超聲提取-氣相色譜法測定高粱中腈菌唑與烯唑醇農藥殘留量

陳順琴 楊暉 王愛民

摘要：利用超聲提取-氣相色譜法測定高粱中腈菌唑與烯唑醇農藥殘留。高粱樣品用不同比例的乙腈-丙酮進行提取，弗洛里硅藻土凈化，旋轉蒸發濃縮，最后采用氣相色譜-電子捕獲檢測器（ECD）進行測定。腈菌唑農藥線性范圍為0.012 5～0.400 μg/g，方法檢出限（3S/N）為0.002 μg/g，相對標準偏差（n=6）RSD為3.7%;烯唑醇農藥線性范圍為0.004 76～0.152 μg/g，方法檢出限（3S/N）為0.000 83 μg/g，相對標準偏差（n=6）RSD為1.2%。該方法簡單、高效、快速、靈敏，能滿足高粱中腈菌唑與烯唑醇農藥殘留量的測定。

關鍵詞：氣相色譜法;超聲提取;腈菌唑;烯唑醇;高粱

中圖分類號：S132? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）10-0146-04

Abstract： A method of ultrasonic assisted extraction combined with gas chromatography was used to determine pesticide residue of myclobutanil and diniconazole in sorghum.The sample was extracted by a mixture of acetonitrile and acetone，then purified with concentrated flory diatomite acid，concentrated with rotary evaporation，and analyzed with GC-ECD. Linearity range of myclobutanil was found between 0.012 5～0.400 μg/g，and the detection limit（3S/N） was 0.002 μg/g，and the values of RSD（n=6） was 3.7%;Linearity range of diniconazole was found between 0.004 76～0.152 μg/g，and the detection limit（3S/N） was 0.000 83 μg/g，and the values of RSD（n=6） was 1.2%. This developed method is simple，quickness，rapid，sensitive and can therefore be used for the determination of myclobutanil and diniconazole in sorghum.

Key words： gas chromatograph;ultrasonic assisted extraction;myclobutanil;diniconazole;sorghum

腈菌唑、烯唑醇均屬于高效、低毒、廣譜的新型三唑類殺菌劑農藥，主要對病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用，對子囊菌、擔子菌均具有較好的防治作用[1，2]。腈菌唑化學名稱為2-（4-氯苯基）-2-（IH-1，2，4三唑甲基）己腈[3];烯唑醇又名病除凈、速保利、特譜唑，化學名字為（E）-1-（2，4-二氯苯基）-4，4-二甲基-2-（1，2，4-三唑-1-基）-1-戊烯-3-醇[3]。該類殺菌劑主要用于防治谷物葉部和穗部病害，如霜霉病、斑枯病、萎凋病、黑粉病、腹黑病、銹病、瘡痂病等;在種子處理中用于預防治黑粉菌、腥黑粉菌和腔菌導致的病害;也可防治葡萄的霜霉病，玫瑰的霜霉病、銹病和黑斑病，花生的葉斑病，香蕉葉斑病和咖啡銹病;也用于果樹、蔬菜和其他觀賞植物。這類殺菌劑具有極高的殺菌活性、內吸性強、持效期長，兼有預防與治療的作用，是一種高活性的植物生長調節劑和殺菌劑。但其對人體的危害不容忽視，很多國家已經明確限定該農藥在食品中的最高殘留量[4]。

目前國內外文獻關于烯唑醇的殘留檢測方法主要有雙標記時間分辨熒光免疫分析[5]、高效液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS）[6-9]、高效液相色譜法-（HPLC）[10，11]、氣相色譜法（GC）[12-15]。在以上對于腈菌唑、烯唑醇殘留量檢測中液相色譜串聯質譜分析較多，但氣相色譜分析較少，且均是單獨對其中一種殺菌劑進行分析。本研究以貴州省仁懷高粱為研究對象，因在貴州省高粱主要用于釀酒，在種植過程中會用到烯唑醇、腈菌唑等殺菌劑，因此對于高粱中腈菌唑、烯唑醇檢測具有重要意義。

1? 材料與方法

1.1? 儀器與試劑

Agilent 6890N型氣相色譜儀（配ECD）;GC-2014型氣相色譜儀配氮磷檢測器（FTD）;HB-10250型數控超聲波清洗器;EYELA OSB-2000型旋轉儀蒸發儀;AL204型電子天平;80-2臺式低速離心機。

標準儲備品：腈菌唑、烯唑醇均為色譜純（純度>99.0%），購自SIGMA-ALDRICH公司，取適量腈菌唑、烯唑醇分別配制成5 μg/mL標準儲備液。

甲醇、乙腈、二氯甲烷均為高效液相色譜純;乙酸乙酯、石油醚、無水硫酸鈉均為分析純;弗洛里硅藻土為農殘級（60～100目），中性氧化鋁，層析柱：30 cm×10 mm。

1.2? 色譜條件

載氣：高純氮氣（99.999%）;進樣口溫度（INJ）：280 ℃;檢測器溫度（DET）：320 ℃;色譜柱：弱極性SE-54石英毛細管色譜柱（50 m×0.32 mm×0.32 μm），溫度（COL）：260 ℃;分流進樣，分流比為45∶1，柱流速：1.5 mL/min;尾吹氣流量60 mL/min。

