實時熒光定量PCR構(gòu)建牛源糞腸球菌esp標(biāo)準(zhǔn)曲線

樊 杰，孫康永杰，魏亞琴，楊宇澤，萬學(xué)瑞，丁巨財，王 川*

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州730070；2.甘肅省科學(xué)院生物研究所厭氧微生物中心，甘肅 蘭州730000；3.北京市畜牧總站，北京100101）

腸球菌是一種革蘭陽性球菌， 在自然環(huán)境以及人和動物消化道內(nèi)廣泛分布，是人和動物腸道正常菌群的一部分， 糞腸球菌(Enterococcus faecalis)屬于腸球菌的一種，是人和動物腸道內(nèi)主要菌群之一， 能產(chǎn)生細菌素等抑菌物質(zhì)，抑制大腸桿菌和沙門氏菌等病原菌的生長，改善腸道微環(huán)境；同時其還能抑制腸道內(nèi)產(chǎn)尿素酶細菌和腐敗菌的繁殖，減少腸道尿素酶和內(nèi)毒素的含量，使血液中氨和內(nèi)毒素的含量下降[1]；另一方面當(dāng)其侵入其他部位（如口腔、尿道、乳房等）會造成牙髓根尖周病、尿路感染、乳房炎等多種疾病。臨床實驗研究已發(fā)現(xiàn)，在乳房炎患牛乳房組織及分泌乳汁中能夠分離得到糞腸球菌[2]。TODHUNTE 等發(fā)現(xiàn)在干乳期奶牛乳房疾病的病原微生物中糞腸球菌的比例達22.5%-70.4%[3]。esp（Enterococcus surface protein）基因的全長5791 bp，結(jié)構(gòu)獨特，核心區(qū)域由多個堿基序列重復(fù)組合而成，由其編碼表達的糞腸球菌表面蛋白是一種黏附素，這是腸球菌眾多致病因素之一，其在腸球菌對宿主細胞的黏附定植和逃避宿主免疫清除方面起到一定作用[4]。本實驗室前期在大腸埃希氏菌BL21 中表達了部分牛源糞腸球菌表面蛋白ESP，利用生物信息學(xué)軟件分析其編碼氨基酸的基本理化性質(zhì)[5]。目前檢測糞腸球菌的方法有比較傳統(tǒng)的革蘭氏染色法、細菌分離培養(yǎng)、生化試驗檢等；……