雞滑液支原體病的防控應引起高度重視

徐懷英 劉星麗 秦卓明

2.山東師范大學，山東 濟南? 250014;3.山東省健牧生物藥業有限公司，山東 濟南? 250100）中圖分類號：S858.311.33? ? ?文獻標識碼：A? ? ?文章編號：1673-1085（2019）04-0009-06

近年來，國內外有雞關滑液支原體（Mycoplasma Synovias，MS）感染雞群發病的報道屢見不鮮，危害的品種包括商品肉雞、肉種雞，甚至商品蛋雞屢有發病報道。究竟是什么原因導致MS肆虐雞群？MS感染率為什么會居高不下？藥物防控和疫苗防控出現了哪些問題？本文從MS的流行現狀、發病原因、綜合防控等方面進行闡述，以使大家得到更多了解。

1? 對于MS的基本認識

1.1? 病原學? 雞滑液支原體（MS）隸屬于軟皮體綱、支原體目、支原體屬（屬Ⅰ），含有雙鏈DNA基因組，相對分子量為4.4～12×108Da，接近于非寄生體所需的最小DNA編碼能力極限。其基因組大小為799476bp，G+C含量為28%，有694個ORF（開放閱讀框架），占基因組的91%[1]。

MS無細胞壁，僅由胞漿膜包裹，生長需要膽固醇，寄生在人和動物體內。對營養要求苛刻。通常需要加入10%～20%人或動物的血清，用于提供膽固醇和其他長鏈脂肪酸[2]。這也是支原體難于進行分離和鑒定的重要原因。

MS支原體直徑約250～500nm，介于病毒和細菌之間，僅比痘病毒大1～2倍，是立克氏體的1/2，是大腸桿菌的1/5，常可以通過450nm的細菌濾器。MS是在具有自體繁殖能力和合成自身大分子的微生物中，體積最小、構造最簡單、能夠自我復制（能在無細胞培養基上生長）的最小的原核生物[3]。支原體和其他微生物的區別見表1。

1.2? 對外界環境的抵抗性? MS是支原體的一種。支原體種屬眾多，廣泛分布于自然界。由于支原體有限的生物合成能力使它們必須依賴寄主而生活。呼吸道、泌尿道、結膜表面、消化道等是支原體的寄生部位，大多數支原體是條件性致病菌。

支原體對外界環境的抵抗力不強，離開禽體即失去活力。一般在pH7.0～8.0時生長較好，低于7.0則被抑制或死亡。對紫外線敏感，不耐干燥，主要存在于人和動物的腔道黏膜。對重金屬鹽、苯酚、常用消毒劑，如乙醇、酚、甲醛、來蘇兒等較細菌敏感。對一些表面活性劑和脂溶劑極為敏感，這表明常規的消毒措施對MS均有效。

1.3? 危害性? MS主要入侵雞關節的滑液囊和腱鞘，能夠引起亞臨床呼吸系統疾病、滑膜炎和家禽氣囊炎，能夠造成肉雞生長遲緩、蛋雞產蛋率降低、蛋殼頂端異常以及自身免疫疾病，具有隱秘性、反復性和亞臨床危害性。MS對不同品種、不同日齡的雞均可危害。雛雞感染多與垂直傳播有關[4]。雛雞易感性比成年雞高，抵抗力隨年齡的增長而增強。大多數雞在2～3月齡高發[5]。

研究發現：從氣囊病變分離的MS菌株較易引起氣囊炎，而從滑膜分離的MS菌株較易引起滑膜炎。接種ND-IB疫苗或呼吸道感染可加重氣囊炎病情。IBV與MS共同感染時，氣囊炎的嚴重程度與IBV的毒力有關[6]。環境溫度低促進了氣囊病變。IBD可引起雞的免疫抑制，與MS雙重感染會導致更嚴重的氣囊病變。

