東北地區(qū)狐源大腸桿菌耐藥性的檢測(cè)

安富宇,楊金雨,馮 濤,劉偉石,薛 原

(1.東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物資源學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150040;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所,黑龍江 哈爾濱 150069)

由于抗菌藥物的大范圍使用,細(xì)菌的耐藥水平愈發(fā)增高和耐藥譜愈發(fā)擴(kuò)大,導(dǎo)致耐藥水平增加,甚至超級(jí)細(xì)菌的出現(xiàn),使動(dòng)物疾病的防治面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前已成為影響?zhàn)B殖業(yè)正常發(fā)展的主要因素之一。同時(shí),大腸桿菌由于廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境中,是細(xì)菌耐藥基因儲(chǔ)存庫(kù)和重要傳播中轉(zhuǎn)站,國(guó)際上將其確定為耐藥性檢測(cè)的標(biāo)定菌株[1]。已報(bào)道感染大腸桿菌病的野生哺乳動(dòng)物包括：犬、狐貍、水貂、毛絲鼠、鹿、刺猬、虎等。本試驗(yàn)以東北地區(qū)的狐源性大腸桿菌為研究對(duì)象,進(jìn)行了有關(guān)耐藥性的測(cè)定。探究大腸桿菌在東北地區(qū)狐貍養(yǎng)殖場(chǎng)的流行情況,從而為狐貍養(yǎng)殖及正確使用抗菌藥提供依據(jù)和科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株 藥敏質(zhì)控菌株大腸桿菌 ATCC 25922,購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。124株大腸桿菌是2016年6-12月從黑龍江、吉林、遼寧的狐貍養(yǎng)殖場(chǎng)分離所得臨床菌株。各個(gè)分離菌株用于后期的藥敏試驗(yàn)。

1.2 培養(yǎng)基 普通瓊脂和水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(Mueller-Hinton,MH),購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司,批號(hào)為151023。

1.3 藥敏紙片 共22種藥敏紙片,均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司和 OXIOD公司。包括 β-內(nèi)酰胺類：阿莫西林/克拉維酸鉀(AMC)、阿莫西林(AMX)、氨芐西林(AMP)、氨曲南(ATM)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢噻吩(KF)、亞胺培南(IPM);氨基糖苷類：阿米卡星(AK)、慶大霉素(CN)、卡那霉素(K)、新霉素(NEO)、安普霉素(APR);喹諾酮類：諾氟沙星(NOR)、恩諾沙星(ENR)、環(huán)丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFX);四環(huán)素類：強(qiáng)力霉素(DO)、四環(huán)素(TE);磺胺類：復(fù)方新諾明(SXT);氯霉素類：氯霉素(C)、氟苯尼考(FFC);多肽類：多黏菌素PB。

1.4 方法

1.4.1 藥敏試驗(yàn) 采用WHO提倡的Kirby-Bauer法[2]。依據(jù)CLSI有關(guān)標(biāo)準(zhǔn),只有當(dāng)質(zhì)控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內(nèi)測(cè)試菌株結(jié)果才具有科學(xué)有效性。

1.4.2 判定標(biāo)準(zhǔn) 按抗菌藥物敏感性試紙片擴(kuò)散法標(biāo)準(zhǔn)[3]判定各菌株的敏感度,對(duì)所分離的細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。以敏感(Susceptible)、中介(Intermediate)、耐藥(Resistant)3種程度來(lái)對(duì)抑菌圈大小作出判定。

2 結(jié)果

2.1 大腸桿菌的耐藥性 124株狐源大腸桿菌均可產(chǎn)生耐藥性。對(duì)氨芐西林、頭孢噻吩、卡那霉素、四環(huán)素、氯霉素、強(qiáng)力霉素和復(fù)方新諾明的耐藥率均在60%以上;對(duì)阿米卡星、多黏菌素B敏感率在80%以上,而對(duì)亞胺培南敏感率在90%以上,見表1。

2.2 大腸桿菌的多重耐藥性 124株受試狐源大腸桿菌對(duì)22種抗菌藥物均存在耐藥性。10耐菌株所占比例最大為21.6%。分離菌株存在耐藥現(xiàn)象,最多為18種,見圖1。

表1 狐源性大腸桿菌對(duì)22種抗微生物藥的體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果 /%

圖1 狐源性大腸桿菌的耐藥性

3 討論

由于抗菌藥普遍應(yīng)用,細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性變異的情況愈發(fā)增多。目前國(guó)內(nèi)大腸桿菌耐藥性的復(fù)雜與嚴(yán)重愈發(fā)突出,并大量出現(xiàn)了對(duì)多種抗生素抵抗耐藥的現(xiàn)象。狐貍等毛皮動(dòng)物多種耐藥性菌株的生成與抗生素的普遍應(yīng)用相關(guān),使用亞治療劑量的抗菌藥易導(dǎo)致耐藥性菌株的出現(xiàn)[4]。狐源性大腸桿菌出現(xiàn)多種耐藥的情況,這和狐貍養(yǎng)殖場(chǎng)的不合理使用抗菌藥物有關(guān)。

124株受試狐源大腸桿菌對(duì)22種抗菌藥物均存在耐藥性。10耐菌株所占比例最大為21.6%。分離菌株存在1～18耐藥現(xiàn)象,最多為18種。124種耐藥大腸桿菌中耐8種抗生素的比例占12%。對(duì)四環(huán)素、氨芐西林、鏈霉素、恩諾沙星 、氧氟沙星的耐藥率較高。這與孫玉國(guó)等報(bào)道相似[5]。另外Brien O T F也有報(bào)道耐藥質(zhì)粒可以將大腸桿菌的耐藥基因通過(guò)轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)和結(jié)合方式在菌間相互轉(zhuǎn)移,從而使大腸桿菌的耐藥性迅速傳播,這也是在養(yǎng)殖場(chǎng)中的畜禽出現(xiàn)耐藥性的原因之一[6]。大腸桿菌的耐藥性機(jī)制有：(1)抗生素作用位點(diǎn)的改變或新作用位點(diǎn)的發(fā)生;(2)酶對(duì)抗生素的修飾和破壞;(3)增加抗生素從大腸桿菌向細(xì)胞外的主動(dòng)排出作用;(4)細(xì)菌外膜通透性的改變;(5)質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性。一種耐藥機(jī)制可以對(duì)多種抗生素表現(xiàn)為抗性,同一種抗生素也常常出現(xiàn)多種耐藥性機(jī)制共同抑制的現(xiàn)象[7]。

2002中國(guó)已經(jīng)禁止氯霉素用于食品動(dòng)物,但試驗(yàn)中卻出現(xiàn)高達(dá)60.8%的檢測(cè)菌株對(duì)氯霉素耐藥,這一方面可能是這個(gè)耐藥表型的流行可能與攜帶cmlA基因的質(zhì)粒廣泛傳播相關(guān)[8]。另一方面可能從養(yǎng)殖場(chǎng)的不合理用藥導(dǎo)致。敏感的藥物嚴(yán)格按說(shuō)明足量足療程使用或根據(jù)藥物的配伍禁忌聯(lián)合用藥;一方面可以使抗菌藥之間的協(xié)同作用表現(xiàn)出來(lái),增加療效;另一方面可以防止細(xì)菌長(zhǎng)時(shí)間和某種藥物作用,增加產(chǎn)生耐藥性機(jī)率[9]。在臨床用藥或在飼料添加藥物時(shí),應(yīng)該盡量不要長(zhǎng)期使用同幾種藥物,從而減少細(xì)菌耐藥性的發(fā)生,保障養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。