豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征混合感染的PCR診斷

王松梅

河南省通許縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南通許 475400

豬瘟（CSF）又稱(chēng)“爛腸瘟”，是一種病毒性傳染病，致病原為豬瘟病毒（CSFV），具有很強(qiáng)的傳染性，不同年齡、品種和性別的豬都易感，豬感染后高熱，呼吸困難，皮膚表面有出血點(diǎn)，在養(yǎng)豬生產(chǎn)中有很高的發(fā)病率，雖然我國(guó)目前使用的豬瘟兔化弱毒疫苗在一定程度上控制了豬瘟的流行，但豬瘟感染的情況仍時(shí)有發(fā)生[1]。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱(chēng)“藍(lán)耳病”，也是一種病毒性傳染病，致病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV），主要引起懷孕母豬流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎以及新生仔豬的高死亡率。PRRSV具有免疫抑制性，豬感染PRRSV后病豬的免疫力降低，很容易發(fā)生混合感染和繼發(fā)感染，且對(duì)常規(guī)疫苗的免疫接種不產(chǎn)生免疫應(yīng)答[2]。本文針對(duì)2018年11月某豬場(chǎng)發(fā)生的1例疑似2種病原混合感染的病例進(jìn)行了臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷，最終通過(guò)PCR確診為CSF和PRRS混合感染，診治過(guò)程如下。

1 臨床特征

該飼養(yǎng)場(chǎng)共有育肥豬450頭，發(fā)病豬為2月齡育肥豬，病豬發(fā)病突然，體溫升高，高熱稽留，精神沉郁，嗜睡，食欲不振，呼吸困難，皮膚潮紅、有點(diǎn)狀出血點(diǎn)，耳朵呈藍(lán)色，發(fā)病后曾用抗生素治療無(wú)效，發(fā)病豬一般在5 d內(nèi)死亡，剖檢病死豬可見(jiàn)全身淋巴結(jié)腫大、出血，脾臟梗死，腎臟表面有出血斑點(diǎn)，肺有彌漫性炎癥，心臟表面有出血點(diǎn)，膀胱、膽囊也有點(diǎn)狀出血。通過(guò)臨床癥狀和病理剖檢，初步判斷為疑似CSF與PRRS混合感染，無(wú)菌取發(fā)病死亡豬的淋巴結(jié)、腎臟、脾臟等病料組織送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

將采集的病料研磨處理，離心取上清液作為檢測(cè)樣品，利用病毒基因組提取試劑盒（購(gòu)自北京百泰克生物科技有限公司）提取核酸，參照蔣成硯等[3]的方法分別合成CSFV和PRRSV的特異性檢測(cè)引物。以提取的檢測(cè)樣品核酸為模板，分別利用CSFV和PRRSV檢測(cè)引物對(duì)其進(jìn)行一步法RT-PCR擴(kuò)增（一步法RT-PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序詳見(jiàn)表1），擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳觀(guān)察顯示擴(kuò)增片段的大小分別為 603 bp（PRRSV）和 508 bp（CSFV），這與蔣成硯等[3]的報(bào)道結(jié)果相符，說(shuō)明發(fā)病豬為CSF和PRRS混合感染，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)對(duì)病例進(jìn)行了確診。

表1 一步法RT-PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序

3 防控措施

疫情確診后，病豬應(yīng)及時(shí)隔離飼養(yǎng)，病死豬全部深埋并無(wú)害化處理，病豬的糞便也做好無(wú)害化處理，豬場(chǎng)全部用3%氫氧化鈉徹底消毒處理，對(duì)發(fā)病豬應(yīng)用CSF與PRRS高免血清進(jìn)行治療，同時(shí)應(yīng)用抗生素治療，防止繼發(fā)感染。對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)健康豬群接種CSF疫苗，間隔1周后接種PRRS疫苗，通過(guò)一系列的防控措施，豬場(chǎng)疫情得到有效控制，沒(méi)有新發(fā)和死亡病例。

4 討論

本次疫情的發(fā)生可能與氣溫驟降導(dǎo)致豬抵抗力下降有關(guān)，通過(guò)觀(guān)察，養(yǎng)殖場(chǎng)的飼養(yǎng)管理比較混亂，沒(méi)有按照免疫程序進(jìn)行常規(guī)免疫接種。隨著規(guī)模化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，疾病表現(xiàn)形式更加復(fù)雜和多樣化，如果飼養(yǎng)管理不到位，豬場(chǎng)很容易發(fā)生豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬、豬圓環(huán)病毒等疾病的混合感染[4]。CSF和PRRS的防控還是以疫苗免疫為主，由于PRRSV有很強(qiáng)的免疫抑制性，所以CSF和PRRS疫苗的免疫接種不能同時(shí)進(jìn)行，此外也要做好其他常見(jiàn)疫病疫苗的免疫接種工作。發(fā)生疫情時(shí)，應(yīng)對(duì)疑似感染豬及時(shí)隔離飼養(yǎng)，根據(jù)臨床癥狀做出初步診斷，確診要利用實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法，PCR方法是疾病的快速診斷方法，通過(guò)對(duì)核酸片段的特異性擴(kuò)增，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床病料的快速診斷，是目前應(yīng)用最廣泛的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。鑒于此，本研究采用實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)方法，確診為CSF和PRRS混合感染，確保了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠。多病原混合感染使疾病的臨床表現(xiàn)更加復(fù)雜，為了防止混合病原感染情況的發(fā)生，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)要做好養(yǎng)殖飼養(yǎng)管理，保持環(huán)境美化和清潔，加強(qiáng)相關(guān)疾病的檢驗(yàn)檢疫，冬季注意豬舍的防寒保暖，避免擁擠和潮濕，低溫和不良的飼養(yǎng)環(huán)境會(huì)造成豬的抵抗力下降。只有加強(qiáng)平時(shí)的飼養(yǎng)管理，定期進(jìn)行疫苗的免疫接種，才能保持群體的免疫水平，控制疾病的暴發(fā)和流行，減少由疫病造成的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)損失。