橡膠樹枯萎病病原菌室內毒力測定

彭 昀，肖宇明，劉衍超，李增平，王 萌，梁曉宇，張 宇

(海南大學 植物保護學院，海口 570228)

橡膠樹(Heveabrasiliensis)生產的乳膠是我國重要的戰略資源，隨著橡膠樹種植年代增加及周邊生態環境變化，一些新的病蟲害逐漸顯現出來[1]。2017年在對海南省瓊中加釵農場橡膠樹的病情調查中發現尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)引起了橡膠樹枯萎病。該病導致橡膠幼樹頂梢自上而下回枯變褐，呈現“半邊死”癥狀。枯死枝條莖干木質部髓心變褐，木質部橫切面有零散分布的藍變癥狀。有的幼樹基部莖干一側的樹皮爆裂溢膠，溢膠凝固變黑，削去表皮，韌皮部組織變黃褐色至黑褐色，木質組織有變黑褐色的縱向條紋。為預防這種橡膠樹新病害的潛在威脅，筆者對橡膠樹枯萎病進行室內藥劑篩選，采用生長速率法測定了4種常用殺菌劑對該病原菌進行毒力測定[2]，并選擇2種防效顯著的藥劑進行復配研究[3]，旨在為該病害防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料供試菌種:供試尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)分離于海南省瓊中加釵農場熱研7-33-97橡膠樹幼樹枝條。供試藥劑:97.3 %咪鮮胺(prochloraz)原藥購自江蘇輝豐農化股份有限公司；97 %異菌脲(iprodione)原藥購自江蘇快達農化股份有限公司；96 %百菌清(chlorothalonil)原藥購自山東青島奧迪斯生物科技有限公司；96%吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)購自海南正業中農高科股份有限公司；97.2 %多菌靈(carbendazim)原藥購自江蘇省太倉市農藥廠；99 %水楊羥肟酸(SHAM)購自上海麥克林生化科技有限公司。將各原藥配成10 000 mg·L-1的母液，4 ℃保存。 供試培養基:PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖15 g，瓊脂粉15 g，蒸餾水1 000 mL，滅菌備用。

1.2 方法

1.2.1 含藥平板的制備分別取各藥劑母液加入到定量的PDA培養基中搖晃混勻，使培養基含咪鮮胺的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1，含百菌清的濃度為 0，1，2，4，8，16 mg·L-1，含吡唑嘧菌酯的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1(為降低旁路呼吸途徑對藥劑的影響, 供試培養基中加入終濃度為100 mg·L-1的水楊羥肟酸[4])，含多菌靈的濃度為 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1。將含藥培養基倒入滅菌的培養皿中，每皿 20 mL，每個處理設置3個重復。

1.2.2 處理方式取制作好的含藥平板，空白對照為不加藥劑的PDA平板。使用5 mm打孔器在PDA培養基上28 ℃培養2 d的病原菌菌落邊緣取菌碟，分別接于處理培養基平板的中心位置上[5]，每個處理做3個重復，放置于28 ℃生化培養箱內培養，于對照組菌落生長6～7 cm時，用十字交叉法測量菌落直徑并記錄[6]。

1.2.3 藥劑復配選取2種藥效作用較好的藥劑進行復配，以EC50濃度按照不同比例配比，配比為1∶1，1∶3，1∶5，3∶1，5∶1。再在不同比例配比下設置5個濃度梯度，濃度稀釋按照逐級稀釋法稀釋濃度，實驗按照1.2.2和1.2.3中所述方法進行。

1.2.4 數據處理使用EXCEL2016，DPS7.05數據處理軟件對所得的數據進行統計分析，得出各藥劑的毒力回歸方程、EC50和相關系數。

復配增效系數(SR)[7]計算方法如下：

式中：a，b分別代表2種農藥的含量比例。根據增效系數(SR)作出2種藥的聯合作用評價：當SR>1.5 時，藥劑混用時毒力大于各單劑單用時毒力的總和，表現為增效作用；當SR在 0.5～1.5 時，表現為相加作用；當SR<0.5時，藥劑混用毒力低于各單劑的毒力總和，表現為拮抗作用[8]。

2 結果與分析

2.1 4種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果4種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表1。由表1可見，4種常見殺菌劑對尖孢鐮刀菌絲的生長抑制效果為：咪鮮胺> 多菌靈>吡唑醚菌酯>百菌清。結果表明，麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機雜環類(苯并咪唑類)殺菌劑的多菌靈對尖孢鐮刀菌具有較高的抑制活性，故選擇咪鮮胺和多菌靈作為單劑進行下一階段的復配實驗。

表1 供試4種殺菌劑對尖孢鐮刀菌的抑制作用Tab.1 Toxicity of 4 fungicides on mycelium growth of Fusarium oxysporum

2.2 復配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果復配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表2，由表2可見，咪鮮胺和多菌靈1∶1，1∶3，1∶5，3∶1及5∶1復配條件下EC50值分別為0.96，0.71，0.17，0.87，1.01 mg·L-1，1∶5的復配效果最佳，5∶1的復配效果最差。

表2 復配藥劑對菌絲的生長抑制結果Tab.2 Toxicity of fungicide mixture on mycelium growth of Fusarium oxysporum

咪鮮胺和多菌靈的復配增效系數見表3，由表3可見，咪鮮胺和多菌靈1∶1，1∶3，3∶1及5:1復配條件下增效系數分別為 0.92，1.37，0.92，0.77，均在0.5～1.5之間，2者藥效作用為相加作用，無拮抗作用。咪鮮胺和多菌靈配比在1∶5時，SR值為6.01，表現為增效作用。

表3 咪鮮胺和多菌靈的復配增效系數Tab.3 The SR values of fungicide mixtures of carbendazim and prochloraz on mycelium growth of Fusarium oxysporum

3 討 論

本研究對4種常見殺菌劑對橡膠樹尖孢鐮刀菌絲的生長抑制進行了測定，除百菌清外，咪鮮胺、多菌靈、吡唑醚菌酯抑制菌絲效果顯著。其中麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機雜環類(苯并咪唑)殺菌劑的多菌靈對橡膠樹尖孢鐮刀菌的抑菌效果尤為突出，故選擇咪鮮胺和多菌靈進行復配實驗，通過5種不同比例復配得出的抑菌效果來看，其中咪鮮胺：多菌靈為1∶5的復配效果最佳，表現為增效作用，并且EC50達到了0.17 mg·L-1，效果優于任何一種單劑。

綜上所述，橡膠樹枯萎病可由常用藥劑進行防治，鑒于咪鮮胺與多菌靈的復配效果尤為突出，推薦在病害發生時采用，避免單一藥劑的過度使用所導致病菌抗藥性的增強。