1.4? 致病機理? MS主要寄生在呼吸道、關節和結膜等表面，可引起多個部位的急性或慢性感染。

支原體的致病機制與細菌不同，詳見圖1。在大多數情況下，MS不侵入組織和血液，只能粘附在呼吸道、關節或泌尿生殖道的上皮細胞[7]。支原體粘附于宿主細胞上是成功定殖、感染和致病的先決條件，也被認為是重要的毒力因子。從宿主細胞吸收營養，從細胞膜獲得脂質和膽固醇，進而引起宿主細胞的損傷。這種粘附性具有特異性，只能吸附在宿主細胞表面的受體上。支原體可粘附的細胞很廣，除上皮細胞外，還可粘附于紅細胞、巨噬細胞和精子表面等[8]。支原體在粘附后，可進一步通過不同的機制引起細胞損傷。

MS的致病作用可能與其產生的神經氨酸苷酶、過氧化氫、溶血素、溶菌酶或外毒素有關，MS以其小泡狀體經過宿主細胞的葉酸受體后吸附于上皮細胞并侵入固有層，上述物質使上皮細胞纖毛脫落，停止活動，上皮細胞逐漸退化死亡，出現炎癥反應。在關節，特別是趾關節和跗關節，可見有異嗜性白細胞和纖維素浸入關節腔或沿腱鞘浸潤。滑液囊因絨毛形成、淋巴細胞和巨噬細胞在滑膜下層彌散性或結節性浸潤而增生。此間，軟骨表面變色、變薄或變成凹陷，從而形成程度不一的關節炎癥狀。

2? MS的流行現狀

2.1? 流行病學? 在自然條件下，只有雞和火雞易感染MS。不同日齡的雞和火雞均可感染，日齡越低易感性越強。急性感染通常見于4～16周齡的雞和10～24周齡的火雞。慢性感染可見于任何日齡。

馬爽等（2016）調查顯示，在2010年3月～2015年10月，我國11個省市均有發病，且在6個省市具有明顯的上升趨勢。雞群發病日齡多見于1～4月齡，平均發病日齡為62日齡，發病率5.75%～25.77%，發病雞死亡率為4.09%～15.68%。血清學陽性率為30.23%～54.67%。一年四季均有發生，冬春季節最易發，且呈逐年上漲趨勢，這表明滑液支原體在我國雞群中有蔓延趨勢[9]。

Xue等（2017）利用ELISA檢測了2010～2015年中國21個省的44395份雞血清，MS的陽性率為24.7%～57.2%，平均陽性率高達41.19%[10]。

嘉云禽病檢測顯示，2017年，MS在我國蛋雞的發病率為5.19%，僅次于大腸桿菌（11.7%），高于雞毒支原體4.92%，同時高于禽沙門氏菌4.99%。2018年前9個月中，MS在3月、4月、5月、7月、8月的發病率分別為35.48%、20%、18%、18%、15%和9.52%，與大腸桿菌的發病率相當。

事實上，第十八屆世界禽病大會（2013）曾經做出論斷，MS在未來對雞群的危害可能要超過MG（雞敗血支原體）[11]。我們實驗室在臨床樣品中發現，MS的分離率明顯高于MG。圖2顯示的是2014～2017年間山東農業科學院家禽研究所送檢樣品MG和MS各自的發病數量。很顯然，MG（雞敗血支原體）呈現明顯的上升趨勢。

2.2? 臨床危害? MS感染初期病雞表現為采食量輕度減少，精神不振，隨著感染時間的增加，經呼吸道感染的雞出現慢性亞臨床呼吸道癥狀，由全身感染引起滑膜炎的雞表現為跗關節、趾關節、翅關節，爪墊出現腫脹，部分病雞龍骨外側皮膚手感增厚、腫脹。除此之外，還表現為食欲不振，羽毛粗亂，生長遲緩，雞冠蒼白萎縮，排綠色稀便，胸部皮下滑膜囊腫，行走困難，跛行，行動不便影響采食飲水。發病后期，病雞極度消瘦，呈現營養不良癥狀，最終可能導致衰竭死亡[12]。

