雞新城疫、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒（Ⅰ群，4型）三聯滅活疫苗（La Sota株+TJ株+HY株）抗體效價與雞攻毒保護相關性試驗

柴 華，宋 揚，李 贄，藏玉婷，劉鑫瑩，李應鶴，武 嘯

（哈藥集團生物疫苗有限公司研發中心，哈爾濱 150069）

1 試驗材料

1.1 疫苗

雞新城疫、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒（Ⅰ群，4型）三聯滅活疫苗（La Sota株+TJ株+HY株）：批號：201501，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備。

1.2 檢驗用強毒

雞新城疫病毒北京強毒株（CVCC AV1611株），批號NDV-AV1611-QD（E1，病毒含量：107.63ELD50/0.1 mL）；H9亞型禽流感病毒TJ株，批號：AIV（H9）-TJ-QD-01（E1，病毒含量：108.63EID50/0.1 mL）；Ⅰ群4型禽腺病毒HY株，批號：FAV-HY-QD-01（F2，病毒含量：107.26TCID50/0.1 mL），均由哈藥集團生物疫苗有限公司制備、鑒定、保管和供應。

1.3 血凝抑制試驗抗原

雞新城疫病毒血凝抑制試驗抗原：抗原批號：NDV-La Sota-K-06，HA效價1∶1024，規格：2.0 mL·瓶-1，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備。

H9亞型禽流感病毒血凝抑制試驗抗原，抗原批號：AIV（H9）-TJ-K-01，HA效價1∶512，規格：2.0 mL·瓶-1，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備。

Ⅰ群4型禽腺病毒瓊脂擴散試驗抗原，抗原批號：FAV-HY-K-01，瓊擴效價1∶2，規格：2.0 mL·瓶-1，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備。

1.4 SPF雞

SPF雞由哈藥集團生物疫苗有限公司五常SPF雞場提供。

1.5 注射器

注射器購自上海達美醫用塑料廠。

2 試驗方法

2.1 新城疫病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗

將30日齡SPF雞60只，隨機分成6組，每組10只，1～5組分別頸部皮下免疫三聯滅活疫苗10、20、50、150μL·只-1和0.5 mL·只-1，6組不免疫作為攻毒對照。各組免疫后21 d，分別采血，分離血清，測定新城疫病毒HI效價。根據效價重新分組，連同對照組各肌肉注射新城疫強毒AV1611株病毒液，0.1 mL·只-（1含105.0ELD50），觀察14 d，記錄試驗雞的死亡情況，計算攻毒保護率。

2.2 禽流感病毒（H9亞型）抗體效價與攻毒保護關系試驗

將21日齡SPF雞60只，隨機分成6組，每組10只，1～5組分別頸部皮下免疫三聯滅活疫苗0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mL·只-1；6組不免疫作為攻毒對照。各組免疫后21日，分別采血，分離血清，測定禽流感病毒（H9亞型）HI效價。根據效價重新分組，連同對照組各靜脈注射H9亞型禽流感病毒TJ株0.1 mL（含107.0EID50），攻毒后第5日，采集每只雞的泄殖腔拭子進行病毒分離。將每只雞的樣品經尿囊腔內接種10日齡SPF雞胚5枚。孵育觀察5日，無論死胚、活胚均應測定雞胚液血凝價，計算攻毒保護率。

2.3 Ⅰ群4型禽腺病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗

將21日齡SPF雞40只，隨機分成4組，每組10只，1～3組分別頸部皮下免疫三聯滅活疫苗0.2、0.5和1.0 mL·只-1；4組不免疫作為攻毒對照。各組免疫后21日，分別采血，分離血清，測定Ⅰ群4型禽腺病毒瓊擴抗體效價。根據效價重新分組，連同對照組各肌肉注射Ⅰ群4型禽腺病毒HY株病毒液，每只0.1 mL（含106.0TCID50）。連續觀察10日，記錄結果，計算攻毒保護率。

3 試驗結果

3.1 新城疫病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗

新城疫病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗結果見表1。

由表1可知，新城疫病毒HI抗體效價與攻毒保護率呈正相關：HI≤2log2，攻毒保護率為0；HI=3log2，攻毒保護率為57.1%；HI≥4log2，攻毒保護率為100%。

3.2 禽流感病毒（H9亞型）抗體效價與攻毒保護關系試驗

禽流感病毒（H9亞型）抗體效價與攻毒保護關系試驗結果見表2。

由表2可知，禽流感病毒（H9亞型）HI抗體效價與攻毒保護率呈正相關：HI≤3log2，攻毒保護率為0；HI=4log2，攻毒保護率為83.3%；HI=5log2，攻毒保護率為88.9%；HI≥6log2，攻毒保護率為100%。

3.3 Ⅰ群4型禽腺病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗

Ⅰ群4型禽腺病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗結果見表3。

由表3可知，Ⅰ群4型禽腺病毒抗體效價與攻毒保護率呈正相關：當抗體瓊擴效價為1∶1時，攻毒保護率為90%；當抗體瓊擴效價為1∶2時，攻毒保護率為100%；當抗體瓊擴效價為1∶4時，攻毒保護率為100%。

表1 新城疫病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗結果

表2 禽流感病毒（H9亞型）抗體效價與攻毒保護關系試驗結果

表3 I群4型禽腺病毒抗體效價與攻毒保護關系試驗結果

4 結論

雞新城疫、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒（Ⅰ群，4型）三聯滅活疫苗（La Sota株+TJ株+HY株）各組抗體效價與攻毒保護均呈正相關，疫苗各組抗體效價可代替動物效檢試驗。根據本試驗結果及我國獸藥標準，將三聯滅活疫苗血清標準確定為：30日齡雞皮下注射疫苗20μL（1/25羽份），21日后測定新城疫病毒HI抗體效價的幾何平均值應≥1∶16；21日齡雞皮下注射疫苗0.5 mL，21日后測定禽流感（H9亞型）病毒HI抗體效價的幾何平均值應≥1∶128；Ⅰ群4型禽腺病毒抗體效價≥1∶1[1-4]。