橡膠樹枯萎病病原菌室內毒力測定

彭 昀，肖宇明，劉衍超，李增平，王 萌，梁曉宇，張 宇

(海南大學 植物保護學院，海口 570228)

橡膠樹(Heveabrasiliensis)生產的乳膠是我國重要的戰略資源，隨著橡膠樹種植年代增加及周邊生態環境變化，一些新的病蟲害逐漸顯現出來[1]。2017年在對海南省瓊中加釵農場橡膠樹的病情調查中發現尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)引起了橡膠樹枯萎病。該病導致橡膠幼樹頂梢自上而下回枯變褐，呈現“半邊死”癥狀。枯死枝條莖干木質部髓心變褐，木質部橫切面有零散分布的藍變癥狀。有的幼樹基部莖干一側的樹皮爆裂溢膠，溢膠凝固變黑，削去表皮，韌皮部組織變黃褐色至黑褐色，木質組織有變黑褐色的縱向條紋。為預防這種橡膠樹新病害的潛在威脅，筆者對橡膠樹枯萎病進行室內藥劑篩選，采用生長速率法測定了4種常用殺菌劑對該病原菌進行毒力測定[2]，并選擇2種防效顯著的藥劑進行復配研究[3]，旨在為該病害防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 供試菌種:供試尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)分離于海南省瓊中加釵農場熱研7-33-97橡膠樹幼樹枝條。供試藥劑:97.3 %咪鮮胺(prochloraz)原藥購自江蘇輝豐農化股份有限公司；97 %異菌脲(iprodione)原藥購自江蘇快達農化股份有限公司；96 %百菌清(chlorothalonil)原藥購自山東青島奧迪斯生物科技有限公司；96%吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)購自海南正業中農高科股份有限公司；97.2 %多菌靈(carbendazim)原藥購自江蘇省太倉市農藥廠；99 %水楊羥肟酸(SHAM)購自上海麥克林生化科技有限公司。將各原藥配成10 000 mg·L-1的母液，4 ℃保存。 供試培養基:PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，瓊脂粉15 g，蒸餾水1 000 mL，滅菌備用。

1.2 方法

1.2.1 含藥平板的制備 分別取各藥劑母液加入到定量的PDA培養基中搖晃混勻，使培養基含咪鮮胺的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1，含百菌清的濃度為 0，1，2，4，8，16 mg·L-1，含吡唑嘧菌酯的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1(為降低旁路呼吸途徑對藥劑的影響, 供試培養基中加入終濃度為100 mg·L-1的水楊羥肟酸[4])，含多菌靈的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1。將含藥培養基倒入滅菌的培養皿中，每皿 20 mL，每個處理設置3個重復。

1.2.2 處理方式 取制作好的含藥平板，空白對照為不加藥劑的PDA平板。使用5 mm打孔器在PDA培養基上28 ℃培養2 d的病原菌菌落邊緣取菌碟，分別接于處理培養基平板的中心位置上[5]，每個處理做3個重復，放置于28 ℃生化培養箱內培養，于對照組菌落生長6～7 cm時，用十字交叉法測量菌落直徑并記錄[6]。

1.2.3 藥劑復配 選取2種藥效作用較好的藥劑進行復配，以EC50濃度按照不同比例配比，配比為1∶1，1∶3，1∶5，3∶1，5∶1。再在不同比例配比下設置5個濃度梯度，濃度稀釋按照逐級稀釋法稀釋濃度，實驗按照1.2.2和1.2.3中所述方法進行。

1.2.4 數據處理 使用EXCEL2016，DPS7.05數據處理軟件對所得的數據進行統計分析，得出各藥劑的毒力回歸方程、EC50和相關系數。

復配增效系數(SR)[7]計算方法如下：

式中：a，b分別代表2種農藥的含量比例。根據增效系數(SR)作出2種藥的聯合作用評價：當SR>1.5 時，藥劑混用時毒力大于各單劑單用時毒力的總和，表現為增效作用；當SR在 0.5～1.5 時，表現為相加作用；當SR<0.5時，藥劑混用毒力低于各單劑的毒力總和，表現為拮抗作用[8]。

2 結果與分析

2.1 4種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果 4種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表1。由表1可見，4種常見殺菌劑對尖孢鐮刀菌絲的生長抑制效果為：咪鮮胺> 多菌靈>吡唑醚菌酯>百菌清。結果表明，麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機雜環類(苯并咪唑類)殺菌劑的多菌靈對尖孢鐮刀菌具有較高的抑制活性，故選擇咪鮮胺和多菌靈作為單劑進行下一階段的復配實驗。

表1 供試4種殺菌劑對尖孢鐮刀菌的抑制作用

2.2 復配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果 復配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表2，由表2可見，咪鮮胺和多菌靈1∶1，1∶3，1∶5，3∶1及5∶1復配條件下EC50值分別為0.96，0.71，0.17，0.87，1.01 mg·L-1，1∶5的復配效果最佳，5∶1的復配效果最差。

表2 復配藥劑對菌絲的生長抑制結果

咪鮮胺和多菌靈的復配增效系數見表3，由表3可見，咪鮮胺和多菌靈1∶1，1∶3，3∶1及5:1復配條件下增效系數分別為 0.92，1.37，0.92，0.77，均在0.5～1.5之間，2者藥效作用為相加作用，無拮抗作用。咪鮮胺和多菌靈配比在1∶5時，SR值為6.01，表現為增效作用。

表3 咪鮮胺和多菌靈的復配增效系數

3 討 論

本研究對4種常見殺菌劑對橡膠樹尖孢鐮刀菌絲的生長抑制進行了測定，除百菌清外，咪鮮胺、多菌靈、吡唑醚菌酯抑制菌絲效果顯著。其中麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機雜環類(苯并咪唑)殺菌劑的多菌靈對橡膠樹尖孢鐮刀菌的抑菌效果尤為突出，故選擇咪鮮胺和多菌靈進行復配實驗，通過5種不同比例復配得出的抑菌效果來看，其中咪鮮胺：多菌靈為1∶5的復配效果最佳，表現為增效作用，并且EC50達到了0.17 mg·L-1，效果優于任何一種單劑。

綜上所述，橡膠樹枯萎病可由常用藥劑進行防治，鑒于咪鮮胺與多菌靈的復配效果尤為突出，推薦在病害發生時采用，避免單一藥劑的過度使用所導致病菌抗藥性的增強。