2.3? 剖檢病變? 發病雞初期無病變。發病中期，病雞胸骨的滑液囊、跗關節周圍腱鞘的滑液囊中可見有淡黃色的清亮的膠凍樣粘液，隨患病時間增加，逐漸變成渾濁粘稠的乳酪樣黃白色滲出物。慢性病例的關節表面有橘黃色干酪樣物，隨病情進展在關節或其附近的腱鞘和肌肉間，爪墊內有淺黃色滲出物、黃色糊狀或干酪狀物。個別伴有呼吸道發病的病雞有時可見氣囊炎。

3? 高發原因分析

3.1? 種源問題? MS傳播的主要途徑就是垂直傳播（經種蛋傳播）。美國、歐盟等養禽發達國家和地區對該病主要采用種源凈化，并取得了較好的凈化效果。而我國尚未開展該病的種雞凈化。

Xue等（2017）調查表明，在我國463個雞群中，375個雞場呈現MS陽性（占80.99%），足見MS感染之嚴重[10]。Sun（2017）對中國2010～2012年16個省的地方品種雞進行抗體檢查，結果顯示血清陽性率平均為63.2%，而雞胚病原分離率高達16.29%，遠遠高于養禽發達國家的“零”容忍[13]。

2014年以來，以美國為首的養殖發達國家先后發生高致病性禽流感，我國重要的種雞來源被取消，取而代之的是自繁自養。在這種情況下，家禽的部分垂直傳播性疾病紛紛抬頭，不斷放大，導致上述疾病“雪上加霜”。種雞污染可能是最近幾年我國MS污染直線上升的主要原因。

3.2? 疫苗免疫覆蓋率低? 我國的大多數雞群未進行MS的疫苗免疫。主要原因是國內外對MS的研究滯后，開發出的疫苗品種相對較少。而疫苗除澳大利亞研發的弱毒活疫苗外，很少再有其他品種，滅活疫苗處于實驗室階段[14]。從理論上講，只有疫苗的免疫覆蓋率超過80%，疫病發生的概率才會大大降低。

3.3? 藥物效果較差? 支原體存在于細胞內，加上它本身缺乏細胞壁，與宿主細胞膜具有特殊的親和關系，再加上氣囊和關節部位血管較少，藥物很難到達，因此，對支原體有特效的藥物相對較少。

支原體對影響細胞壁合成的抗生素，如β-內酰胺類、萬古霉素等完全不敏感，對多黏菌素、利福平和磺胺類藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染的抗生素是四環素類（如四環素、多西環素等）、大環內酯類（如泰樂菌素、紅霉素、阿奇霉素和泰萬菌素等）、氯霉素類（氟苯尼考等）、雙萜烯類（泰妙菌素等）及一些氟喹諾酮類藥物（如氧氟沙星、加替沙星等）。與MG相比，MS分離株似乎對紅霉素有耐藥性。在體外，用低水平抗生素培養MS，能夠很快產生對紅霉素和泰樂菌素的高水平的耐藥性，但對恩諾沙星耐藥性產生較慢。沒有發現滑液支原體產生泰妙菌素和土霉素耐藥性。但是，藥物無法根除家禽體內的MS感染[15]。

3.4? 生物安全意識淡薄? 我們是一個養殖大國，但不是養殖強國。具體表現在：規模大、水平低、管理差，疫病發生高。聯合國糧食及農業組織（FAO）根據生物安全等級，將養殖場分為4類，其中第Ⅰ類和第Ⅱ類均是指具有較高生物安全水平的工業化家禽生產系統。第Ⅲ類（中級）是僅有中等生物安全水平的商業化畜禽生產系統。第Ⅳ類（最低級）是僅有最低生物安全水平的庭院式家禽飼養。值得關注的是，發達國家如美國、荷蘭等的養殖業均以高級別生物安全水平（Ⅰ和Ⅱ）的大型集約化飼養系統為主，甚至像巴西和泰國等發展中國家的養禽業，其主體也是Ⅰ和Ⅱ類。根據這一分類原則，我國大多數的養殖企業處在生物安全水平較低的Ⅲ類，僅有少數企業能達到Ⅰ和Ⅱ類的生物安全標準，疫病防控的壓力較大。

