫干燥當歸有焦香味，熏干當歸則為煙熏味。與傳統陰干當歸相比，熱泵干燥和低溫烘干當歸性狀與之最為接近，基于“辨狀論質”觀點，可將此兩種干燥方法作為當歸適宜產地加工干燥方法。

以經濟可行性的角度評價不同干燥方法，陰干、曬干、熏干為自然干燥，無電能消耗，設備干燥總能耗因干燥設備參數及干燥周期的不同而不同。本研究中，烘干、微波干燥、減壓干燥在實驗室小設備中進行，設備輸出功率低，耗電量低。熱泵干燥在產地大型干燥設備中進行，設備輸出功率高，耗電量高。干燥設備規格不一致，上述分析結果存在一定的局限性。從規模化、規范化加工生產的角度分析，自然干燥難以形成規范，微波干燥、減壓干燥仍處在實驗室研究階段，烘干、熱泵干燥具有明顯優勢。

目前市場上流通的當歸以陰干、曬干為主要的加工方式，干燥時間長，易受自然環境因素影響。本研究將熱泵干燥應用于當歸藥材的產地加工，同傳統陰干、曬干相比，具有一定的優勢，耗時短，對指標成分的保留有一定的作用，適用于大規模干燥；同相同溫度熱風干燥(烘干)相比，指標成分阿魏酸、洋川芎內酯A和Z-藁本內酯的含量較高。因此，可將熱泵干燥作為當歸藥材產地加工干燥處理的新方法。