應(yīng)用紫外-可見分光光度法測定金剛乙胺

陳國，許秀琴

(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315101)

在畜牧養(yǎng)殖上，金剛乙胺等抗病毒類藥物主要用于雞禽流感的預(yù)防和早期治療，以及豬傳染性胃腸炎的防治，但其致精神異常的副反應(yīng)以及日增的耐藥性對畜產(chǎn)品消費(fèi)者產(chǎn)生較大的安全風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)長期大量使用這些抗病毒類藥物會(huì)使禽流感的病毒產(chǎn)生變異，給防控工作帶來巨大困難，因此，2005年12月金剛乙胺等藥物已被禁止使用。然而，仍有一些獸藥制劑中非法添加金剛乙胺類藥物，最終給人類的健康造成巨大危害。金剛乙胺的測定方法主要集中于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1-5]，但檢測費(fèi)用很昂貴，很多小型實(shí)驗(yàn)室并不具備這種條件。筆者經(jīng)過大量研究發(fā)現(xiàn)，用紫外-可見分光光度法，利用金剛乙胺溶于氯仿的特性測定金剛乙胺的含量，結(jié)果令人滿意。

1 材料與方法

1.1 材料

鹽酸金剛乙胺對照品(中國藥品生物制品檢定所，產(chǎn)品編號(hào)100969)；鹽酸金剛乙胺片(浙江普洛康裕制藥有限公司，規(guī)格為每片0.1 g)，所用輔料為藥用規(guī)格，試劑苯二甲酸氫鉀、溴甲酚綠、二氯甲烷、氫氧化鈉、鹽酸均為分析純，水為超純水。Blue-Star B型紫外分光光度計(jì)(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

溴甲酚綠溶液配制。取溴甲酚綠50 mg，加入0.7 mL 0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解，加入50 mL 0.1 mol·L-1鄰苯二甲酸氫鉀與3.5 mL 0.1 mol·L-1鹽酸溶液，用純水定容至100 mL。

1.2 方法

1.2.1 測定波長選擇

稱取鹽酸金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，用0.1 mol·L-1的鹽酸溶液溶解，定容至100 mL，再逐級(jí)稀釋成1.0 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；另取金剛乙胺片處方所用輔料，按照上述方法配制輔料溶液。量取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液2 mL于50 mL離心管中，加5 mL水和3 mL溴甲酚綠溶液，再加入10 mL氯仿，振搖提取5 min，待靜置分層后，取氯仿溶液于離心管中，離心10 min，取澄清氯仿液，于320～460 nm波長范圍內(nèi)掃描。

1.2.2 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于50 mL離心管中，按照1.2.1的測定方法進(jìn)行操作，在359 nm波長處測定樣品的吸光度(Absorbance值)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y=4.268x+0.108，R2=0.999。

穩(wěn)定性試驗(yàn)。取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中濃度為0.01 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在359 nm波長處分別間隔1、2、4、8、10、12 h，測定其吸光度。

溫度影響試驗(yàn)。取同樣濃度為0.01 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，將其溫度分別調(diào)至20、25、30、35、40 ℃后測定吸光度。

純度重現(xiàn)性試驗(yàn)。對同一樣品同時(shí)做6個(gè)平行試驗(yàn)，測定鹽酸金剛乙胺純度，按照1.2.1方法對樣品進(jìn)行測試。

加標(biāo)回收試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取9份鹽酸金剛乙胺各0.2 g，加入不同含量的鹽酸金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)品，按照1.2.1方法進(jìn)行測試。

1.2.3 鹽酸乙胺片的測定

稱取1片鹽酸乙胺片(精確0.000 1 g)樣品置于10 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1的鹽酸溶液溶解并定容，精密吸取1.0 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再吸取1.0 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，進(jìn)行逐級(jí)稀釋得到中間液，濃度為1 mg·L-1。精密吸取0.2 mL濃度為1 mg·L-1的中間液，按照1.2.1進(jìn)行同樣操作，并于359 nm處進(jìn)行測定(3批樣品，每批平行測定5次，取平均值)，代入回歸方程。同時(shí)稱取輔料0.1 g按照上述樣品同樣操作，于359 nm處進(jìn)行測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 測定波長

經(jīng)過波長掃描，結(jié)果在359 nm波長處有最大吸收，而輔料在該波長處幾乎無吸收，故選擇359 nm波長為測定波長。

2.2 方法學(xué)指標(biāo)

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

線性回歸表明(圖1)，鹽酸金剛乙胺在0.01～0.06 mg·L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 不同濃度鹽酸金剛乙胺與吸光度的線性關(guān)系

2.2.2 穩(wěn)定性

由表1可知，12 h內(nèi)采用不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)，測定標(biāo)準(zhǔn)液2次，所獲7組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均值為0.151，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.6%。測定結(jié)果表明，該標(biāo)準(zhǔn)溶液在12 h內(nèi)吸光度無明顯變化，穩(wěn)定性良好。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)測定對吸光度的影響

2.2.3 溫度

由表2可知，不同溫度條件下，吸光度無明顯變化，RSD為0.5%，可見在20～40 ℃內(nèi)對測定值無影響。

表2 溫度對吸光度的影響

2.2.4 純度重現(xiàn)性

同一樣品6個(gè)平行試驗(yàn)，純度測定結(jié)果分別為98.4%、98.8%、100.1%、99.7%、101.1%、100.8%，平均純度為99.8%，RSD為1.1%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.2.5 加標(biāo)回收率

測試結(jié)果見表3。在不同添加水平條件下，平均回收率分別為98.5%、98.6%、98.8%，RSD值在0.4%～0.8%。試驗(yàn)表明，在不同添加水平條件下，回收率試驗(yàn)結(jié)果良好。

表3 鹽酸金剛乙胺添加回收試驗(yàn)結(jié)果

2.3 鹽酸乙胺片的測定

測試結(jié)果見表4，3批鹽酸金剛乙胺樣品，每片平均含量分別為0.099 6、0.101 1、0.099 8 g，對應(yīng)標(biāo)示量分別為100.0%、100.1%、99.8%。在輔料對比試驗(yàn)中，輔料在359 nm處無吸收峰，排除了輔料對鹽酸金剛乙胺測定的干擾。

表4 鹽酸金剛乙胺片測定結(jié)果

3 小結(jié)

本文建立了紫外-可見分光光度法測定鹽酸乙胺的含量，方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，在對鹽酸乙胺片進(jìn)行測定時(shí)，同時(shí)應(yīng)用該方法對輔料進(jìn)行了測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，輔料對測定結(jié)果并不產(chǎn)生影響，應(yīng)用該方法可實(shí)現(xiàn)小型實(shí)驗(yàn)室對于鹽酸乙胺測定的需求。