煙酸的體外抗氧化活性研究

厲彥翔 常江 張苗苗

摘 要：目的：研究煙酸的體外抗氧化活性。方法：采用分光光度計法分析煙酸對羥基自由基和DPPH自由基的清除作用，并探討煙酸對脂質過氧化物的抑制作用和鐵離子的還原能力。結果：煙酸能夠清除羥基自由基和DPPH自由基，并且具有較強的脂質過氧化物抑制和鐵離子還原能力。結論：煙酸具有一定的體外抗氧化活性。

關鍵詞：煙酸;體外;抗氧化活性

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2019.17.012

隨著我國經濟和飼料工業的迅速發展，各類飼料及食品添加劑的使用也日益增加。煙酸（niacin），屬于B族維生素，是機體維持生理功能的必須營養素[1]。除了作為機體必須的營養素外，煙酸具有全面的調血脂作用，而近年來煙酸作為營養藥物、食品及家畜飼料添加劑中的主要成分更是受到廣泛的關注[2-3]。煙酸的營養支持及機體代謝調節作用基礎目前尚未完全揭示，其是否具有抗氧化活性目前研究甚少。本文以煙酸為研究對象，研究其體外抗氧化活性，以期為飼料及食品添加劑煙酸的營養支持作用提供一定的理論基礎和依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

752型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）;MS204TS型分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）;恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）。

1.2 材料

煙酸（NA）、1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）、1，10-菲羅啉均購自美國Sigma-Aldrich公司;L-抗壞血酸（維生素C）、H2O2、硫酸亞鐵、乙醇、硫代巴比妥酸、三氯乙酸均為分析純。

2 方法

2.1 煙酸對羥基自由基清除能力的測定

取2.1mM1，10-菲羅啉溶液1mL置入試管中，加入2mL磷酸鹽緩沖溶液（PBS）和1mL雙蒸水混勻，再加入1mL硫酸亞鐵溶液混勻，最后加入1mL H2O2溶液，37℃溫育60min，在536nm波長下測定吸光度，為A（損）;用1mL蒸餾水代替H2O2，測的吸光度值為未損傷管A（未）;用不同濃度樣品溶液代替雙蒸水，測出的吸光度為A（樣）。

清除率（%）=[A（樣）-A（損）]/[A（未）-A（損）]×100

2.2 煙酸對DPPH自由基清除能力的測定

取不同濃度樣品溶液2mL和DPPH·溶液2mL加入到試管中搖勻、室溫靜置30min，在517nm波長處測定吸光度值Ai;在2mL DPPH·標準溶液中加入2mL無水乙醇，震蕩混合，在517nm波長處測定吸光度值A0;試管中加入2mL不同濃度的樣品溶液和2mL無水乙醇，搖勻、避光放置30min后，在517nm波長處測定吸光值Aj。

清除率（%）=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%

2.3 煙酸對脂質過氧化物抑制作用的測定

新鮮雞蛋去卵清，卵黃用等體積的PBS緩沖液配制成1：1的卵黃懸液，同方向勻速攪拌10min，再用PBS稀釋成1：25的卵黃懸液。吸取卵黃懸液0.2mL，分別加入0.1mL不同濃度樣品溶液，0.2mL 25mM硫酸亞鐵溶液，加入1.5mL PBS緩沖液，在37℃水浴下反應30min，加1mL 20%三氯乙酸，混勻3500r/min離心15min，取上清液2mL，加1mL 0.8%硫代巴比妥酸溶液，沸水浴15min冷卻后532nm下測定吸光度值，以0.1mL蒸餾水代替樣品作為空白對照管。

清除率=（A0-A）/A0×100%

其中，A0為空白對照管吸光度，A為樣品吸光度。

2.4 煙酸還原鐵離子能力的測定

在試管中加入0.5mL樣品溶液，2.5mL的PBS緩沖液和2.5mL鐵氰化鉀溶液，震蕩均勻，50℃水浴20min，流水冷卻，然后加入2.5mL三氯乙酸溶液。混勻后，用3000r/min離心10min。吸取上清液2.5mL置于新的離心管中，再加入2.5mL蒸餾水和0.5mL三氯化鐵溶液，混合均勻后，用紫外分光光度計在700nm波長下測定吸光度。

3 結果

3.1 煙酸對羥基自由基清除的影響

機體過量的自由基則會引起蛋白質變性、酶失活、多糖降解、DNA鏈斷裂、生物膜結構損傷、細胞解體乃至機體病變和死亡。從圖1結果可知，隨著煙酸濃度增加，其對羥基自由基的清除率逐漸增大。當煙酸濃度為0.5mg/mL時，羥基自由基清除率為21.83%，表明煙酸具有一定的清除羥基自由基的作用。

3.2 煙酸對DPPH自由基清除的影響

DPPH自由基溶液在517nm處有強吸收，每個DPPH分子在溶液中可生成一個穩定的含氮自由基，當它與提供1個電子的自由基清除劑作用時，生成無色產物使溶液的典型紫色變淺。圖2表明，隨著煙酸濃度的增加，其對DPPH自由基的清除率增大，揭示煙酸具有一定的體外抗氧化活性。

3.3 煙酸對脂質過氧化物抑制作用的影響

隨著煙酸濃度的增加，煙酸對卵黃脂蛋白體系中脂質過氧化作用抑制率也隨之增加，其抑制作用與煙酸濃度呈現一定的量效關系。圖3表明，煙酸對卵黃脂蛋白脂質過氧化物有較好的抑制作用，最大抑制率為61.02%。

3.4 煙酸還原鐵離子能力的測定

在該反應過程中，Fe3+可被抗氧化物質還原成為Fe2+后在700nm波長下具有強吸收。因此，吸光度越大表明樣品還原能力越強。圖4可見，隨著煙酸濃度的增加，體系吸光度越大，表明煙酸具有一定的還原力。

4 討論

羥基自由基、過氧化氫及超氧陰離子自由基等是生物體內主要的活性氧自由基，由它們引發的體內脂質過氧化是機體衰老、動脈粥樣硬化、心血管疾病及腫瘤發生的重要原因。本文從煙酸對羥基自由基和DPPH自由基的清除作用，對脂質過氧化物的抑制作用和鐵離子的還原能力四個方面對煙酸的體外抗氧化進行了研究。結果表明，煙酸能夠清除羥基自由基和DPPH自由基，并且具有較強的脂質過氧化物抑制和鐵離子還原能力。

因此，煙酸具有一定的體外抗氧化活性，可能作為潛在的抗氧化劑，可能為揭示煙酸作為食品及飼料添加劑營養支持作用提供一定的理論基礎和依據。

參考文獻：

[1]Bogan KL，Brenner C.Nicotinic acid，nicotinamide，and nicotinamideriboside：a molecular evaluation of NAD+ precursor vitamins in humannutrition[J].Annu Rev Nutr，2008（28）：115-130.

[2]D Andrea E，Hey SP，Ramirez CL，et al.Assessment of the roleof niacin in managing cardiovascular disease outcomes：a systematicreview and meta-analysis[J].JAMA Netw Open，2019，2（04）：e192224.

[3]Bruckert E，Labreuche J，Amarenco P.Meta-analysis of the effectof nicotinic acid alone or in combination on cardiovascular eventsand atherosclerosis[J].Atherosclerosis，2010，210（02）：353-361.

[4]Massaro M，Scoditti E，Carluccio MA，et al.Oxidative stress andvascular stiffness in hypertension：A renewed interest for antioxidanttherapies[J].Vascul Pharmacol，2019（116）：45-50.