藤茶中二氫楊梅素的提取工藝研究

張紅忠，雷 林，羅正江，李紅敏，杜東陽(yáng)，張亞洲，吳 琴

(貴州理工學(xué)院食藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550003)

0 引言

藤茶學(xué)名顯齒蛇葡萄，系由葡萄科植物顯齒蛇葡Ampelopsis grossedentata (Hand.-Mazz.) W. T. Wang. 的嫩莖葉加工而成，主要分布于長(zhǎng)江流域以南，如湖南、廣西、貴州、福建等地海拔400-1 300米的山地灌叢中、林中、石上、河邊[1]。研究表明藤茶中主要含有二氫楊梅素等二氫查耳酮類成分，最高含量可以高達(dá)10-15%左右[2-3]；二氫楊梅素是較為特殊的一種黃酮類化合物，在解除酒精中毒、預(yù)防酒精肝、脂肪肝等方面具有特殊功效，在食品添加劑領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景[4-5]。本文現(xiàn)通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，從藤茶中提取二氫楊梅素的工藝進(jìn)行了初步研究，為藤茶進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供可靠的科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1200 series; DAD 檢測(cè)器；色譜柱：Phenomenex(Gemini C18， 5 μm， 250*4.60 mm)；Royalstar全自動(dòng)煎藥壺，型號(hào)：ysh3501B。

1.2 藥品與試劑

乙腈(HPLC級(jí)，成都科龍?jiān)噭┯邢薰?；甲醇(HPLC級(jí)，成都科龍?jiān)噭┯邢薰?；食用酒精；磷酸(分析純，北京化工廠)；水為自制純凈水；二氫楊梅素對(duì)照品自制，純度>98%；藤茶為作者本人購(gòu)買(二氫楊梅素含量4.38%)。

2 方法與結(jié)果[6-7]

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

經(jīng)文獻(xiàn)檢索，藤茶中二氫楊梅素的檢測(cè)波長(zhǎng)確定為254 nm。通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相的選擇：乙腈：水=(18:82)等度洗脫時(shí)色譜分離條件較好。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取對(duì)照品二氫楊梅素21.2 mg至100 ml量瓶中用甲醇溶解得A，用甲醇稀釋至刻度。溶液搖勻后，10 μl 注入色譜儀，記錄色譜圖。如圖1所示。

圖1 空白甲醇的HPLC色譜圖

圖2 二氫楊梅素對(duì)照品HPLC圖

圖3 藤茶提取工藝中分析樣品的HPLC圖

2.3 樣品的處理

取藤茶30克，按研究用提取實(shí)驗(yàn)進(jìn)行提取，得到溶液用提取溶劑稀釋至1 000 ml，溶液搖勻后，10 μl 注入色譜儀，記錄色譜圖。如圖2所示。

2.4 藤茶提取溶劑的選擇

2.4.1 提取液提取過(guò)程

分別稱取藤茶30 g，用60%、70%、80%的乙醇溶液進(jìn)行提取2次，加入10、8倍量，提取時(shí)間為45、30 min，合并兩次提取濾液，用提取溶劑稀釋至1 000 ml，搖勻。

2.4.2 收膏率的測(cè)定

取上2.4.1中溶液，精密量取其中50 ml溶液至蒸發(fā)皿中蒸發(fā)至干，再于105烘干后稱重，計(jì)算得收膏率。

2.4.3 二氫楊梅素含量測(cè)定

再精密量取2.4.1溶液5 ml至50 ml量瓶中，用提取溶劑稀釋至刻度后，搖勻，10 μl 注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如下圖。結(jié)果如圖3。

采用加權(quán)評(píng)分法進(jìn)行評(píng)價(jià)，二氫楊梅素含量測(cè)定和收膏率均為50%系數(shù)，以其中最高為100分，其它計(jì)算比例換算分?jǐn)?shù)，得總分比較。結(jié)果見(jiàn)表1、2、3。

表1 不同濃度乙醇提取后收膏率

表2 不同濃度乙醇提取后二氫楊梅素含量

表3 不同濃度乙醇提取后評(píng)價(jià)得分

通過(guò)不同溶劑對(duì)藤茶提取的對(duì)比，以二氫楊梅素和收膏率為考察指標(biāo)，綜合評(píng)分發(fā)現(xiàn)用70%乙醇提取藤茶效果最優(yōu)。

2.9 藤茶提取的正交實(shí)驗(yàn)[8-9]

通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇70%乙醇作為提取溶劑進(jìn)行正交提取實(shí)驗(yàn)。設(shè)制提取溶劑用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間為因素，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以二氫楊梅素和收膏率權(quán)重系數(shù)各為50%，以其中最高為100分，其它計(jì)算比例換算分?jǐn)?shù)，為綜合指標(biāo)進(jìn)行分析。結(jié)果見(jiàn)表4、5、6、7、8、9。

表4 不同濃度乙醇提取后收膏率

表5 不同濃度乙醇提取后二氫楊梅素含量

表6 藤茶提取正交實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)得分

表7 藤茶提取正交試驗(yàn)的因素與水平

表8 藤茶提取工藝正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)及結(jié)果

表9 藤茶提取工藝正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果

注：F0.05(2，2)=19，F(xiàn)0.01(2，2)=99

方差分析結(jié)果表明，提取次數(shù)對(duì)二氫楊梅素提取結(jié)果有顯著的影響，而溶劑用量和提取時(shí)間均無(wú)顯著性影響。但是結(jié)合直觀分析，提取次數(shù)對(duì)提取影響最大，其次是提取時(shí)間，溶劑用量對(duì)提取二氫楊梅素影響最小。考慮到藥材煎煮過(guò)程中便利原則，優(yōu)選提取工藝條件為A2B3C1，即藤茶藥材30 g，加70%乙醇10，7，7倍，煎煮3次，煎煮時(shí)間20，10，10 min。

3 結(jié)語(yǔ)

本研究對(duì)藤茶中提取二氫楊梅素工藝研究初步考察，方法為首先對(duì)提取溶劑進(jìn)行了考察，確定了70%的乙醇為溶劑；然后對(duì)提取溶劑下的溶劑用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間用正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行考察，優(yōu)選提取工藝條件為藤茶藥材30 g，加70%乙醇10，7，7倍，煎煮3次，煎煮時(shí)間20，10，10 min。

本次研究對(duì)從藤茶中提取二氫楊梅素的工藝進(jìn)行了初步考察，按優(yōu)化工藝進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果二氫楊梅素的總提取率為83.4%，表明該工藝穩(wěn)定可行，本研究結(jié)果為從藤茶中提取二氫楊梅素確定了條件，為下一步更好的開發(fā)與利用藤茶提供最直接的科學(xué)依據(jù)。