ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌中的表達及相關性研究

黃霽 舒寬勇 鄧秀娟 官定金

[摘要] 探討ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌中的表達情況和相互關系及評估預后價值。 方法 運用免疫組織化學法檢測116例子宮內膜癌組織中ALDH1和Musashi-1的表達，分析ALDH1和Musashi-1的表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系及兩者之間的相關性，并評估兩者在子宮內膜癌預后中的價值。 結果 （1）116例子宮內膜癌組織標本中ALDH1表達63例（54.31%），其中低表達33例（28.45%），中高表達30例（25.86%）;（2）116例子宮內膜癌組織標本中Musashi-1表達83例（71.55%），其中低表達40例（34.48%），中高表達43例（45.69%）;（3）ALDH1的表達在子宮內膜癌不同FIGO分級、組織學分級、肌層浸潤程度、淋巴結轉移狀態和脈管浸潤中差異顯著（P<0.05）;Musashi-1的表達在子宮內膜癌不同FIGO分級、組織學分級、肌層浸潤程度、淋巴結轉移狀態和脈管浸潤中差異亦顯著（P<0.05）;（4）等級相關分析顯示ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌中的表達顯著正相關（r=0.262，P=0.004）;（5）Kaplan-Meier生存曲線顯示：ALDH1和Musashi-1中高表達組患者生存率顯著低于無表達組和低表達組。 結論 ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌中呈高表達，兩者呈正相關性，并與子宮內膜癌患者的預后呈負相關。ALDH1和Musashi-1高表達與子宮內膜癌的生長浸潤行為相關，可能與患者預后密切相關。通過檢測的ALDH1和Musashi-1表達有助于子宮內膜癌的早期發現及預后評估，為今后臨床腫瘤的靶向治療提供新思路。

[關鍵詞] 子宮內膜癌;ALDH1;Musashi-1;免疫組化

[中圖分類號] R737.33? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）16-0004-05

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation between ALDH1 and Musashi-1 in endometrial carcinoma and to evaluate the prognostic value. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of ALDH1 and Musashi-1 in 116 cases of endometrial carcinoma. The relationship between the expression of ALDH1 and Musashi-1 and the clinicopathological parameters of endometrial carcinoma and the correlation between them were analyzed. The value of both in the prognosis of endometrial carcinoma was evaluated. Results （1）There were 63 cases（54.31%）of ALDH1 expression in 116 tissue specimens of endometrial carcinoma， with 30 cases（28.45%） of low expression， and 33 cases（25.86%） of moderate and high expression; （2）There were 83 cases（71.55%）of the expression of Musashi-1 in 116 tissue specimens of endometrial carcinoma， with 40 cases（34.48%） of low expression， and 43 cases（45.69%） of moderate and high expression;（3）The expression of ALDH1 was significantly different in different FIGO grades， histological grades， degrees of myometrial invasion， lymph node metastasis and vascular invasion of endometrial carcinoma（P<0.05）; the expression of Musashi-1 was also significantly different in different FIGO grades， histological grades， myometrial invasion， lymph node metastasis and vascular invasion in endometrial carcinoma（P<0.05）; （4）According to the grade correlation analysis， there was a significant positive correlation between ALDH1 and Musashi-1 expression in endometrial carcinoma（r=0.262， P=0.004）;（5）According to the Kaplan-Meier survival curve， the survival rate of patients in the group of moderate and high expression of ALDH1 and Musashi-1 was significantly lower than that in non-expression group and low expression group. Conclusion ALDH1 and Musashi-1 are highly expressed in endometrial carcinoma. The two were positively correlated between each other， but were negatively correlated with the prognosis of patients with endometrial carcinoma. High expression of ALDH1 and Musashi-1 is associated with the growth and invasive behavior of endometrial carcinoma， and may be closely related to the prognosis of patients. The detection of ALDH1 and Musashi-1 expression contributes to the early detection and prognosis evaluation of endometrial carcinoma， so as to provide new ideas for targeted clinical therapy of tumors in the future.

[Key words] Endometrial carcinoma;ALDH1;Musashi-1;Immunohistochemistry

子宮內膜癌是發生于子宮內膜的一組上皮性腫瘤，為女性生殖道三大惡性腫瘤之一，占女性全身惡性腫瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%。平均發病年齡60歲，約75%發生于50歲以上婦女[1]。隨著我國人口老齡化，子宮內膜癌的發病率呈現上升的趨勢，且發病年齡日趨年輕化。在一些發達國家是發病率居首位的婦科惡性腫瘤，在我國其發病率僅次于宮頸癌。如果在早期診斷規范治療后，5年的生存率高達80%。然而因早期癥狀不明顯或不典型，很多患者就診時已錯過最佳治療時機，5年生存率明顯下降[2-3]。本研究通過檢測ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌中的表達情況，分析其之間的相關性，探討兩者在子宮內膜癌發生、發展及預后方面的意義。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集子宮內膜癌病例及蠟塊，整理臨床病理參數及隨訪資料。入選標準：本院2010年1月～2015年12月手術切除并經病理證實的116例子宮內膜癌及癌旁正常子宮內膜組織的存檔臘塊，制作成組織芯片。子宮內膜癌患者平均年齡（54.00±8.62）歲，術前均未進行放射治療、化學治療及性激素類藥物治療。正常子宮內膜來自相應患者的癌旁組織。根據FIGO標準，Ⅰ期患者98例、Ⅱ期8例、Ⅲ～Ⅳ期10例;根據組織學分級，G1（高分化）23例、G2（中分化）73例、G3（低分化）20例。所選子宮內膜癌患者中，脈管浸潤37例，淋巴結轉移9例。由2名病理科醫師對所選的病理切片再次復核。