4? 對MS的綜合診斷

4.1? 病原的分離與鑒定? MS的分離培養和鑒定是最可靠和最經典的“金標準”。從急性病禽分離MS并不難，但在慢性感染階段，病變組織中含有MS活菌較少，特別是與其他支原體或病毒混合感染時，MS的分離鑒定工作費時費力，難度大。

4.1.1? 直接鏡檢? 在無菌條件下取病雞囊腫滲出液或者囊內液體，姬姆薩染色于油鏡下觀察，能夠看到大量呈球點狀的紫色菌體，少數呈鏈球狀排列，并存在大量白細胞以及粉紅色的網狀物質。

4.1.2? 病原分離和鑒定? 無菌狀態下用拭子取疑似感染的腫脹跗關節液及內容物于改良的Fery基礎培養基加入10%滅活血清以及0.01%NAD，37℃培養，連續傳代三次獲得待檢測的純培養物。初代分離時，因樣品中可能存在組織抗原、毒素和抗體，可采用小量培養的方法進行轉移培養，也可用肉湯接種物提高分離率。當肉湯培養物培養至酚紅指示劑的顏色從紅色變為橘紅或黃色時（通常需要3～7d），應將培養物進行傳代。MS對低pH較敏感，當培養基酚紅指示劑的顏色變黃后（pH<6.8）再培養幾小時，就可能死亡。接種平板3～5d后，顯微鏡放大約30倍可觀察到平板上的支原體菌落[16]。

4.2? 血清學診斷? 最常用的血清學檢測方法包括血清平板凝集試驗（SPA）、血凝抑制試驗（HI）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等。SPA快捷、方便，適合在生產中應用，但該方法存在交叉污染和交叉反應，并存在非特異性反應，出現假陽性，特別是曾接種油乳劑疫苗的雞群和其他細菌混合感染的雞群[17]。HI方法特異、準確，主要檢測血清中的IgG抗體，一般在感染后7d出現，不適合早期診斷。ELISA是一種在生產中較為常用的抗體檢測方法。這三種方法具有不同的特異性和敏感性。Luciano等（2011）發現這三種方法檢測結果一致性不顯著，最好與病原分離鑒定或分子診斷等有機結合起來[18]。

進行血清學診斷時，務必采用發病前和發病后雙份血清對比檢測。只有抗體滴度上升或感染比例增加時，方能確定感染。

4.3? 分子核酸鑒定? 隨著分子生物學技術的發展，滑液支原體的診斷方法已建立了核酸探針[19]、限制性酶切分析、細胞蛋白分析及PCR等試驗技術，可用于滑液支原體感染的早期診斷，其敏感性和特異性較血清學方法高，并且可用于雞毒支原體和滑液支原體的鑒別診斷[20]。

5? 綜合防控

MS感染的防治應該以預防為主，應采取以加強生物安全措施、種雞凈化、疫苗預防和藥物治療在內的綜合管理措施[21]。

5.1? 生物安全是降低MS感染的重要措施? MS的發病與環境因素密切相關。首先，應加強飼養管理，降低飼養密度，注意通風，保持舍內空氣新鮮，防止過熱過冷、濕度過高，定期清糞，防止氨氣、硫化氫等有毒有害氣體的刺激等;其次，應堅持“全進全出”制，最大限度地避免多日齡雞群混養;再次，定期帶雞消毒和環境消毒，加強衛生、消毒防范;最后，要合理分配日糧，定期添加維生素來加強機體自身的免疫力。

