寧夏地區奶牛副結核病血清學調查

程 成,王文佳,張 凱,馬小靜,李夢瑩,許立華

(寧夏大學農學院,寧夏 銀川 750021)

牛副結核病是由副結核分枝桿菌引起的一種慢性消耗性疾病,是多種動物共患的二類動物疫病。牛副結核病的主要臨床癥狀表現為漸進性消瘦和卡他性腸炎,主要病理變化包括慢性肉芽腫性回腸炎、腸黏膜高度增厚并形成皺褶等。MAP對環境有很強的抵抗力,在污染的牧場和廄肥中可存活數月至一年。病原主要經消化道感染。新生牛在2歲之前一般為隱性感染,并不表現出臨床癥狀,后期通常表現的癥狀為體重急劇下降以及嚴重腹瀉。

1895年美國人Johne等首先發現副結核病,我國于1953年首次報道該病的存在。我國大部分地區都存在該病的流行,且呈現出不斷上升的趨勢,給我國的養牛業造成了巨大的經濟損失[1]。2014-2015年,孫雨等[2]對河北、山西和青海等7個省市的牛血清樣品進行了牛副結核抗體檢測,結果顯示,7個省市樣品牛副結核抗體總陽性率為2.29%。結果表明,我國山西(3.75%)、西藏(3.5%)等省市的牛副結核分枝桿菌感染率較高。2015年,崔金磊等[3]對自內蒙古自治區、黑龍江省和湖北省等6個省(區)規?；翀龅哪膛Ｑ鍢悠愤M行了副結核分枝桿菌抗體檢測。結果顯示,6個省(區)樣品牛副結核抗體總陽性率為2.59%。結果表明,我國安徽省(8.00%)、四川省(5.23%)等地規?；翀瞿膛５母苯Y核分枝桿菌感染率較高。由此可知,我國多個省市存在副結核分枝桿菌的感染,感染率因地而異。由于副結核病潛伏期長、傳播迅速、分離培養困難,因此加強對該病的實驗室診斷研究與流行病學調查對防控該病具有十分重要的意義。ELISA技術是一種開展牛副結核病實驗室診斷的有效手段[4]。由于我國大部分省市的牛均未進行副結核疫苗免疫,因此血清抗體陽性表明其已經感染[5-7]。寧夏作為國內奶牛主要養殖區,已經成為我國主要奶牛業和乳品工業基地,并且也成為高效發展畜牧業的典范。本試驗使用美國 IDEXX公司生產的牛副結核病抗體ELISA試劑盒對寧夏地區的牛進行了副結核分枝桿菌抗體檢測,以期了解和掌握寧夏地區奶牛副結核病流行情況,為本病的防控提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試劑盒 副結核分枝桿菌抗體檢測試劑盒,購自美國IDEXX公司。

1.2 樣品 采集寧夏地區9個牧場中有疑似副結核癥狀的奶牛的血清樣品189份(均為2歲齡以上,臨床癥狀表現為體重急劇下降,持續性下痢,糞便惡臭),低速離心后收獲血清,編號后置于-20℃備用。

1.3 設備 酶標儀MULTISKAN MK3(賽默飛世爾儀器有限公司),離心機(德國Sigma公司);微量移液器(德國Eppendorf有限公司);渦旋儀(上海喬躍電子有限公司);微量反應板振蕩器(江蘇南通縣電子分析儀器廠);其余均為常規實驗室器材。

1.4 方法

1.4.1 試劑保存及使用 副結核分枝桿菌抗體檢測試劑盒應在2℃ ～8℃條件下保存,使用前所有試劑均需恢復至室溫。

1.4.2 副結核分支桿菌抗體檢測 具體操作步驟參考試劑盒說明書(ELISA方法)。

1.4.3 結果判定 陽性對照平均值(PC)≥0.350,且陽性對照平均值(PC)與陰性對照比值(NCA450)的比值≥3.00的條件下,檢測結果有效,否則試驗不成立,需按操作說明書進行重復實驗。

按照以下公式計算并進行結果判定：樣品S/P%≤45%,判為MAP抗體陰性;當45% ＜S/P% ＜55%,判為可疑;S/P%≥55%,判為MAP抗體陽性。

2 結果

在采自寧夏地區9個奶牛場的189份血清樣品中,檢出副結核病抗體陽性血樣106份,平均血清陽性率為56.08%,9個牛場均檢出血清陽性牛,個體陽性率從20.00% ～86.67%不等,場感染陽性率為100.00%,檢測結果見表1。

表1 寧夏不同地區奶牛MAP抗體檢測結果

3 討論

本試驗對采集自寧夏銀川市、吳忠市、中衛市等不同地區9個規?；膛龅?89份血清進行了副結核分枝桿菌抗體檢測,具有一定代表性。檢測結果顯示,被檢的9個奶牛場均存在副結核陽性牛,共檢出副結核病陽性牛106頭。在檢測的牧場中,牛副結核病血清陽性率最高可達86.67%,最低為20%,平均陽性率為56.08% 。歐美和澳大利亞畜群中副結核病的感染率可達10% ～55%[8]。黑龍江哈爾濱某轄區2015年奶牛副結核病血清學調查顯示,該地區奶牛群的陽性率最高可達19.1%[9]。該血清學調查結果與上述文獻報道的結果相比,大部分奶牛場陽性率相對較高,只有個別奶牛場陽性率較低。由此可見牛副結核的地方性流行狀況并不容樂觀。

本試驗所用試劑盒為美國 IDEXX公司生產的牛副結核病抗體ELISA試劑盒。該試劑盒中微量反應板孔底包被的抗原是副結核分枝桿菌原液提取物。樣品先和草分枝桿菌提取物預孵育,中和除去其他非典型分枝桿菌的交叉污染,避免因其他疾病的混合感染對檢測結果造成影響。ELISA方法具有操作簡單、敏感、快速、主觀因素影響小等優點已成為國內外動物疫病常規的檢疫方法,是當前牛副結核檢測最常用的方法之一。

副結核分枝桿菌感染過程極為隱蔽,一年四季均可發生,通常呈潛伏感染,隱性感染率高,僅有小部分出現臨床癥狀。隱性感染奶?？砷L期向體外排菌,污染環境,動物飲用宿主動物污染的水源即可感染該病,因此,病畜是該病重要的傳染源之一。

牛場副結核病防疫的重點在于對引進奶牛嚴格履行檢疫程序,不從疫區引進奶牛.定期用ELISA方法對奶牛進行血清學調查及檢測,連續檢測2次均為陽性并有臨床癥狀的牛必須淘汰處理。牛場有關人員應當重視副結核病,加強對該病的認知程度和防治力度。對表現為持續性腹瀉癥狀的病牛應及時淘汰,以免造成了污染面擴大和同群牛的不斷感染。牛群要定期進行監測,一般疫區每年適宜對牛群進行3～4次檢疫,且檢出的陽性牛與健康牛完全分離[10]。除水平傳播外,副結核分枝桿菌還可以通過垂直傳播機制經過胎盤感染胎兒[11]。牛場應建立陰性后備牛群,將4月齡以下犢牛與成母牛隔離飼養。

目前,對牛副結核病尚無有效的治療方法,疫苗接種在許多國家仍然禁止或被嚴格限制使用?，F階段加強牛副結核病的檢疫、隔離和淘汰凈化應是控制該病的主要方法。因此,應對該病給予足夠的重視,及時采取防控措施,預防和控制該病的發生和流行,保障寧夏地區奶牛養殖業的健康發展。