高效液相色譜法測定食品中5種非法添加物

陳芩 郝帥 張艷芳

摘要? ? 本文建立了高效液相色譜法測定食品中罌粟堿、那可丁、嗎啡、可待因和蒂巴因等5種非法添加物的檢測方法，色譜柱ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm 5-Micron），流動相為0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸銨溶液-乙腈（10∶90），流速0.3 mL/min，檢測波長280 nm，進樣量10 μL，柱溫30 ℃，進行定量分析。結果表明，在濃度為0.01～10.00 μg/mL范圍內，標準曲線線性關系良好（相關系數R2>0.999 0），罌粟堿、那可丁、嗎啡、可待因和蒂巴因的檢出限分別是0.05、0.03、0.10、0.10、0.05 μg/mL。5種生物堿加標水平在1.2、1.5 mg/kg時，回收率為88%～93%，相對偏差為1.4%～3.2%。該方法方便快捷、成本較低、操作簡便、分析快速，可用于食品中5種非法添加物的檢測。

關鍵詞? ? 罌粟堿;那可丁;嗎啡;可待因;蒂巴因;高效液相色譜法

中圖分類號? ? TS207.3;O657.63? ? ? ? 文獻標識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）12-0221-02

Abstract? ? The detection method of papaverine hydrochloride，noscapine hydrochloride，morphine，codeine and thebaine in foods by HPLC was established.The chromatogram conditions included ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm 5-Micron），10 mmol/L ammonium acetate solution of 0.1% formic acid and acetonitrile（volume ratio 10∶90）as the mobile phase，isocratic elution（speed：0.3 mL/min），ultraviolet detector（UVD，280 nm），10 μL injection volume and 30 ℃ column temperature.The results showed that，under the concentration range of 0.01-10.00 μg/mL，the standard curve had a good linear relationship（correlation coefficient R2>0.999 0），the detection limits of papaverine hydrochloride noscapine hydrochloride，morphine，codeine and thebaine was 0.05 μg/mL，0.03 μg/mL，0.10 μg/mL，0.10 μg/mL，0.05 μg/mL，respectively.The recoveries of five alkaloids were 88%-93% and the relative deviations were 1.4%-3.2% at the standard addition levels of 1.2 mg/kg and 1.5 mg/kg.The method is convenient，quick，low in cost，simple in operation，fast in analysis，and can be used for detecting five illegal additives in food.

Key words? ? papaverine hydrochloride;noscapine hydrochloride;morphine;codeine;thebaine;HPLC

罌粟殼中含有嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因、那可丁等生物堿類物質，其中嗎啡、可待因和罌粟堿在罌粟殼中含量較高，比較有代表性[1]。我國于2009年發布的《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單》中就有罌粟殼，并標注了可能添加的主要食品類別為火鍋、火鍋底料及小吃類，另外還有可能用于鹵味制品、飲料中[2]。罌粟殼中的生物堿雖然含量較少，但長期食用會對人體神經系統造成損害，并可能造成慢性中毒[3]。目前，同時檢測嗎啡、可待因、罌粟堿、蒂巴因、那可丁等生物堿類物質的方法主要是液質聯用法，但該方法成本較高、前處理較為復雜，很難得到普及[4-5]。因此，建立一種方便快捷、定量準確、線性關系良好的高效液相色譜法非常具有實際意義[6]。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試劑與儀器

1.1.1? ? 試劑。5種藥品的純度分別為罌粟堿99.9%、那可丁98.0%、蒂巴因99.9%、可待因99.9%、嗎啡99.6%，美國A ChemTek公司生產;其他試劑有乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純）、乙酸銨（色譜純）、無水硫酸鎂（研磨后在500 ℃馬弗爐內烘5 h，200 ℃時取出裝瓶，貯存于干燥器中，冷卻后備用）、無水乙酸鈉（分析純）、鹽酸（0.1 mol/L）、乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）填料（粒度40～70 μm）、C18填料（粒度40～50 μm）。

1.1.2? ? 儀器。高效液相色譜儀：Agilent 1200，美國安捷倫科技有限公司（配有DAD檢測器）生產。電子分析天平：AUY-220，日本島津生產。渦旋混合器：WH-2，金壇市新航儀器廠生產。高速冷凍離心機：TGL-16M，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司生產。超聲波清洗儀：AS10200T-10L，天津奧特賽恩斯儀器有限公司生產。濾膜（0.22 μm）。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 樣品前處理。①試樣提取：稱取2 g試樣（精確到0.01 g）于50 mL聚四氟乙烯離心管中，液體樣品、半固體樣品加入5 mL水，固體樣品加入5 mL鹽酸溶液，分別渦旋振蕩30 s，加入15 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，超聲30 min，加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g無水乙酸鈉的混合粉末，迅速振搖，渦旋振蕩1 min，5 000 r/min離心5 min，取上清液待凈化。②試樣凈化：稱取150 mg PSA、300 mg無水硫酸鎂、300 mg C18粉末置于10 mL聚四氟乙烯離心管中，移取5 mL上清液至此離心管中，渦旋振蕩1 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液，經0.22 μm濾膜過濾，待檢測。

1.2.2? ? 儀器條件。檢測器為二極管陣列檢測器;色譜柱為ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm 5-Micron）;流動相為0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸銨溶液∶乙腈（10∶90）;柱溫30 ℃;進樣量10 μL;檢測波長280 nm。

2? ? 結果與分析

2.1? ? 標準曲線

按照試驗方法進行檢測，建立標準曲線，曲線類型為線性回歸，橫坐標為標準使用液濃度，縱坐標為目標物峰面積，得到5種生物堿的相關系數均在0.999 0以上，線性關系良好，結果見表1、圖1～5。

2.2? ? 5種生物堿標準使用液HPLC色譜圖

本方法分離效果明顯，峰型理想，出峰時間較早，為食品中5種非法添加物的檢測提供了一種快速有效的方法（圖6）。

2.3? ? 方法的回收率和精密度

在不含目標的樣品中添加標準物質后，按試驗方法進行提取、凈化和測定，其回收率和精密度結果見表2。可以看出，5種生物堿加標水平在1.2、1.5 mg/kg時，回收率為88%～93%，相對偏差為1.4%～3.2%。表明本方法的回收率穩定，可滿足實際樣品檢測要求。

3? ? 結論

本文建立的方法操作簡單、選擇性強、靈敏度高，簡化了食品中非法添加罌粟殼的檢測流程，提高了工作效率，節省了檢測成本，為打擊食品中非法添加罌粟殼的行為提供了一種行之有效的有力依據，保證了消費者的合法利益和人身安全。

4? ? 參考文獻

[1] 戴萌娜，張建華，井淇，等.食品添加罌粟殼根源分析與對策研究[J].食品工業，2018，39（1）：243-245.

[2] 于世林.高效液相色譜方法及應用[M].北京：化學工業出版社，2005.

[3] 戴維杰，鈕偉民.高效液相色譜法檢測摻罌粟殼食品中的罌粟堿[J].中國衛生檢驗雜志，2003，13（5）：607-608.

[4] 徐麗紅，王建清，陶秋，等.高效液相色譜同時測定3類食品中的5種罌粟殼生物堿[J].分析測試學報，2011，30（12）：1387-1391.

[5] 王力清，酈明浩，李錦清，等.超高效液相色譜-串聯質譜法高通量快速測定調料中罌粟殼生物堿含量[J].食品與發酵工業，2012，38（8）：168.

[6] 劉敏敏，張朝正，李延志，等.液相色譜-串聯質譜法檢測火鍋底料中罌粟殼[J].食品研究與開發，2013（1）：91-94.