中草藥對(duì)大腸桿菌的體外抑菌試驗(yàn)

董曉龍 孫 越 張立永 趙月平 李子平 劉海斌

1.華北理工大學(xué)藥學(xué)院，河北唐山063210；2.河北北方學(xué)院牧業(yè)研究所，河北宣化075131

中草藥含有豐富的維生素、礦物質(zhì)以及皂苷、多糖、生物堿等成分，具有一定抗菌消炎作用，因此，生產(chǎn)綠色、安全、性能穩(wěn)定的中藥制劑來預(yù)防、治療大腸桿菌疾病已是一種趨勢(shì)。本試驗(yàn)選擇單味中草藥對(duì)大腸桿菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，以期為治療大腸桿菌的中藥制劑的配制提供理論參考。

1 材 料

1.1 中草藥的選購

中草藥黃芩、黃連、穿心蓮、大青葉、厚樸、秦皮、金銀花、白術(shù)、木香、甘草、黃芪、黃柏、茯苓、白芍、當(dāng)歸、馬齒莧、魚腥草、梔子、大黃、赤芍、白頭翁、知母、蒼術(shù)、葛根、石榴皮、板藍(lán)根、蒲公英和苦參，均購自張家口醫(yī)藥公司。

1.2 試驗(yàn)菌株

壩上長尾雞雞源大腸桿菌株1 號(hào)（血清型O78）、2 號(hào)（血清型O41）、3 號(hào)（血清型O24）、4 號(hào)（血清型O1+O148）。

2 方 法

2.1 單味中藥藥敏片試紙條的制備

取黃芩、黃連、穿心蓮、大青葉、厚樸、秦皮、金銀花、白術(shù)、木香、甘草、黃芪、黃柏、茯苓、白芍、當(dāng)歸、馬齒莧、魚腥草、梔子、大黃、赤芍、白頭翁、知母、蒼術(shù)、葛根、石榴皮、板藍(lán)根、蒲公英和苦參采用水煎煮法進(jìn)行提取，制成含生藥量為1 g/mL 的藥敏片試紙條，4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 培養(yǎng)基的制備

將60 ℃無菌麥康凱瓊脂倒入無菌平皿中，制成平板，然后將平皿置121 ℃蒸汽高壓20 min 滅菌，4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 單味中藥對(duì)大腸桿菌的體外抑制活性試驗(yàn)

取直徑為0.5 cm 的滅菌濾紙片在單味中藥的原藥液中浸泡1 h，取出備用。在已制備好的平板中，用劃線法分別將3 種菌株均勻涂在營養(yǎng)瓊脂上，每種菌株涂14 個(gè)平皿，無菌操作放置制備的中藥藥敏紙片，每種中藥藥敏片貼3 片，每個(gè)平皿貼2 種中藥藥敏片，然后將平皿置37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h 后測(cè)定抑菌圈的大小，取平均值。參照《微生物和檢驗(yàn)技術(shù)》判定結(jié)果：抑菌圈直徑＜10 mm 為鈍敏、抑菌圈直徑10～19 mm 為中敏、抑菌圈直徑≥20 mm 為高敏。

3 結(jié) 果

28 種中草藥對(duì)4 株大腸桿菌都具有不同的抑菌作用，其中黃柏、黃芪、赤芍、茯苓、蒼術(shù)、白芍、木香、大黃、葛根、當(dāng)歸和梔子對(duì)O24菌株不敏感；秦皮、苦參、穿心蓮、馬齒莧和大青葉高敏；其他為中敏。黃芪、蒼術(shù)、木香、大黃、當(dāng)歸和梔子對(duì)O41不敏感；秦皮、厚樸、黃芩、穿心蓮、馬齒莧、白頭翁和大青葉高敏；其他為中敏。黃柏、黃芪、赤芍、茯苓、蒼術(shù)、木香、大黃、葛根、當(dāng)歸、蒼術(shù)、白芍、金銀花和梔子對(duì)O78不敏感；黃連、秦皮、黃芩、馬齒莧、白頭翁、大青葉和魚腥草高敏；其他為中敏。黃柏、黃芪、赤芍、茯苓、蒼術(shù)、甘草、白芍、木香、大黃、當(dāng)歸、白術(shù)、蒲公英、梔子和知母對(duì)O1+O148不敏感；黃連、秦皮、穿心蓮、馬齒莧、大青葉和魚腥草高敏；其他為中敏（表1）。

表1 中草藥對(duì)大腸桿菌的體外抑菌圈的直徑 mm

4 討 論

體外抑菌結(jié)果表明，不同中草藥對(duì)不同血清型的大腸桿菌菌株具有不同的抑菌效果，秦皮和馬齒莧對(duì)O24菌株的抑菌活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑達(dá)到24.6 mm；馬齒莧對(duì)O41和O78的抑菌活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑分別達(dá)到31.2、26.5 mm；黃連對(duì)O1+O148的抑菌活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑達(dá)到28.6 mm。

我國具有豐富的中草藥資源，并有豐富的中藥臨床使用經(jīng)驗(yàn)。其提煉的成分種類繁多，大都屬于天然有機(jī)化合物，從結(jié)構(gòu)上分有苯丙素類、黃酮類、生物堿類、萜類、脂肪類等。本試驗(yàn)中，不同的中草藥對(duì)不同血清型菌株的抑菌活性與報(bào)道有所差異，可能與中草藥成分的提取工藝有關(guān)，也有可能與高溫、高壓處理有關(guān)。同時(shí)，本課題組先前研究發(fā)現(xiàn)，中草藥提取物的抑菌效果與菌株對(duì)抗生素耐藥程度不一定成平行關(guān)系，這可能是由于中草藥提取物含有多種成分，而各成分的活性強(qiáng)度各不相同，以及中草藥提取物的抑菌機(jī)制與抗生素不同所致。通過對(duì)28 種中草藥的體外抑菌試驗(yàn)，篩選出抑菌效果較好的中草藥10 種，分別是秦皮、厚樸、黃芩、苦參、黃連、穿心蓮、馬齒莧、魚腥草、白頭翁和大青葉。