氣相色譜法測定香味劑中桉油精肉桂醛百里香酚及香芹酚的含量

羅成江,周 煒,侯 軒,周芷錦,陳 勇,施杏芬,周志強

(浙江省獸藥飼料監察所,浙江 杭州 311199)

香味劑是目前應用最為廣泛的調味劑之一。畜牧養殖中常應用于哺乳幼畜補充料、斷奶開食飼料、產奶牛飼料和魚、蝦餌料中,以改善飼料氣味,誘導動物采食[1]。桉油精為一種味似樟腦的無色液體,屬單萜類化合物,主要存在于桉葉、迷迭香、番石榴等植物揮發油中,具有抗菌、抗炎、殺蟲、鎮痛、促進透皮吸收等作用。桉油精可作為皮膚滲透增強劑、鼻血管收縮劑、鎮咳劑、消毒劑、殺蟲劑、芳香劑等應用于醫藥、工業、香料行業中[2]。香芹酚和百里香酚對各種細菌、病毒以及螨類等微生物有一定的抑制作用,被廣泛應用于飼料添加以及一些口腔衛生品和洗滌物品,為目前應用最為廣泛的重要香料之一[3]。肉桂醛又名桂皮醛,β-苯丙烯醛,3-苯基-2-丙烯醛,具有強烈的肉桂香氣,肉桂醛具有殺菌消毒防腐,抗病毒、抗腫瘤,加強胃腸道運動等功效,能促進和改善動物生長性能,增進飼養動物食欲,能提高飼料消化利用率以及動物產品質量,同時飼料中添加肉桂醛能有效防止飼料變質腐敗,延長保質期[4]。目前關于桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚的研究較多[5-7],但尚無飼料香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚同時檢測的文獻報道。本研究建立了同時測定飼料香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚含量的氣相色譜法,本方法操作簡便、準確可靠、選擇性好,為香味劑的檢測提供了技術支持。

1 材料與方法

1.1 儀器 氣相色譜儀配FID檢測器(安捷倫科技有限公司6890N);電子天平(瑞士METTLER公司,XS205DU,十萬分之一)。KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與材料 桉油精對照品為中國食品藥品檢定研究院產品,批號為110788-201506,純度為98.4%;肉桂醛對照品為 D.E公司產品,批號為106718,純度為98.9%;百里香酚對照品為中國食品藥品檢定研究院產品,批號為100508-201603,純度為99.9%;香芹酚對照品為ChromaDex公司產品,批號為00003230-REG,純度為98.6%;桉油、肉桂醛、百里香酚及香芹酚原料由浙江某公司提供;無水乙醇為分析純。

1.3 氣相色譜條件 氣相色譜條件：檢測器：FID;毛細管色譜柱：DB-WAX(30 m×0.53 mm×1.00 μm);載氣：N2;流速：5.0 mL/min;分流比：10∶1;進樣口溫度：250℃;檢測器溫度：250℃;升溫程序：初溫70℃,以 5℃/min速率升溫至120℃,再以20℃/min速率升溫至220℃,保持5 min;進樣量：1 μL。

1.4 溶液的配制

1.4.1 對照品溶液的配制 分別精密稱取桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚對照品10 mg于25 mL容量瓶中,用無水乙醇溶解并定容至刻度,搖勻,即為對照品溶液。

1.4.2 供試品溶液的配制 準確稱取1 g樣品置于100 mL容量瓶中,加適量無水乙醇,超聲助溶20 min,冷卻至室溫,用無水乙醇定容至刻度,搖勻,濾過,即為供試品溶液。

2 結果與討論

2.1 色譜圖 對照溶液、添加回收和空白樣品的色譜圖見圖1。由色譜圖可見桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚得到了完全分離,峰形對稱,無雜質峰干擾。

2.2 線性關系考察 配制濃度為1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、 20 μg/mL、 100 μg/mL、 400 μg/mL、2000 μg/mL的香芹酚、百里香酚、肉桂醛及桉油精系列混合標準溶液,從低濃度到高濃度依次進樣,按上述色譜條件分析,以峰面積為縱坐標、標準溶液濃度為橫坐標,進行線性回歸,求得回歸方程,結果見表1。

2.3 檢測限 按上述色譜條件,將對照品溶液逐步稀釋,同時記錄色譜圖(圖2),以10倍信噪比濃度為定量限,該方法的定量限為100 mg/kg。

圖1 色譜圖

表1 4種藥物的線性結果

圖2 色譜圖

2.4 回收率和精密度試驗 根據香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚添加達到一定藥效和市場臨床使用劑量,共添加3個含量,分別為2%、10%和20%。由于添加量較大,采用原料添加。以發酵豆粕為空白樣品,準確稱取1 g發酵豆粕置于100 mL容量瓶中,添加適量香芹酚、百里香酚、肉桂醛及桉油原料,混合均勻,按上述方法測定,進行加樣回收率試驗。回收率結果見表2,從回收率結果可以看出桉油精平均回收率為97.6%～98.3%,RSD為0.5% ～0.7%;肉桂醛平均回收率為97.8%～98.7%,RSD為0.4% ～1.0%;百里香酚平均回收率為97.4% ～98.8%,RSD為0.4% ～0.6%;香芹酚平均回收率為97.4%～98.8%,RSD為0.5%～0.8%。說明本方法對香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚的含量測定回收率高,精密度好。

表2 回收率和精密度實驗結果表 (n=5)

2.5 耐用性試驗 從色譜柱、柱溫、進樣口和檢測器溫度考察方法的耐用性。分別改變初始柱溫為60℃、70℃、80℃,進樣口和檢測器溫度為230℃、250℃、270℃,色譜峰出峰順序無變化,保留時間稍有變化;使用不同型號的色譜柱,如Agilent DBWAX(30 m ×0.53 mm ×1.00 μm);Agilent DB-624(30 m ×0.53 mm ×3.00 μm)等,結果表明,桉油、肉桂醛、百里香酚及香芹酚能很好地分離且保留時間合理。本方法的耐用性較好。

2.6 樣品測定 取浙江某企業飼料添加劑(香味劑)(批號為20170513)1.0 g,置100 mL量瓶中,加無水乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。分別精密量取供試品溶液和桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚混合對照品溶液(400 μg/mL)1 μL,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖,平行測定3次,計算平均含量。結果表明,供試品溶液桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚色譜峰分別與桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚對照品混合溶液色譜峰保留時間一致;此批香味劑中桉油、肉桂醛、百里香酚及香芹酚平均含量分別為5.1%、8.2%、8.5%、8.6%,RSD 分別為 0.5%、0.4%、0.3%、0.6%。

3 結論

由以上結果可以看出,該方法操作簡便、結果準確、穩定性好,適用于香味劑中桉油精、肉桂醛、百里香酚及香芹酚的含量測定。