赤霉素G A3對貫葉連翹試管苗玻璃化現象的影響

貫葉連翹為藤黃科金絲桃屬植物，多年生草本，又名貫葉金絲桃。貫葉連翹在藥用和觀賞方面的應用已引起了人們的廣泛關注，但其野生資源種群數量少，種子數量有限，近年來作為藥源，人為采挖較為嚴重，為有效保護野生資源，大力開展貫葉連翹的繁育工作勢在必行，利用組織培養進行快速繁殖，是促進貫葉連翹良種繁育的有效途徑。但貫葉連翹初代誘導過程中玻璃化問題較為嚴重，為解決這一問題，項目組在改善其它培養條件的基礎上著重研究了不同濃度的赤霉素(GA3)對貫葉連翹試管苗分化和發育的影響，以期獲得玻璃化現象的逆轉。

一、材料與方法

（一）材料

4月中下旬在甘肅省小隴山林區選擇無病蟲害、生長正常的貫葉連翹頂部嫩梢先端2～3厘米的莖段作為繁殖材料。

（二）方法

1.赤霉素 (GA3)母液的配制 稱取赤霉素GA3 0.1克，溶于1摩爾每升熱的氫氧化鈉溶液中，待完全溶解后轉移至容量瓶中，加水定容至100毫升，即得濃度為1毫克每毫升的母液。按實驗要求每次吸取（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫升母液于 1 升 MS 培養基中，即可配成含（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫克每升赤霉素GA3的MS固體培養基。

2.接種 試驗材料在自來水下將其表面灰塵沖洗干凈，在無菌條件下，用75%酒精浸泡30秒，無菌水沖洗3次。在含有0.1%的吐溫-80的0.1%HgCl2溶液中滅菌5分鐘，滅菌過程中要不時搖動，最后用無菌水沖洗4～5次，吸干水分。用剪刀剪出1.5厘米長莖段（含1～2節間）接種到誘導培養基中進行初代培養。

3.試驗設計 初代培養基中加入2，4-D（2.0毫克每升），待愈傷組織形成后，小心切去帶有生長點的愈傷組織，以MS為基本培養基，進行繼代增殖，誘導芽萌發和促進芽的生長。設計6個處理（即在同樣生長條件下，在培養基 MS+6-BA3.0+2，4-D2.0+GA3（單位均為毫克每升），對6種不同濃度GA3溶液（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫克每升處理的貫葉連翹，3次重復；誘導叢生芽的形成和生長，每個培養瓶植入6個單芽，每重復10瓶。30天后統計結果，統計每處理叢生芽玻璃化情況，每處理每重復隨機抽取3個培養瓶，清洗掉培養基，將誘導形成的芽置于超凈工作臺上，采用電子游標卡尺測量不定芽自然長度，精度0.1厘米。

4.培養條件 上述培養基均添加3%蔗糖和0.7%瓊脂，pH值為5.6～5.8之間，培養溫度為（20±2）℃，光照強度為1000～1500LX，每日光照12小時。

5.培養及觀察 接種完畢后將三角燒瓶置于26～28℃的恒溫培養箱中，光照條件下培養，每天觀察記錄發芽情況，待幼苗長出2片子葉時，在超凈臺上將幼苗移植到添加有不同濃度GA3的MS固體培養基中，26～28℃繼續在恒溫培養箱中培養。從移植的第二天開始進行芽苗的高度的測量以及玻璃化的觀察。每種濃度處理取幼苗進行測量及觀察，3次重復，取其平均值。

二、結果與分析

（一）不同濃度赤霉素（GA3）溶液對貫葉連翹芽苗的影響

四周后統計結果顯示，GA3具有促進貫葉連翹芽苗生長的作用，且不同濃度的GA3溶液對貫葉連翹芽苗的生長影響不同，平均芽苗高度4.53厘米，總體表現為低濃度促進生長，高濃度抑制生長，具體情況見圖（1、2）。

圖2 不同濃度的GA3對貫葉連翹芽苗玻璃化程度的影響

實驗結果顯示，本實驗中對貫葉連翹芽苗玻璃化抑轉最有效的GA3濃度為0.5毫克每升，低于此濃度，效果不顯著，但濃度大于0.5毫克每升時，苗莖細弱，基部切口變黑，葉片皺縮，且隨著濃度升高，芽苗高生長呈明顯下降趨勢，而降低GA3濃度可恢復正常。

（二）不同濃度赤霉素（GA3）溶液對貫葉連翹芽苗玻璃化的影響

增殖培養結果表明，在GA3的濃度分別為（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫克每升的 6 個配比進行對比試驗中，不同濃度的GA3溶液的作用下，玻璃化程度差別較大，隨著GA3的濃度不斷增大，貫葉連翹則芽苗的玻璃化呈現中間小兩頭大的趨勢。總體結果顯示：在0.5毫克每升的GA3溶液處理下，玻璃化程度較低，芽苗分化較好。

三、結論與討論

玻璃化苗是植物內部生理失調的外在表現，它是在試管內控制條件下培養植物的產物，玻璃化多為組培過程中措施不當造成的非遺傳的生理性失調癥狀，是人工提供的培養基和培養條件不完全符合培養物固有需要的結果。

在貫葉連翹組培快繁實施過程中，玻璃化問題嚴重阻礙了試驗的進程和芽苗的質量，試驗發現，輕度玻璃化苗轉入無添加激素的MS培養基中連續培養1～2代，可恢復正常，而主莖已完全玻璃化時則不能逆轉。采用MS為基本培養基，添加不同濃度的GA3，對貫葉連翹幼苗的生長均有不同程度的促進作用，其中0.5毫克每升的GA3極顯著地提高了幼苗的高度，降低了玻璃苗的比率。