顱內出血新生兒血清TNF-α與IL-1β的臨床價值研究

徐會榮　盧媛玥　李銀華　王宏勇　韋登飛　蘇華平

[摘要] 目的 探討血清白細胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）在顱內出血新生兒的臨床價值。 方法 選擇2015年1月～2017年1月于天門市第一人民醫院住院治療的新生兒顱內出血患兒98例為研究對象（顱內出血組），同時納入同期出生的健康新生兒50名為對照組。分別于出生后24 h內及出生后3、7 d，取外周靜脈血液標本，采用雙抗體夾心酶聯免疫測定法檢測血漿IL-1β、TNF-α水平。隨訪患兒1年，統計預后情況。 結果 顱內出血組新生兒血漿IL-1β、TNF-α水平均明顯高于對照組（P < 0.05）。同時，出生后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平隨著時間逐漸下降（P < 0.05）。同出血量患兒在出生后24 h內，血漿IL-1β、TNF-α差異有統計學意義（P < 0.05）。其中出血量為大量的患兒，血漿IL-1β、TNF-α水平最高。顱內出血新生兒出血量與血漿IL-1β、TNF-α水平均呈正相關（r = 0.409、0.376，P < 0.05）。治愈組血漿IL-1β、TNF-α水平均顯著低于未愈組，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 IL-1β和TNF-α在顱內出血新生兒血漿中表達異常升高，且與血腫量呈正相關。顱內出血新生兒預后與血漿IL-1β和TNF-α密切相關，預后差的患兒血漿IL-1β和TNF-α顯著升高。

[關鍵詞] 顱內出血;新生兒;TNF-α;IL-1β

[中圖分類號] R722.1 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2019）05（b）-0063-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of serum TNF-α and IL-1β in neonates with intracranial hemorrhage. Methods From January 2015 to January 2017， 98 neonates with intracranial hemorrhage in Tianmen First People′s Hospital were selected as the subjects （intracranial hemorrhage group）， and 50 healthy newborns at the same time were selected as the control group. The levels TNF-α and IL-1β in plasma were detected by ELISA assay at 24 h， 3， 7 d after birth respectively. The patients were followed up for 1 year， and the prognosis was statistically analyzed. Results The levels of plasma TNF-α and IL-1β in intracranial hemorrhage group were significantly higher than those in control group （P < 0.05）. At the same time， plasma TNF-α and IL-1β levels gradually decreased after birth （P < 0.05）. There was a significant difference in plasma TNF-α and IL-1β in neonates with bleeding volume in 24 h （P < 0.05）. The neonates with highest blood volume had the highest plasma TNF-α and IL-1β levels （P < 0.05）. There was a positive correlation between the amount of bleeding and the levels of TNF-α and IL-1β in neonates with intracranial hemorrhage （r = 0.409， 0.376; P < 0.05）. The plasma TNF-α and IL-1β levels in the cure group were significantly lower than those in the unhealed group （P < 0.05）. Conclusion The expression of TNF-α and IL-1β in plasma of neonates with intracranial hemorrhage increased abnormally， and positively correlated with the amount of hematoma. The prognosis of neonates with intracranial hemorrhage is closely related to plasma TNF-α and IL-1β， plasma IL-1β and TNF-α are significantly increased in neonateswith poor prognosis.