1.2 主要試劑

兔抗人ALDH1單克隆抗體和兔抗人Musashi-1單克隆抗體購自英國abcam公司;染色試劑盒及DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 方法

采用MaxVisionTM/HRP兩步法免疫組織化學染色檢測子宮內膜癌及癌旁組織中ALDH1和Musashi-1蛋白的表達情況。主要步驟：所選蠟塊標本連續切片3 μm，HE染色。穿刺針鉆取靶點組織，制作組織芯片，60℃烤箱烘片4 h，然后二甲苯脫蠟至梯度酒精至水化;采用檸檬酸鹽緩沖抗原修復液煮沸3 min后進行抗原修復，DAB 溶液顯色5 min后，用蘇木精進行復染，最后封片。

1.4 染色結果判讀及評分

使用顯微攝像計算機圖像分析系統在每個視野計數100個子宮內膜癌細胞中的陽性細胞，換算成百分比計數并取平均值。陽性細胞數：<10%為0分; 10%～30%為1分;31%～50%為2分;>50%為3分。染色強度：0分：無染色;1 分：淡黃色;2分：黃色;3分：棕黃色。兩者的乘積即為表達強度：0分：陰性;1～3分：弱陽性為低表達;4～6分：陽性為中等表達;7～9分：強陽性為高表達。

1.5 統計學方法

應用SPSS 19.0軟件進行統計分析。ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理參數間的關系采用χ2檢驗及χ2趨勢檢驗;ALDH1和Musashi-1表達之間的相關性采用Spearman相關性分析。生存曲線用Kaplan-Meier法;P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌組織中的表達情況

ALDH1：低表達33例（33/116，28.45%），中等表達16例（16/116，25.86%），高表達14例（14/116，9.48%），總陽性表達率為54.31%（63/116）（封三圖1：A、B、C）。Musashi-1：低表達40例（40/116，34.48%），中等表達24例（24/116，20.69%），高表達19例（19/116，16.38%），總陽性表達率為71.55%（83/116）（封三圖2：D、E、F）。

2.2 ALDH1和Musashi-1的表達與子宮內膜癌患者各臨床病理參數間的關系

ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌患者不同妊娠史、年齡的表達差異均無統計學意義（P>0.05）。ALDH1在子宮內膜癌不同FIGO分期（χ2=5.418，P=0.020）、組織學分級（χ2=9.291，P=0.002）、肌層浸潤深度（χ2=5.54，P=0.019）、淋巴結轉移狀態（χ2=4.70，P=0.03）和脈管浸潤狀態（χ2=15.69，P=0.0001）的表達，差異均有統計學意義（P<0.05）。Musashi-1在子宮內膜癌不同FIGO分期（χ2=5.73，P=0.017）、組織學分級（χ2=11.682，P=0.001）、肌層浸潤深度（χ2=7.65，P=0.006）、淋巴結轉移狀態（χ2=3.88，P=0.049）和脈管浸潤狀態（χ2=3.99，P=0.046）的表達，差異也均有統計學意義（P<0.05）。見表1、2。

2.3 ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌組織中表達的相關性

在116例子宮內膜組織中，ALDH1與Musashi-1陽性者47例，二者同時陰性者17例，ALDH1陽性同時Musashi-1陰性者16例，ALDH1陰性同時Musashi-1陽性者36例，Spearman 等級相關分析顯示：ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌組織中表達呈正相關（r=0.262，P=0.004）。見表3。

2.4 ALDH1和Musashi-1在子宮內膜癌組織中的表達與子宮內膜癌患者生存時間之間的關系

116例子宮內膜癌病例共隨訪40～108個月，死亡17例，平均生存時間57.42個月。分別將ALDH1和Musashi-1表達分為（陰性組和低表達組）、（中表達和高表達組），制作出Kaplan-Meier生存曲線，結果顯示：ALDH1陰性組和低表達組平均生存時間62.23個月（隨訪期間內），中表達和高表達組46.50個月（隨訪期間內），ALDH1中表達和高表達患者的生存時間較陰性組和低表達組患者顯著減少（P=0.000，封三圖3）;Musashi-1陰性組和低表達組平均生存時間67.52 個月，中表達和高表達組平均生存時間為 45.95個月，Musashi-1中表達和高表達患者的生存時間較陰性組和低表達患者顯著減少（P=0.007，封三圖4）。