牛流行熱的檢疫與防控措施

宣其東

（遼寧省鞍山市千山區動物衛生監督所，遼寧鞍山 114041）

牛流行熱的檢疫與防控措施

宣其東

（遼寧省鞍山市千山區動物衛生監督所，遼寧鞍山 114041）

牛流行熱又稱三月熱、暫時熱，是由牛流行熱病毒引起的一種急性、熱性傳染病。其特征為突發高熱，流淚，有泡沫狀流涎，鼻漏，呼吸促迫，后肢僵硬，跛行及明顯季節性。主要引起牛發病，尤其以奶牛最易感染。

牛流行熱；檢疫；防控

1 現場診斷

（1）流行病學：本病主要侵害牛，各種年齡、性別、品種的牛均可感染發病，以3～5歲的壯齡乳牛、黃牛易感性為最高，懷孕牛和高產乳牛感染后癥狀為最重，死亡率也較高。本病的發生有明顯的季節性，主要在蚊蠅多的季節流行，北方于8～10月份，南方可提前，多在潮濕季節流行。病牛是本病的主要傳染源。吸血昆蟲（蚊、蠅）叮咬病牛后再叮咬易感的健康牛而傳播。本病傳染力強，傳播迅速，短期內可使很多牛發病，呈大流行性或流行性，有明顯的周期性，約3～5年流行一次。

（2）活體檢疫：潛伏期3～7d，多突然發病，體溫升高達40～42℃，持續2～3d。病牛肌肉震顫，皮溫不整，精神高度委頓。流淚，畏光，眼結膜充血，眼瞼水腫。鼻鏡干熱，呼吸促迫，病牛發出哼哼聲。食欲減退或廢絕，反芻停止。多數發病牛鼻流炎性分泌物，成線狀，后變為黏性鼻涕，流涎，口角有泡沫。乳牛的產奶量急劇下降，有的停止。病牛喜臥地上，不愿行動，強迫行動則跛行，步態不穩，甚至倒地不能起立。多數病牛呈良性經過，病程3～4d恢復，病死率為1%～3%，若繼發感染，因跛行或癱瘓而淘汰。

（3）肉尸檢疫：沒有特征性的病理變化。急性死亡的病例，可見明顯的肺間質氣腫，有的肺充血與肺水腫。肺氣腫病例肺高度膨脹，間質增寬，內有氣泡，壓迫肺呈捻發音。肺水腫病例胸腔積有多量暗紅色液體，氣管和胸腔內積有大量液體，淋巴結充血、腫脹和出血。

2 實驗室檢驗

牛流行熱檢疫檢驗方法有病原學檢查和血清學檢查。病原學檢查主要是將可疑病牛的血樣靜脈接種健康牛，或腦內接種乳鼠盲傳，或在BHK21（或Vera）細胞上傳代，以接種動物是否發病或細胞是否出現細胞病變來確診。目前比較實用的血清學方法是微量血清中和試驗。

（1）材料準備：①牛流行熱病毒株：用巳適應BHK21或Vera細胞的毒株（哈爾濱獸醫研究所保存）。②犢牛血清：經檢測無牛流行熱抗體，使用前經56℃、30min滅活。③被檢牛血清：試驗前經56℃、30min滅活。④試驗細胞：BHK21或Vera細胞。⑤漢克氏平衡液、乳漢液、胰酶、乙二胺四乙酸二鈉細胞分散液：按常規方法配制。⑥抗菌素溶液：選用青霉素和鏈霉素，用滅菌的雙蒸餾水配制成1萬單位（μg/ml），分裝成小瓶，凍結保存。⑦細胞培養液：70% 199液加入10%犢牛血清和20%乳漢液、1%抗菌素溶液，用8.8%碳酸氫鈉調pH7.2～7.5。⑧細胞維持液：基本與細胞培養液相同，犢牛血清為3%。⑨24孔或96孔平底帶蓋塑料培養板。

（2）實驗方法：①抗原制備：將培養36～48h生長良好的BHK21細胞，棄去培養液，加入維持液，按維持液量的10%加入0.01稀釋的病毒，37℃吸附1h。倒去溶液，用漢克氏液洗滌后，加維持液，37℃培養，當細胞病變出現達75%以上時，收獲培養物，-20℃保存。

病毒抗原毒價測定：收獲的培養物凍融3次，以2000轉/min離心10min，吸取上清液，在微量板上用BHK21細胞測定其毒價。按改良的Reed-Meunch方法計算TCID50（抗原毒價應在104以上）。測定合格的抗原分裝成小瓶置-40℃中保存備用。保存期超過3個月應重新測定毒價。使用時將病毒配制成每50μl含100個組織細胞培養半數感染量的病毒液。

②中和試驗：A.被檢血清稀釋。取被檢血清70μl，加入210μl維持液，充分混合（此時血清稀釋度為1：4）。B.將稀釋的被檢血清滴加于微量板上，每份血清加5個孔，每孔50μl；抗原（病毒濃度為100個組織細胞培養半數感染量/50μl）分別加入前4個孔，余下的1孔補加維持液50μl為血清對照。C.設置對照。陽性、陰性血清對照孔：與被檢血清相同方法操作。正常細胞對照孔：不加血清和病毒抗原，補加100μl維持液。工作病毒對照孔：不加血清，補加維持液50μl。病毒回歸試驗：將病毒做含毒量為1000個、100個、10個和1個組織細胞培養半數感染量四個稀釋度稀釋，每個稀釋度滴加4個孔，每孔50μl，補加50μl維持液。D.將試驗板置微型振蕩器上混合，37℃中和1h，加入含1.5×105～2×105個/ml細胞的細胞懸液，每孔100μl，加蓋后置5%二氧化碳培養箱，37℃培養，96h判定結果。

③結果判定：當被檢血清對照、正常細胞對照正常，陰性血清對照各孔細胞都出現細胞病變，陽性血清對照各孔細胞全部被保護，病毒回歸試驗成立，工作病毒量符合要求，本試驗有效。陽性反應：被檢血清4孔中，有2孔或2孔以上細胞沒有出現細胞病變。陰性反應：被檢血清4孔或1孔細胞出現細胞病變。

3 防制及處理

自然病例恢復后有一定時期的免疫力。可試用牛流行熱疫苗接種免疫，但效果不令人滿意。早發現，早封鎖，早隔離，早治療。本病尚無特效藥物，病初可根據病情使用退熱藥及強心藥，并用抗菌素藥防止繼發感染。加強飼養管理，防止牛舍潮濕，防止過勞，夏季防暑，保持牛體清潔衛生，消滅蚊蠅等吸血昆蟲等，牛舍、運動場及用具用3～6%氫氧化鈉熱溶液嚴格消毒。有病變的內臟作工業用或銷毀，無病變的內臟經高溫處理后出場。

[1] 浩斯巴雅爾，娜仁高娃.牛流行熱的防控[J].畜牧與飼料科學，2011，（4）：85-86.