[Key words] Intracranial hemorrhage; Newborn; TNF-α; IL-1β

新生兒顱內出血（intractanial hemorrhage）是常見的新生兒因產傷或缺氧引起的腦損傷，具有致殘率及致死率高的特點，部分幸存新生兒可遺留嚴重的神經系統后遺癥，如腦積水、癲癇及運動障礙等[1]。新生兒顱內出血包括硬膜下出血、原發性蛛網膜下隙出血、生發基質-腦室內出血、小腦出血和腦實質出血等多種類型，尤其是在早產兒中多見，是造成其死亡的主要原因之一[2]。顱內出血發生除可因原發性的出血導致的占位效應所致原發性顱腦損傷外，還可通過激活繼發性免疫反應，釋放大量的炎癥因子導致繼發性腦損傷。成人顱內出血的研究表明，血清白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平在損傷后顯著升高，且與損傷程度密切相關[3]。但是，目前關于顱內出血新生兒血清IL-1β、TNF-α的臨床價值仍鮮見報道。本研究通過觀察98例顱內出血新生兒血清IL-1β、TNF-α的動態變化，并與健康新生兒對照，探討顱內出血新生兒血清IL-1β、TNF-α的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年1月～2017年1月天門市第一人民醫院住院治療的新生兒顱內出血患兒98例為研究對象，設為顱內出血組，診斷標準依據第4版《實用新生兒學》[4]。98例顱內出血新生兒中，男51例，女47例;胎齡34～42周，平均（37.89±4.63）周;出生體質量2354～3721 g，平均（3157±952）g;確診為顱內出血時間，出生后2～24 h，平均（11.46±7.35）h。根據出血部位區分，其中蛛網膜下腔出血47例，腦實質出血25例，硬膜下出血9例，腦室內出血17例。按出血量分為小量（<15 mL）32例，中量（15～30 mL）27例，大量（>30 mL）39例。血腫體積計算方法按多田公式計算。同時納入同期出生的健康新生兒50名為對照組，男27名，女23名;胎齡34～42周，平均（38.74±2.15）周;出生體質量3152～4138 g，平均（3967±1307）g。兩組新生兒性別、胎齡、出生體質量等一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。研究對象排除標準：①合并妊娠期糖尿病、子癇前期等妊娠合并癥者;②出生時或出生后合并感染者;③伴心、肝、腎或其他系統疾病，或合并造血系統及自身免疫性疾病者;④呼吸窘迫綜合征、重度窒息及新生兒缺氧缺血性腦病者;⑤出生后1個月內死亡、轉院或自行出院者。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，兩組研究對象家屬和/或監護人對研究內容知情，自愿參與并簽署知情同意書。

1.2 方法

兩組新生兒均于出生后24 h內及出生后3、7 d，分別抽取5 mL外周靜脈血液標本。采用雙抗體夾心酶聯免疫測定法，檢測新生兒的IL-1β、TNF-α血清細胞因子水平。獲得血液標本后，4℃ 10 000 r/min（離心半徑=40 cm）離心1 min獲得血清，保存于-80℃冰箱中待測。IL-1β、TNF-α血清細胞因子檢測試劑盒購自武漢博士德生物試劑工程公司，具體操作嚴格按照說明書執行。

1.3 治療方法

對顱內出血新生兒組采取綜合對癥治療以及個體化治療?；純壕诿鞔_診斷后立即給予治療，具體方法包括止血、降低顱內壓、抗驚厥及營養腦細胞等，必要時可于病情穩定后采取高壓氧治療。

1.4 療效判斷標準

隨訪1年，依據患兒具體情況，將其預后分為治愈與未愈2種情況。治愈：治療后復查CT提示顱內出血灶消失，臨床癥狀及體征全部消失[5]。未愈包括3種情況：①治療后CT提示顱內出血灶消失或減小，但仍存在神經系統癥狀及體征;②顱內高壓癥狀無明顯改善甚至加重;③死亡[6]。

1.5 統計學方法

采用統計軟件SPSS 15.0對數據進行分析，正態分布的計量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗;重復測量的計量資料、多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用Q檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血漿IL-1β、TNF-α水平比較

顱內出血組新生兒血漿IL-1β、TNF-α水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05）。同時，出生后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平隨著時間逐漸下降（P < 0.05）。見表1～2。

2.2顱內出血組不同出血量與不同出血部位患兒血漿IL-1β、TNF-α水平比較

不同出血部位患兒血漿IL-1β、TNF-α水平差異無統計學意義（P > 0.05）。不同出血量患兒在出生后24 h內，血漿IL-1β、TNF-α水平差異有統計學意義（P < 0.05），其中出血量為大量的患兒，血漿IL-1β、TNF-α水平最高。見表3。

2.3 出血量與血漿IL-1β、TNF-α水平相關性分析

相關性分析結果示，顱內出血新生兒出血量與血漿IL-1β、TNF-α水平均呈正相關（r = 0.409、0.376，P = 0.009、0.012）。

2.4顱內出血組不同預后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平比較

比較出生7 d時不同預后患兒血漿IL-1β、TNF-α水平。98例患兒中，治愈65例，未愈33例，其中死亡2例。治愈組血漿IL-1β、TNF-α水平均顯著低于未愈組，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表4。

