2016年湖南地區副豬嗜血桿菌大腸桿菌的耐藥性檢測

余 仁,許雅婷,陳金軍,王曉麗,張永鑫

(1.湖南農業大學生物科學技術學院,湖南 長沙 410128;2.湖北省武漢市亞博特實驗室,湖北 武漢 430065)

副豬嗜血桿菌(HPS)是嚴重危害養豬業健康發展病原菌之一,其主要引起以纖維素性多發性漿膜炎、關節炎和腦膜炎為特征的疾病。近年來該病在集約化豬場內發病率呈明顯上升趨勢,主要引起從哺乳到保育不同階段仔豬死亡、生長發育不良、飼料利用率降低等問題。豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的豬的一種急性傳染病,其臨床癥狀主要表現為腸炎、腸毒血癥等。本文對副豬嗜血桿菌病和豬致病性大腸桿菌病在湖南地區豬場的發生情況及耐藥程度進行了檢測和篩查,以期對綜合防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株的采集與鑒定 病料包括患病豬(或病死豬)的肺臟、氣管、關節、腸道等組織器官,來源于湖南新湘農牧業、湖南大康牧業等公司的豬場。共分離鑒定出58株副豬嗜血桿菌、52株大腸桿菌。分別在無菌條件下取病變組織或炎性液體涂布于血平板和S.S.平板,37℃培養18 h、24 h,挑取單菌落分別接種至PPLO肉湯(含NAD)和TSB肉湯進行純培養至對數期,通過PCR擴增并結合生化鑒定試劑盒進行鑒定。

1.2 培養基及試劑 血平板和S.S.平板,購自廣東環凱微生物科技有限公司。PPLO瓊脂、胰蛋白大豆瓊脂(TSA)、胰蛋白大豆肉湯(TSB)均為OXOID公司產品。新鮮牛血清為杭州四季青材料有限公司產品,使用前經56℃滅活30 min。輔酶I(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸,NAD)為Omega公司產品。微量生化鑒定試劑為杭州天和微生物試劑有限公司產品。PCR分子生物學實驗試劑為寶生物工程(大連)有限公司產品。

1.3 藥敏紙片藥敏試驗受試藥物包括：阿米卡星(Amikacin,AN)、氨芐西林(Ampinillin,AM)、頭孢噻肟(Ceftiofur,EFT)、頭孢拉定(Cefradine,CEF)、阿莫西林(Amocillin,AMX)、諾氟沙星(Enrofloxacin,ENR)、紅霉素(Erythromycin,E)、氟苯尼考(Florfenicol,FFC)、慶大霉素(Gentamicin,GM)、阿奇霉素(Azithromycin,AZI)、林可霉素(Lincomycin,L)、四環素(Tetracycline,TET)、泰利霉素(Tiamulin,TIA)、替米考星(Tilmicosin,TIL)、強力霉素(Doxycycline,DO)、環丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)。所用紙片,均購自廣東環凱微生物科技有限公司。

1.4 藥敏試驗 藥敏試驗以美國臨床和實驗室標準化研究所《抗菌藥物敏感性試驗執行標準》2010版(CLSI-M100-S20)為指導原則和執行標準進行,采用紙片擴散法,測定58株副豬嗜血桿菌和52株大腸桿菌對16種抗菌藥的敏感性。

1.5 判定標準 參照CLSI-M100-S20文件執行標準,根據抑菌圈直徑大小將細菌對藥物的敏感性分為敏感、中介、耐藥3種形式。

2 結果與討論

兩類細菌對不同藥物的耐藥情況以及總體情況見表1。

由表1可見58株副豬嗜血桿菌菌株對氟苯尼考(94.8%)、四環素(93.1%)、阿奇霉素(91.4%)敏感率高;敏感率較高的有阿米卡星(89.6%)、頭孢拉定(89.6%)、紅霉素(89.6%)、氨芐青霉素(87.9%)、強力霉素(87.9%)、慶大霉素(84.5%)和替米考星(84.5%);阿莫西林和林肯霉素的耐藥率分別高達25.9%和29.3%。

大腸桿菌菌株對氨芐青霉素(88.5%)耐藥率較高,對泰利霉素(73.1.3%)、阿奇霉素(71.1%)、強力霉素(71.1%)、紅霉素(69.5%)、林肯霉素(69.2%)、替米考星(67.3%)、頭孢拉定(63.5%)、四環素(63.5%)也有一定的耐藥性。對阿莫西林和環丙沙星的耐藥率分別為5.8%和21.2%。

表1 110株臨床致病菌對不同抗菌藥的敏感度

對兩類致病菌多重耐藥性進行分析顯示,副豬嗜血桿菌在耐藥數為0～16的區間上沒有明顯規律性,呈近似彌散性分布。大多數菌株能耐受1～2種藥物,少數對多重藥物仍具有一定的耐藥性(見圖1)。

綜上所述,我國湖南地區從2016年1～12月分離的58株HPS和52株E.coli的耐藥性,反映當前湖南地區這2種致病菌的耐藥特點,進一步為豬場生產臨床用藥提供較為詳實準確的參考,具有一定的臨床應用意義。

圖1 兩類臨床致病菌的多重耐藥性