百合麥冬飲對血管內皮細胞的代謝作用研究

摘 ?要：目的 百合麥冬飲配伍的對血清藥物在血管內皮細胞代謝水平的作用研究。方法 采用脂多糖（LPS）作用內皮細胞，分析百合麥冬飲藥物血清對內皮素的代謝水平的影響。結果 百合麥冬飲血清可降低LPS導致的NO與ET-1的升高。結論 百合麥冬飲配伍可以平衡血管內皮的滲透作用調節(jié)，對于預防和控制不良環(huán)境因素和職業(yè)因素引起的慢性阻塞性肺病的氣虛痰阻癥具有積極的作用。

關鍵詞：百合麥冬飲 ?藥物血清 ?血管內皮細胞 ?一氧化氮 ?內皮素

中圖分類號：R285 ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? 文章編號：1672-3791（2019）05（a）-0209-02

傳統(tǒng)中醫(yī)認為氣虛傷陰可造成瘀血的產(chǎn)生，傷陰導致血脈枯涸，氣虛導致血行無力，因而引起瘀血。不良環(huán)境因素和職業(yè)因素引起的慢性阻塞性肺病符合中醫(yī)的氣虛血瘀痰阻證的特點，百合和麥冬是很好的養(yǎng)陰清益氣藥物，中醫(yī)臨床上多以養(yǎng)陰生津和益氣藥物來治療氣虛瘀血癥[1]。該實驗觀察百合麥冬飲的藥物血清，對脂多糖（ LPS）造模損傷的血管內皮細胞（VEC）代謝參數(shù)（NO、 ET-1）的影響調節(jié)作用，探討治療氣虛瘀血所致的慢性阻塞性肺病的干預機制。

1 ?材料與方法

1.1 試劑與儀器

RPMI-1640培養(yǎng)基（GIBCO，USA）;胰蛋白酶（MERCK，USA）;一氧化氮（NO）檢測試劑（南京聚力生物）;內皮素（ET）檢測試劑（ELISA北京福瑞生物）; 酶標儀（BIO-RAD公司580型，USA）[1]。

1.2 藥物及血清的制備

百合、麥冬購自西安市醫(yī)藥公司，新西蘭種家兔，基礎直腸體溫38.8℃～39.5℃，體重2.2～2.6kg;西安交通大學醫(yī)學實驗動物中心，實驗動物合格證號：醫(yī)動字第08-018。

實驗分組為全藥組（百合15g+麥冬15g）、百合組（百合 15g）、麥冬組（麥冬15g），同時設正常對照組和造模組。

水煎劑制備方法： 以參考文獻方法，稱取各組藥物量，加入蒸餾水回流提取2次濾液，濃縮使煎劑最終濃度含生藥0.14g/mL。

藥物血清制備：以參考文獻的方法[2]，新西蘭家兔16只，其中全藥組、百合組、麥冬組和正常對照組各4只。各藥物組用水煎劑（4.2g/kg）每天灌胃;正常對照組用生理鹽水，各組共灌胃3d后家兔采血，離心后，分離血清，過濾除菌凍存。各組的藥物血清1.5mL加入8.5mLDMEM培養(yǎng)液，得到15%藥物血清培養(yǎng)液。空白組血清以同樣方法制備。

造模：用25μg/mL的脂多糖對血管內皮細胞（VEC）刺激造模。

1.3 血管內皮細胞（VEC）代謝參數(shù)測定

ET的測定：各組用藥物作用12h，取上清液1.5mL加入25μL10%的EDTANa2和40μL（400U）的抑肽酶，混勻后3000r/min離心10min，取上清，-80℃保存?zhèn)溆谩梅派涿庖叻y定ET含量。

NO測定：各組藥物作用人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）培養(yǎng)12h后取上清液，按試劑盒說明進行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用PASS軟件分析數(shù)據(jù)。采用t檢驗分析顯著性差異。

2 ?結果

2.1 藥物血清對NO活性的影響

如表1所示，各用藥組培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）12h后，測定結果顯示，與對照組相比，LPS可使VEC上清液中NO指標升高（P<0.01）;與造模組相比，百合麥冬各藥物血清組對LPS所致NO水平的升高有不同程度的下調（P<0.05）。

2.2 藥物血清對ET-1的分泌的影響

如表2所示，各用藥組培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞12h后，結果顯示，LPS可使HUVEC上清液中ET指標升高（P<0.01），百合麥冬各組藥物血清干預后，與造模組相比各組細胞對LPS作用后的ET指標均有下調（P<0.05）。其中百合組有非常顯著性差異。

3 ?討論

3.1 血清藥物與中藥直接作用的效果分析

該實驗引入血清藥理學方法，體外研究百合麥冬飲對血管內皮細胞的影響作用。血清藥理學方法用于中藥干預治療氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病有如下優(yōu)點：采用含有中藥湯劑的動物血清培養(yǎng)細胞可以直接觀察中藥的藥物學效應;便于觀察和追蹤藥物的代謝和吸收情況，去除體外實驗各種干擾因素的影響;為建立中藥復方的藥動—藥效結合模型提供了客觀依據(jù)[1]。而中藥直接使用的缺點在于：直接加入體外培養(yǎng)細胞系，往往由于中藥復方中較多的雜質成分、酸堿度、滲透壓等影響實驗結果[2]。因此，藥物血清法相對可靠性，能較為客觀真實地闡明中藥的藥效計量和作用機制，可以從一定角度揭示中藥和復方在胃腸內代謝過程中活性成分的轉化和改變。

3.2 中藥養(yǎng)陰益氣類藥物對氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病干預分析

血瘀癥是諸多疾病中的一個重要癥候，其病理變化是血脈中血液的正常循環(huán)流動狀態(tài)發(fā)生改變[3]，血管內皮細胞可因多種因素作用而受到損傷，如我們造模采用的脂多糖LPS等。通常機體的內分泌細胞，如內皮細胞自分泌或旁分泌作用產(chǎn)生的高效縮血管因子ET-1與舒血管因子 NO之間保持著一定的動態(tài)平衡，與其他因子一起在維持血管張力、調節(jié)內皮通透性，建立了內環(huán)境的氣血平衡體系。一旦失衡，各種細胞釋放趨化因子、生長因子、粘附因子，導致血瘀癥的形成，也是造成氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病的原因之一。

綜上，百合麥冬飲在抑制NO和ET-1升高的同時，維持VEC的正常生理功能和動態(tài)平衡，在血瘀癥的治療和緩解氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病的進程中起到積極的干預作用，可以有效應對與控制血瘀癥的形成與發(fā)生，對于預防和治療因環(huán)境因素導致的氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病具有積極的作用。

參考文獻

[1] 仲浩，吳德芹，周晶，等.養(yǎng)陰益氣活血方藥對血管內皮細胞的影響[J].藥學與臨床研究，2013，21（3）：244-246.

[2] 張旭，李國春，許冬青，等.養(yǎng)陰益氣活血方藥抗VEC凋亡的研究[A].2006國際傳統(tǒng)醫(yī)藥創(chuàng)新與發(fā)展態(tài)勢論壇[C].2006：131-133.

[3] Fung YC，Liu SQ.Elementary mechanics of the endothelium of blood vessels[J].Biomech Eng，1993，115（1）：1-12.