鐵皮石斛炭疽病病原鑒定及其生物學(xué)特性研究

胡永亮，白學(xué)慧，陳玉芹，李守嶺，王應(yīng)清

(云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南 瑞麗 678600 )

鐵皮石斛Dendrobiumofficinale為蘭科石斛屬多年生草本植物，是我國傳統(tǒng)中藥材中珍稀名貴品種之一。因其藥用價(jià)值極高，自然繁殖率低，市場需求量大，以及前期過度采挖等因素，野生鐵皮石斛已成為瀕危物種。目前，人工規(guī)模化種植是提供鐵皮石斛市場供給的主要途徑。云南作為鐵皮石斛的主要分布區(qū)和適生區(qū)，在瑞麗、芒市、盈江、龍陵、騰沖等21個(gè)縣市均有人工種植。2015年筆者在瑞麗市調(diào)查鐵皮石斛病害，發(fā)現(xiàn)一種鐵皮石斛葉斑病。該病害給種植農(nóng)戶帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，也阻礙了當(dāng)?shù)厥a(chǎn)業(yè)的發(fā)展。筆者采用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定與rDNA-ITS測序鑒定相結(jié)合方法，主要對(duì)云南瑞麗市鐵皮石斛種植區(qū)的石斛葉斑病病原進(jìn)行鑒定，并初步觀察研究該病原的生物學(xué)特性。

1 材料與方法

1.1 材料來源 鐵皮石斛病株采集、病害調(diào)查和接種試驗(yàn)均在云南省瑞麗市勐卯鎮(zhèn)鐵皮石斛種植基地進(jìn)行。

1.2 病原菌分離純化 將鐵皮石斛葉片病健交界處組織剪成約0.5 cm×0.5 cm的正方形小塊，依次經(jīng)75%乙醇和0.1%升汞消毒，再用無菌水洗滌3次后，置于PDA培養(yǎng)基中28 ℃避光培養(yǎng)120 h后，純化菌落并進(jìn)行單孢分離獲得菌絲分離物。

1.3 分離物致病性測定

1.3.1 離體接種 使用針刺接種法，將純化的菌絲分離物接種到健康的鐵皮石斛葉片上，在28 ℃的人工培養(yǎng)箱內(nèi)保濕培養(yǎng)；對(duì)照組為無菌水處理，每處理20葉片。定期觀察石斛葉片發(fā)病情況，再對(duì)接種發(fā)病的石斛葉片進(jìn)行病原菌分離。……