五味子多糖對裸鼠腦膠質瘤細胞增殖的影響

唐澤波 溫 娜 金 宏 劉興吉 齊 玲 于洪泉

(吉林醫藥學院后勤管理處,吉林 吉林 132013)

惡性膠質瘤在采用手術、放療和化療等治療方法后，患者術后生命仍然不超過1年〔1〕。目前尚缺乏滿意的治療手段。五味子為木蘭科五味子的干燥成熟果實，有效成分為木脂素、多糖和揮發油等。五味子多糖(CPSC)是從五味子成熟干燥果實中提取的含有五味子總多糖、17種以上氨基酸和16種以上微量元素的混合物。王艷杰等〔2〕鑒定出CPSC中含有鼠李糖(1.69%)、阿拉伯糖(1.78%)、葡萄糖(79.47%)、半乳糖(10.48%)等單糖成分，并推測CPSC中可能還含有甘露糖(1%)和巖藻糖(5.59%)。研究表明CPSC具有抗腫瘤活性〔3～7〕，但其具體的抗腫瘤作用機制尚不清楚。本文前期研究發現CPSC可以抑制腦膠質瘤細胞的生長〔8〕。本文進一步研究CPSC對體外培養裸鼠腦膠質瘤細胞生長的作用。

1 材料與方法

1.1主要試劑 裸鼠腦膠質瘤細胞本實驗室提取，細胞培養基RPMI-1640 (Thermo公司)，小牛血清(Gibco公司)，CPSC(北華大學提供)，胰蛋白酶(Gibco公司)，四甲基偶氮唑(MTT)(Sigma公司)，二甲基亞砜(DMSO)(Thermo公司)。

1.2提取原代裸鼠膠質瘤細胞 留取新鮮的裸鼠腦腫瘤組織，用冷PBS沖洗后將組織剪成碎塊，置于10 ml離心管中，并加入木瓜蛋白酶放于37℃培養箱中消化30 min，吸取上清液，加血清終止消化，以300 r/min離心5 min后棄上清，加培養液反復吹打，過濾后以300 r/min速度離心5 min，離心棄上清，加入含10%血清培養液培養，臺盼藍計數活細胞，以2×106/75 cm2密度將細胞接種于培養瓶中，37℃、5%CO2及飽和濕度下培養12 h待用。

1.3MTT法檢測CPSC對裸鼠腦膠質瘤細胞生長的影響 將CPSC用85%乙醇溶解后，取適量液體加入含5%小牛血清RPMI-1640細胞培養液，配制成終濃度為200、400、800 μg/ml的藥物。取對數生長期細胞，用胰酶消化收集細胞，用含5%小牛血清RPMI-1640細胞培養液調整細胞懸液濃度為8×106/ml。取96孔細胞培養板，每孔中加入100 μl，置入37℃、5%CO2細胞培養箱中培養24 h，使細胞同步化。分別于24、48和72 h棄去上清液，加入含不同濃度的CPSC，每個藥物濃度重復5次。藥物作用結束時，每孔加入MTT 20 μl，37℃繼續孵育4 h，終止細胞培養，棄去上清液，每孔分別加150 μl DMSO，搖床震蕩均勻使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶聯免疫檢測儀上490 nm波長處測定各孔吸光度(A)值，用不加細胞的空白孔調零。

1.5統計學方法 應用SPSS17.0軟件，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 結 果

在藥物作用不同時間里，細胞的生長反應不一，但主要以高濃度長時間作用時表現為抑制其生長為主。CPSC濃度在200 μg/ml時抑制細胞無明顯變化；在24 h和48 h時，藥物濃度在400 μg/ml和800 μg/ml抑制細胞生長不明顯；但在72 h時，藥物濃度在400和800 μg/ml時，與對照組相比，均具有顯著性差異(P<0.01)，抑制作用較明顯。見表1。

表1 不同濃度五味子多糖對原代培養裸鼠膠質瘤細胞生長的作用±s)

3 討 論

誘導或促進腫瘤細胞凋亡是治療腫瘤的基本方法之一。五味子抗腫瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位〔5〕。其中，CPSC是其抗腫瘤的主要成分之一，其藥理研究表明，具有抑瘤〔3～7〕、抗疲勞〔9〕、抗衰老〔10〕、抗突變〔11〕、增強免疫〔12〕等作用。CPSC具有一定的抑瘤作用，其抑瘤作用可能不是直接殺死瘤細胞，而與細胞凋亡、活化免疫細胞有關。王艷杰等〔3〕研究結果表明：CPSC夠抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的生長，高、中劑量組能夠延長H22、S180荷瘤小鼠的生存時間。其高劑量組抑瘤率達到45.4%。另外，于赫等〔4〕研究發現:高、中劑量對小鼠H22肝癌移植瘤具有抑制作用，平均抑瘤率為52.83%,且高劑量可在器官水平上增強H22荷瘤小鼠的免疫能力，從而起到間接抗腫瘤作用。因此，CPSC具有預防和治療腫瘤的潛在價值。

本實驗發現，CPSC在高濃度和長時間作用時，抑制原代培養的裸鼠腦膠質瘤細胞的生長。CPSC呈現這種抑制增殖效應，需進一步研究其作用機制，明確其最佳作用時間和濃度。這從另一角度提示我們，在運用CPSC進行抗腫瘤治療時，一定要注意藥物作用的時間和劑量。這樣才能達到理想的治療效果。

4 參考文獻

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