3 討論

新生兒顱內出血是新生兒常見的神經系統疾病，產傷、窒息、缺氧是其常見病因。嚴重的新生兒顱內出血甚至可導致腦干功能受損、出血后腦積水，以及其他并發癥，常易遺留有不同程度后遺癥。顱內出血病理生理機制不僅包括出血對腦組織的壓迫、破壞以及血腫占位效應導致的原發性顱腦損傷，出血后細胞因子的毒性作用亦造成了繼發性腦損傷，且繼發性顱腦損傷是影響患者預后的關鍵[7]。顱內出血后患兒在應激狀態下出現血清免疫細胞（如單核巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞）和某些非免疫細胞（如血管內皮細胞、神經母細胞等）激活，合成分泌具有高度生物學活性的炎性因子，在介導和調節炎癥中發揮重要作用，亦是導致繼發性顱腦損傷的重要機制[8]。成人腦出血的研究表明，多種細胞因子均異常表達，且與神經損傷程度及出血量密切相關，尤其是IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性細胞因子發揮極為重要的作用[9]。

IL-1β是炎性反應中的一個共同因子，具有多重調節功能，發揮重要的神經體液調節作用，調節T和B淋巴細胞增殖和分化，刺激造血細胞，參與炎性反應[10]。正常生理情況下，IL-1β水平較低，當機體出現腫瘤、炎性反應、自身免疫性疾病等應激反應時，其血漿含量急劇升高，且與疾病狀態密切相關[11]。研究表明，成人腦出血后IL-1β的顯著升高是出血后中樞神經系統炎性反應的重要標志，與損傷程度呈正相關[12]。腦出血后IL-1β可以通過多種機制加重繼發性顱腦損傷，包括刺激花生四烯酸的代謝使自由基和一氧化氮的合成、釋放增多，產生神經毒性;促進黏附分子的表達參與炎性反應;激活膠質細胞釋放IL-6等其他炎性細胞因子[13-15]。研究發現，IL-1β可以促進中樞神經系統膠質細胞釋放合成分泌IL-6，進而導致內皮細胞損傷，增加血腦屏障通透性，加重腦水腫及神經細胞凋亡[16]。因此，IL-1β在顱內出血中發揮核心作用，通過多種機制影響神經損傷的發生發展[17]。本研究發現，新生兒顱內出血后血漿IL-1β顯著升高，且與出血量密切相關，但是與出血部位無明顯相關性。同時，IL-1β亦與預后密切相關，患兒預后較差組，其血漿IL-1β水平明顯高于治愈組。這提示IL-1β可以作為判斷新生兒顱內出血預后的重要指標，但其臨床應用還有待進一步探討。

另一種重要的炎癥因子TNF-α，是與IL-1β類似，由活化單核-巨噬細胞產生的活性蛋白，亦可由中樞神經系統活化小膠質細胞、星形膠質細胞、血管內皮細胞，甚至某些部位的神經合成分泌[18-19]。TNF-α過度釋放，除通過促進與IL-1β相似的IL-6等炎癥因子釋放，介導繼發性顱腦損傷外，還可通過誘導基質金屬蛋白酶分泌，啟動促進包括血管內皮細胞基底膜在內的細胞外基質分解，破壞血腦屏障，誘發血管源性腦水腫[20]。TNF-α可以通過直接調控神經元、膠質細胞的細胞壞死，以及新血管形成等多種機制促進繼發性顱腦損傷的發生發展[21-22]。成人腦出血的研究已表明，TNF-α的表達明顯增加，且在循環中的表達亦明顯上調，可以作為監測患者腦出血疾病嚴重狀態的重要指標。生理情況下，TNF-α可以通過調控細胞增殖與循環免疫平衡，發揮保護作用，而疾病狀態下，TNF-α異常升高，且與顱內出血的量密切相關。同時，患兒預后較差組血漿TNF-α水平明顯高于治愈組，提示TNF-α可以作為判斷新生兒顱內出血預后的重要指標，但其進一步臨床應用還有待進一步探討。

綜上所述，IL-1β和TNF-α在顱內出血新生兒血漿中表達異常升高，且與血腫量呈正相關。顱內出血新生兒預后與血漿IL-1β和TNF-α密切相關，預后差的患兒血漿IL-1β和TNF-α顯著升高。

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（收稿日期：2018-08-29 ?本文編輯：蘇 ?暢）