20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑的高效液相色譜分析

劉衛(wèi)榮，康 鳳

（江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司，江蘇揚(yáng)州 225009）

吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是巴斯夫公司研發(fā)的甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，通過(guò)抑制病原真菌的線(xiàn)粒體呼吸，防治多種作物真菌性病害[1]。丙硫菌唑（prothioconazole）是拜耳公司研發(fā)的新型廣譜三唑硫酮類(lèi)殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，對(duì)作物具有防病治病的作用，安全性好[2]。研究證明，將吡唑醚菌酯和丙硫菌唑復(fù)配，可延長(zhǎng)其持效期，且擴(kuò)大殺菌譜，有效防治農(nóng)作物的白粉病、霜霉病、銹病、葉斑病等多種病害，應(yīng)用前景廣闊。關(guān)于吡唑醚菌酯和丙硫菌唑的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法和液相色譜法[3-6]，但尚未見(jiàn)兩者復(fù)配制劑檢測(cè)方法的公開(kāi)報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法，在同一色譜條件下對(duì)20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑有效成分進(jìn)行定量分析。該方法操作簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度和精密度良好，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)分析。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：日本島津LC-20A型，配備可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；LabSolutions工作站；色譜柱：Eclipse XDB-C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；微孔過(guò)濾膜（0.45 μm）；超聲振蕩器。

乙腈（HPLC級(jí)）；冰乙酸（AR級(jí)）；新蒸2次蒸餾水；吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98.0%）、丙硫菌唑標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98.0%）、20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑（10%吡唑醚菌酯＋10%丙硫菌唑），江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司研制。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈＋水＋冰乙酸（體積比750∶250∶1）；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；進(jìn)樣體積：2 μL；保留時(shí)間：丙硫菌唑約5.7 min，吡唑醚菌酯約7.2 min。標(biāo)樣和試樣典型的液相色譜圖見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑液相色譜圖

1.3 溶液制備

1.3.1 標(biāo)樣溶液的制備

分別稱(chēng)取吡唑醚菌酯標(biāo)樣0.05 g、丙硫菌唑標(biāo)樣0.05 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容，于超聲振蕩器中超聲10 min左右使樣品溶解，冷卻至室溫后搖勻，得標(biāo)樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱(chēng)取試樣約0.5 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容，于超聲振蕩器中超聲10min左右使樣品溶解，冷卻至室溫后搖勻，過(guò)濾，得試樣溶液。

1.4 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線(xiàn)平穩(wěn)后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）的峰面積響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吡唑醚菌酯、丙硫菌唑峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）峰面積的平均值；A2為試樣溶液中吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）峰面積的平均值；m1為吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）標(biāo)樣質(zhì)量，g；m2為試樣質(zhì)量，g；w為標(biāo)樣中的吡唑醚菌酯（或丙硫菌唑）質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

配制一定濃度的吡唑醚菌酯和丙硫菌唑標(biāo)樣溶液，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)范圍為200～400 nm時(shí)進(jìn)行掃描，得到兩者紫外吸收光譜圖，見(jiàn)圖3。從圖3可以看出，吡唑醚菌酯在275 nm波長(zhǎng)處有良好吸收，丙硫菌唑在260 nm波長(zhǎng)處有良好吸收。結(jié)合兩者峰面積、質(zhì)量濃度和流動(dòng)相吸收等，最終選定260 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖3 吡唑醚菌酯和丙硫菌唑紫外吸收?qǐng)D譜

2.2 流動(dòng)相的選擇

將流動(dòng)相按不同比例甲醇＋水和乙腈＋水進(jìn)行比較試驗(yàn)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以乙腈＋水＋冰乙酸（體積比750∶250∶1）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min時(shí)，各組分能分離完全，無(wú)其他組分干擾，吡唑醚菌酯和丙硫菌唑峰形良好，且保留時(shí)間合適，因而選用乙腈＋水＋冰乙酸（體積比750∶250∶1）為流動(dòng)相。

2.3 方法的線(xiàn)性相關(guān)性試驗(yàn)

配制一系列不同質(zhì)量濃度的吡唑醚菌酯和丙硫菌唑混合標(biāo)樣溶液，在上述液相色譜條件下，測(cè)定相應(yīng)的峰面積值，以吡唑醚菌酯、丙硫菌唑的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)圖4、圖5。吡唑醚菌酯線(xiàn)性方程為y=4.5652x-4.5902，相關(guān)系數(shù)R2=1.000 0；丙硫菌唑線(xiàn)性方程為y=4.030 2x-14.861 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。結(jié)果表明，該方法的線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖4 吡唑醚菌酯線(xiàn)性關(guān)系圖

圖5 丙硫菌唑線(xiàn)性關(guān)系圖

2.4 方法精密度試驗(yàn)

選取有代表性的20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑樣品，稱(chēng)取5份平行試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行測(cè)定。方法精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。吡唑醚菌酯和丙硫菌唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.047和0.054，變異系數(shù)分別為0.45%和0.52%，結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法精密度良好。

表1 方法精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)

采用標(biāo)樣添加法，在已知含量的20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑中添加一定量的吡唑醚菌酯、丙硫菌唑標(biāo)樣，分別測(cè)定吡唑醚菌酯和丙硫菌唑的總質(zhì)量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，吡唑醚菌酯的回收率為98.94%～100.93%，平均回收率為99.72%；丙硫菌唑的回收率為98.73%～101.12%，平均回收率為99.85%。由此可知該方法準(zhǔn)確度較高，滿(mǎn)足定量分析要求。

表2 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

建立了20%吡唑醚菌酯·丙硫菌唑懸浮劑的反相高效液相色譜分析方法，方法線(xiàn)性關(guān)系良好，精密度和準(zhǔn)確度均能滿(mǎn)足分析的要求，且檢測(cè)時(shí)間短，適用吡唑醚菌酯和丙硫菌唑復(fù)配制劑的分析檢測(cè)。