5.2? 做好種源凈化? 種源凈化是控制支原體發病的核心和關鍵。美國自1930年就開始其種源凈化行動，1970年之后，美國家禽支原體的發病率已降至0，成效顯著。統計數據表明：支原體凈化后的雞群，每只母雞在其一個產蛋期內比普通母雞可以多產蛋8～20個，經濟效益顯著提高。

種源凈化是一項造福我國家禽產業的長遠工程。對于需要凈化的雞群，不允許有疫苗免疫，否者，會干擾凈化結果的檢測。在開產前，對全群不少于10%雞群進行SPA血清學檢測，應全部陰性;在此后不超過90d的間隔中，對產蛋雞至少150只雞進行檢測，抗體應為陰性;對其后代雛雞進行檢測，應全部陰性。淘汰所有陽性雞和可疑雞。以此為基礎建立后備雞群，經過反復多次檢測均為陰性的雞群可以確定為無MS感染雞群。對凈化后的雞群應嚴格生物安全管理。

此外，在生產過程中，必須選擇使用SPF弱毒活疫苗，避免疫苗污染而感染雞群，這是一個非常重要的技術措施。

5.3? 疫苗接種? 在種源不能凈化、支原體污染嚴重的地區，疫苗接種是減少和預防支原體感染的有效方法，這是由我國的基本國情決定的。支原體的疫苗主要有兩種：弱毒疫苗和滅活疫苗，前者主要用于商品雞和蛋雞，后者主要用于種雞的免疫。

弱毒菌苗：澳大利亞研發出一株溫度敏感性滑液支原體活菌疫苗株（MS-H株），其安全性和有效性在實驗室試驗和田間試驗中均得到證實，其免疫劑量為4.8×105CFU，具有保護作用;除溫度敏感型之外，其他因子似乎也與MS-H疫苗株的致弱有關。這種疫苗已在澳大利亞廣泛應用。我國部分種雞場已推廣使用該疫苗[22]。

滅活疫苗：世界上已有商品化生產的MS油佐劑滅活菌苗問世。我國尚缺乏合法的疫苗產品。丁美娟等（2015）利用雞滑液支原體HN01株研制滅活苗用于預防MS[23]。

免疫程序：種雞群應弱毒疫苗和滅活疫苗聯合使用，先用弱毒疫苗，再用滅活疫苗。開產前免疫滅活疫苗。

抗體監控：活疫苗免疫1月后，抗體陽性率應在80%以上;滅疫疫苗免疫1月后，抗體陽性率應在70%以上。如果陽性率在40%以下，需要重新免疫。

5.4? 藥物防控? 藥物治療不能根除體內的滑液支原體，其藥物敏感性和雞毒支原體相同，對很多藥敏感。如在體外對泰萬菌素、泰樂菌素、氯霉素、林肯霉素、土霉素、壯觀霉素、螺旋霉素、四環素、硫粘菌素等敏感。其中，在臨床上，泰萬菌素、泰妙菌素對治療MS具有較好的臨床效果。適當的藥物對預防本病有作用，但對已出現癥狀的病雞治療效果有限[24]。下面的用藥僅供參考。

泰妙菌素：飲水中加入泰妙菌素（0.006%～0.025%），連用5d，對預防雞的氣囊炎和滑膜炎有效。嚴重者，可連續2個療程。

泰樂菌素或利高霉素：飲水中加入250～500mg/L，連用5d，具有治療效果。

泰萬菌素：飲水中加入250mg/L，連用5d，具有治療效果。

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收稿日期：2019-03-15

*基金項目：山東省自然科學基金（ZR2017MC038）;國家重點研發計劃（2016YFD0500800）;山東省重點研發計劃（2018GNC110020）。

作者簡介：徐懷英（1976-），女，漢族，山東冠縣人，博士，主要從事家禽傳染病防控研究，E-mail：hyingxu@163.com。

通訊作者：秦卓明，E-mail：qinzm1997@163.com。