1.3? 試驗方法

1.3.1? 樣品提取? 稱取粉碎均勻的高粱樣品5.00 g于250 mL具塞錐形瓶中，加20 mL乙腈-丙酮（3∶1，V∶V，下同）搖勻，超聲20 min，收集提取液;再加入10 mL乙腈-丙酮（1∶1）超聲10 min，合并兩次提取液，提取液經無水硫酸鈉除水過濾至濃縮瓶中，并于45 ℃的水浴下濃縮至近干后用乙腈定容至2 mL，待過柱凈化。

1.3.2? 樣品凈化? 層析柱（30 cm×10 mm）自下而上依次填入2 cm無水硫酸鈉、4 cm弗洛里硅藻土、2 cm無水硫酸鈉。凈化柱填好后用10 mL乙腈-丙酮（3∶1）預淋洗柱子，棄去淋洗液，將待凈化試樣轉移至柱子并用5 mL乙腈-丙酮（3∶1）洗滌濃縮瓶并倒入凈化柱中，重復3次，再用5 mL乙腈-丙酮（3∶1）淋洗柱子，收集洗脫液，在旋轉蒸發儀上濃縮至近干，加5 mL的正己烷置換溶劑再次濃縮至近干，用正己烷定容至2 mL供色譜分析。

2? 結果與分析

2.1? 色譜行為

腈菌唑、烯唑醇標準溶液色譜圖見圖1。

2.2? 色譜檢測器的選擇

腈菌唑、烯唑醇這兩種化合物均含有特征元素N、Cl，試驗分別比較了兩物質在氣相色譜電子捕獲檢測器（ECD）與火焰熱離子檢測器（FTD）上的參數大小，結果見表1，對比分析得到腈菌唑、烯唑醇采用ECD檢測器效果良好，分析靈敏度高。

2.3? 提取溶劑的選擇

腈菌唑、烯唑醇能溶解于不同的有機溶劑，本研究選取乙腈、丙酮、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、乙腈-丙酮（1∶1）、乙腈-丙酮（3∶1）作為提取溶劑對比回收率，結果見圖2。結果表明，提取溶劑為純乙腈、乙腈-丙酮（1∶1）濃縮時間較長，成本較高。因此，本試驗采用乙腈-丙酮（3∶1）作為試驗提取溶劑。

2.4? 提取方法的選擇

試驗分別比較了不同提取方法下的回收率，結果見圖3。結果表明，多次超聲提取效果較好、回收率較高。

2.5? 凈化方法選擇

試驗分別選取弗洛里硅藻土固相萃取柱、氧化鋁固相萃取柱、活性炭柱對樣品進行凈化，結果見圖4。結果表明，活性炭柱對樣品的吸附能力很強，洗脫耗時較長，不利于樣品凈化分析;氧化鋁柱去除樣品色素效果較差，且干擾大回收率較低;弗洛里硅藻土回收率較高，且除干擾物質效果良好，有利于色譜定性與定量。弗洛里硅藻土凈化樣品加標回收率見圖4。

2.6? 方法的回收率與精密度

稱取粉粹的高粱樣品6份，每份5.00 g，分別添加相同濃度的混合標準溶液。前處理方法的回收率、精密度見表2。結果表明，該方法回收率均在83.2%～118.0%范圍內，滿足分析要求。方法精密度為8.3%～8.8%，說明該方法穩定性良好，適用于樣品分析。

2.7? 方法應用

在谷物類糧食（小麥、大米、玉米、蕎麥）中，各物質的色素及脂類含量差異較大，為了進一步檢驗該方法的實用性，對以上幾種糧食進行了加標回收率試驗。將小麥、大米、玉米、蕎麥等谷物類糧食連皮一起粉碎，稱取5.00 g樣品置于錐形瓶進行加標回收率試驗，分析條件采用高粱中腈菌唑、烯唑醇的分析條件，設3個加標梯度，每個加標濃度設3個平行，回收率取平均值，加標量濃度與回收率見表3。對表3的數據進行分析得到小麥、大米、玉米與蕎麥等樣品中腈菌唑的回收率為70.2%～103.8%，烯唑醇回收率為78.0%～96.5%，滿足分析要求，樣品凈化后無雜質干擾。因此該方法能用于不同種糧食中腈菌唑、烯唑醇殘留量檢測。

運用已建立并優化的方法，對貴陽市各地區的谷物（高粱、小麥、大米、玉米、蕎麥）中腈菌唑、烯唑醇殘留量進行檢測。結果表明，腈菌唑、烯唑醇檢出率極小、含量少，低于國家食品安全要求限量值（GB/T 2763-2012）[16]，檢測結果見表4。

3? 結論

本研究建立了高粱中腈菌唑、烯唑醇等農藥殘留檢測方法，并將該方法應用于小麥、大米、玉米、蕎麥等農作物中。樣品采用超聲波震蕩提取，弗洛里固相凈化柱凈化，氣相色譜電子捕獲器檢測檢測。結果表明，該方法檢出限高、靈敏度高，同時回收率也在農殘類回收率要求范圍之內。

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