白芷川芎鼻腔給藥制劑質量標準研究

2019-07-16 08:07:32高麗新王丕明

亞太傳統醫藥 2019年6期

高麗新，王丕明

(山西藥科職業學院，山西太原 030031)

白芷川芎鼻腔給藥制劑是以都梁丸[1]為原方，由白芷和川芎兩味中藥經制劑工藝加工而成，用于風寒瘀血阻滯脈絡所致的頭痛。白芷主要化學成分為香豆素類成分，具有廣泛的生理和藥理作用[2]，香豆素類成分主要為歐前胡素、異歐前胡素。筆者根據處方中白芷的化學成分特點，研究制定了白芷的定性鑒別方法及歐前胡素、異歐前胡素的含量測定方法，以便更好地控制制劑的質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子天平(沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；101A-2 干燥箱(上海市實驗儀器總廠)；TDE5-WS 多管架自動平衡離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；939 薄層制板儀(重慶南岸貝爾德儀器技術廠)；CAMAG TLC SCANNER 3 薄層色譜掃描儀(卡瑪公司)；Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)。

1.2 試藥

歐前胡素(中國食品藥品檢定研究院，批號：110826-201013)；異歐前胡素(中國食品藥品檢定研究院，批號：110827-201008)；白芷對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：120984-200602)；白芷、川芎(安徽省亳州市中信中藥飲片廠)；白芷川芎鼻腔給藥制劑(自制)；硅膠G(青島海洋化工廠)；含量測定所用試劑均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 白芷的薄層色譜鑒別[3]

2.1.1 供試品溶液制備取白芷川芎鼻腔給藥制劑2.5 mL，水浴揮干，殘渣加2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液制備精密稱取歐前胡素對照品4.98 mg、異歐前胡素對照品4.67 mg置10 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，用甲醇定容到10 mL，即得混合對照品溶液。另取混合對照品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.1.3 對照藥材溶液制備稱取白芷對照藥材0.5 g，加乙醚10 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.4 陰性對照溶液制備除白芷外，按處方比例稱取藥材適量，按照白芷川芎鼻腔給藥制劑的制備方法制備缺白芷陰性對照樣品。取2.5 mL缺白芷的陰性對照樣品，水浴揮干，殘渣加2 mL甲醇溶解，即得缺白芷的陰性對照溶液。

2.1.5 薄層鑒別按照薄層色譜法(通則0502)試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL，對照品溶液、對照藥材溶液各10 μL，分別點于同一硅膠 G 薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙醚(3∶2)為展開劑，在25 ℃下展開，取出，晾干，置紫外燈366 nm下檢視。結果：供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。結果見圖1。

1.缺白芷陰性對照品；2.歐前胡素、異歐前胡素對照品；

2.2 歐前胡素、異歐前胡素含量測定[4]

2.2.1 色譜條件色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相為甲醇-水(70∶30)；流速為1 mL/min；檢測波長為254 nm；柱溫25 ℃；樣品進樣量為10 μL；理論塔板數按歐前胡素計算應不低于3 000。

2.2.2 溶液制備歐前胡素對照品溶液制備：取歐前胡素對照品5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到儲備液。精密量取儲備液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得歐前胡素對照品溶液。異歐前胡素對照品溶液制備：取異歐前胡素對照品5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到儲備液。精密量取儲備液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得異歐前胡素對照品溶液。供試品溶液制備：精密量取2.5 mL白芷川芎鼻腔給藥制劑(相當于原藥材1 g)，水浴揮至盡干，殘渣用甲醇少量多次轉移至25 mL容量瓶中，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。

2.2.3 方法學考察陰性樣品干擾試驗：取缺白芷的鼻腔給藥制劑2.5 mL，水浴揮至盡干，殘渣用甲醇少量多次轉移至25 mL容量瓶中，超聲30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得缺白芷陰性樣品溶液。取歐前胡素對照品溶液、異歐前胡素對照品溶液、供試品溶液、缺白芷陰性樣品溶液，按上述色譜條件分別進樣分析，結果在該色譜條件下，缺白芷陰性樣品溶液對歐前胡素、異歐前胡素含量的測定無干擾，色譜見圖2、圖3、圖4、圖5。

圖2 歐前胡素色譜

圖3 異歐前胡素色譜

圖4 供試品色譜

圖5 缺白芷陰性對照色譜

線性關系：①分別精密量取歐前胡素對照品儲備液(0.498 mg/mL)0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積。以對照品溶液濃度(C)為橫坐標X，峰面積(A)為縱坐標Y，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=33 178X+2.676 4，R2=0.999 9。結果見表1、圖6。

表1 歐前胡素線性關系試驗結果

圖6 歐前胡素標準曲線

結果表明歐前胡素在0.0059～0.0358 mg/mL濃度范圍內，線性關系良好。

②分別精密量取異歐前胡素對照品儲備液(0.467 mg/mL)0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積。以對照品溶液濃度(C)為橫坐標X，峰面積(A)為縱坐標Y，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=249 21X+0.666 7，R2=0.999 8。結果見表2、圖7。

表2 異歐前胡素線性關系試驗結果

圖7 異歐前胡素標準曲線

結果表明異歐前胡素在0.005 6～0.033 6 mg/mL濃度范圍內，線性關系良好。

精密度試驗：分別取歐前胡素對照品溶液、異歐前胡素對照品溶液，按上述色譜條件，連續進樣5次進行測定，記錄峰面積，結果表明精密度良好。見表3。

穩定性試驗：取供試品溶液在室溫下放置，分別在0、4、8、12、16、24 h后按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。見表4。

表3 精密度試驗結果

表4 穩定性試驗結果

重復性試驗：取同一批白芷川鼻腔給藥制劑按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，按上述色譜條件進行含量測定，記錄峰面積，結果表明重復性良好。見表5。

表5 重復性試驗結果 (mg/mL)

回收率試驗：精密量取同批已知含量的白芷川芎鼻腔給藥制劑(歐前胡素含量為0.248 mg/mL，異歐前胡素為0.152 mg/mL)6份，每份4 mL，分別精密加入歐前胡素對照品儲備液(0.498 mg/mL)2 mL、異歐前胡素對照品儲備液(0.467 mg/mL)1 mL，混勻。按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行含量測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表6、表7。