雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

徐秋鳳

(河南省方城縣動物衛生監督所,河南方城 473200)

大腸桿菌病是以侵害腸道為主的原發性傳染病，由致病性大腸桿菌及其毒素引起，其中包括大腸桿菌輸卵管炎、腸炎、關節炎、腹膜炎等各種疾病，對養雞業危害極大。

2018年4月，方城縣博望鎮某雞場雞群出現精神萎靡不振、采食減少或不食、離群呆立或蹲伏不動、羽毛松亂、肛門周圍羽毛粘有糞便、綠色或黃白色稀糞、并陸續出現死亡，對病死雞進行剖檢觀察疑似為大腸桿菌病。但該雞場對此病癥治療狀況不佳。

因此，防止本病時應對分離到的大腸桿菌進行藥物敏感性試驗，在此基礎上篩選出高效藥物用以治療，才能收到預期的效果。本次試驗即對方城縣博望鎮范圍內雞大腸桿菌的致病群進行分離鑒定及藥敏試驗，起到對全縣養殖場（戶）雞大腸桿菌病的提供有效幫助。

1 試驗準備

1.1 選取材料

（1）樣品的采集：通過對我縣博望鎮某雞場送檢的疑似大腸桿菌病的病料進行樣品采集，死亡雞只死亡時間不超過24h。

（2）試劑準備：麥康凱瓊脂培養基及生化試劑均由市場采購。

（3）藥片準備：采用市售的多粘霉素E、螺旋霉素、新霉素等含藥紙片。

（4）實驗動物選用昆明系小白鼠雌雄各6只。

1.2 試驗方法

1.2.1 病株的分離與培養 將提前采集的心血、肝、脾、等樣品接種在麥康凱瓊脂培養基上，于恒溫箱內37℃培養18～24h，觀察菌落生成情況，從培養基上挑取粉紅色、表面光滑的單個菌落分別接種到營養瓊脂斜面上，于恒溫箱內37℃培養18～24h后，置冰箱備用。

1.2.2 染色鏡檢 將以上所得的菌株分別進行涂片，革蘭氏染色后鏡檢，通過觀察細菌形態和染色特征，選取符合大腸桿菌形態特征的菌株進行生化實驗。

1.2.3 生化試驗 用分離出的純培養物進行吲哚試驗、枸櫞酸鹽試驗、MR試驗、VR試驗、糖發酵試驗，根據觀察變化記錄結果。

1.2.4 毒力實驗 選取通過鏡檢及生化反應的大腸桿菌特性的菌株接種營養瓊脂平板，于恒溫箱內37℃培養18h，將菌落制成菌懸液。選取小白鼠公母各3只，一組每只皮下注射0.2ml菌懸液，另一組注射相同劑量的無菌生理鹽水。觀察將1～2d內死亡的小鼠立即解剖，采取其心血接種于營養瓊脂培養基上，于恒溫箱內37℃培養18h，并對分離出的菌株進一步鑒定。

1.2.5 藥敏試驗 將0.1ml稀釋好的菌液接種到平板上，讓菌液均勻鋪滿平板，待干后，將5張藥片貼于一個平板上，每藥片間距3cm之上，全部貼好后置于37℃的恒溫箱中培養18～24h，取出后觀察實驗結果測量每個藥片的抑菌圈直徑，做好記錄，最后依據藥物的判定標準，判定藥物的敏感度及耐藥性結果。

2 試驗結果

2.1 分離培養情況

培養后可在培養基上發現邊緣整齊、表面濕潤光滑、呈粉紅色的菌落；在普通瓊脂培養基上出現了濕潤光滑、整齊、圓形、隆起、灰白色的菌落，其菌落特征與大腸桿菌的特征相符。

2.2 染色鏡檢情況

通過革蘭氏染色分離菌株顯示陰性小桿菌，多單個存在，兩端鈍圓，菌株的染色鏡檢與大腸桿菌染色特性相吻合。

2.3 生化試驗鑒定情況

分離出菌株的生化試驗結果能發酵麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇，均能產酸產氣，大多數菌株不發酵蔗糖，少數緩慢發酵，VP實驗、枸櫞酸鹽試驗均為陰性，MR試驗、吲哚試驗均為陽性，以上試驗結果可以證明分離出的菌株為大腸桿菌。

2.4 毒力試驗情況

用菌懸液體接種試驗組的小白鼠，于接種后2小時出現精神萎靡，接著出現拉稀腹瀉等臨床癥狀，接種1天后開始1只死亡，2天內6只全部死亡，對死小白鼠進行解剖，均見其肝臟腫大，內臟淤血，在心、肝中分離出大腸桿菌，而對照組的6只小白鼠無明顯變化，由此可見，從雞內臟分離出的大腸桿菌均有較強的致病性。

2.5 藥敏試驗情況

用19種藥物對分離出的菌株進行藥敏試驗，其結果如附表所示。

附表 分離菌株的藥物敏感性實驗結果 （mm）

結果表明，分離菌對慶大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨芐青霉素、復方新諾明、強力霉素7種藥物具有耐藥性，對多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶6種藥物較為敏感，其它藥物中度敏感。

3 討論

（1）通過對我縣博望鎮某雞場發生的疑似大腸桿菌病樣品的試驗，從菌株特征、染色鏡檢、生化試驗、毒力試驗幾個方面來看均和大腸桿菌特征相符，且有較強的致病性。

（2）藥敏試驗結果表明大腸桿菌分離菌株對多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶6種藥物較為敏感，對慶大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨芐青霉素、復方新諾明、強力霉素7種藥物具有耐藥性，對其它的藥物中度敏感，這為預防和治療該病提供了理論依據。

4 防治措施

（1）通過使用敏感藥物多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶進行雞大腸桿菌治療取得了理想的效果，在以后的用藥中建議根據實際情況交替用藥，以防耐藥情況發生。

（2）利用分離出菌株培養后制成自家菌滅活苗，于7～15日齡、30日齡、120日齡各免疫一次，可取得良好的效果。

（3）加強消毒，采用戊二醛、聚維酮碘等消毒劑定期消毒。

（4）采用中草藥預防抗生素治療。平時采用黃連、黃芩、黃柏、紅花、白頭翁、板藍根、大蒜等預防，以減少耐藥性，發病時采用抗生素治療。

（5）提高科學飼養管理能力，全方位提升管理水平，嚴格執行消毒制度，搞好環境衛生，按免疫程序科學防疫，加強雞場群體的抗病能力，達到預防和減少疫病發生，增加養殖效益之目的。