頂空氣相色譜法測定魚肝油酸鈉注射液中有機溶劑殘留量

戴黎黎， 李苗

(武漢藥品醫療器械檢驗所，武漢 430075)

魚肝油酸鈉注射液(sodium morrhuate injection)為魚肝油中各種脂肪酸鈉鹽的滅菌水溶液[1]。本品經局部注射后，刺激血管內膜促進其增生，逐漸閉塞血管使之硬化，作為血管硬化劑用于血管瘤、靜脈曲張、內痔、顳合關節病(脫位或半脫位者)，也用于婦科、外科等創面滲血和出血[1]。魚肝油酸鈉以鱈魚肝油為原料，經過皂化、酸化、提取，最后成鹽制得魚肝油酸鈉。在生產過程中引入了乙醇、乙醚等有機溶劑，但魚肝油酸鈉注射液的質量標準中未控制有機溶劑殘留量[2]。為控制藥品的質量與療效，建立一個良好的注射液殘留溶劑檢查方法非常有必要，筆者參照文獻[3-8]，采用頂空氣相色譜法測定魚肝油酸鈉注射液中乙醇及乙醚殘留量，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890氣相色譜儀(美國AGILENT公司)，G1888頂空進樣器(美國AGILENT公司)，FID檢測器，Agilent DB-624毛細管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.18 μm)；XP105電子天平(瑞士梅特勒-托利多一期公司，感量：0.01 mg)。

1.2試藥 乙醇(Fisher-Chemical)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(Fisher-Chemical)為色譜純，乙醚(國藥集團)為分析純。魚肝油酸鈉注射液(規格為2 mL：0.1 g，批號：1510601，1510602，1610601，1610602)均由市場上抽樣得到。

2 方法與結果

2.1色譜條件 Agilent DB-624毛細管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.18 μm)；進樣口溫度：200 ℃；檢測器(FID)溫度：250 ℃；載氣：氮氣，流速：2.0 mL·min-1；頂空氣化室平衡溫度：80 ℃，平衡時間：20 min；進樣體積：1 mL；柱溫：40 ℃保持8 min，然后以7 ℃·min-1升溫至70 ℃，保持4 min，最后以50 ℃·min-1升溫至230 ℃，保持5 min。

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液 精密稱取乙醇、乙醚各100 mg，分別置于25 mL量瓶中，用50%DMF溶液稀釋至刻度，搖勻。再各精密量取5 mL，置于同一100 mL量瓶中，加50% DMF溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，密封，即得對照品溶液。

2.2.2供試品溶液 精密量取魚肝油酸鈉注射液樣品2 mL，置于50 mL量瓶中，加50%DMF溶液釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，密封。即得供試品溶液。

2.3系統適用性實驗 按“2.2.1”項下配制對照品溶液，進樣，記錄色譜圖。結果顯示乙醇與乙醚兩色譜峰的分離為2.0，理論板數以乙醚計為37 175，且DMF峰與兩待測成分峰完全分離。

2.4空白溶劑考察 精密量取50%DMF溶液5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，密封，進樣。溶劑中未檢出乙醇與乙醚峰，證明溶劑對實驗結果無干擾。色譜圖見圖1。

2.5線性關系考察 取對照品儲備液，以50%DMF溶液為溶劑，分別配制成含乙醇1004，401.6，200.8，100.4，20.08 μg·mL-1和含乙醚999.2，399.68，199.84，99.92，19.98，4.996，2.498，0.999 μg·mL-1的系列溶液。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，密封。依次進樣測定，記錄色譜圖。以峰面積(A)為縱坐標，濃度(C，μg·mL-1)為橫坐標，進行線性回歸，分別得乙醇線性方程：A=0.289 7C-0.757 4(r=0.999 8)，線性范圍為：20.08～1004 μg·mL-1；乙醚線性方程：A=6.039 1C-15.277 9(r=0.999 7)，線性范圍為：0.999～999.2 μg·mL-1。

2.6加樣回收率實驗 精密量取樣品4 mL置100 mL量瓶中，分別精密量取對照品儲備液2.5，5，7.5 mL各3份置于上述量瓶中，用50%DMF溶液定容至刻度，搖勻，作為回收率實驗測試液。分別精密量取回收率實驗測試液和“2.2.1”項對照品溶液各5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，密封。依次進樣測定，記錄色譜圖。按峰面積以外標法計算回收率。結果見表1，2。

2.7檢測限 取“2.2.1”項下對照品儲備液，適當稀釋，進樣測定。當信噪比(S/N)為3時，測得乙醇和乙醚的檢測限分別為71 ng·mL-1與3 ng·mL-1。

A.溶劑空白；B.對照品；C.樣品；1.乙醇；2.乙醚；3.N，N-二甲基甲酰胺

圖1 殘留溶劑的GC圖譜

A.blank solution；B.reference substance；C.sample；1.ehtanol；2.ethyl ether；3.DMF

Fig.1GCchromatogramsofresidualsolvent

表1 乙醇回收實驗結果

Tab.1Resultsofrecoverytestofethanoln=9

加入量實測量μg回收率平均回收率RSD%502.0505.5100.7502.0501.599.9502.0499.099.41004.01021101.71004.0998.099.4100.00.71004.01004.0100.01506.01501.099.71506.01506.0100.01506.01500.099.6

表2 乙醚回收實驗結果

Tab.2Resultsofrecoverytestofethylethern=9

2.8進樣精密度實驗 取“2.2.1”項下的對照品儲備液各5 mL，依次置5個20 mL頂空進樣瓶中，密封。分別進樣測定，記錄色譜圖。乙醇和乙醚峰面積的RSD(n=5)分別為0.8%和1.8%。

2.9重復性實驗 分別精密量取本品(批號：1510601)1.0，2.0，3.0 mL各3份，置50 mL量瓶中，用50%DMF溶液定容，搖勻，作為測試液。取9份測試液和“2.2.1”項下對照品溶液各5 mL，分別置20 mL頂空進樣瓶中，密封，分別測定，記錄色譜圖。按峰面積以外標法計算殘留量。9份樣品中均未檢出乙醇，均檢出乙醚，平均含量(n=9) 為0.022%，RSD為1.3%，表明本法重復性好。

2.10樣品測定 按照“2.2.1”“2.2.2”項方法制備對照品和供試品溶液，進樣并計算樣品中殘留溶劑的含量。結果見表3。

表3 4批樣品測定結果

Tab.3Resultsoffourbatchesofsamples%

批號乙醇乙醚1510601未檢出0.0231510602未檢出0.0251610601未檢出0.0201610602未檢出0.033

3 討論

3.1色譜條件的選擇 本實驗考察不同涂布液種類的毛細管氣相色譜柱，由于乙醇極性較大，乙醚極性較小，二者極性相差較大，故選擇使用中等極性的DB-624毛細管柱，并參考《中華人民共和國藥典》2015年版二部中馬來酸依那普利等其他品種項下乙醇等有機溶劑的測定方法，采用程序升溫的方式，并經反復實驗確定升溫程序，可使乙醇和乙醚的分離度達到1.5。因魚肝油酸鈉注射液濃度較大，且主成分為長鏈脂肪酸鹽的混合物，如采用直接進樣法，脂肪酸附著在氣相色譜柱上較難氣化完全，可能污染色譜柱而改變色譜柱性能，故本方法采用頂空進樣的方式，僅使樣品中存在的有機溶劑氣化進入色譜柱，避免主成分進入色譜系統，既可以檢測樣品中殘留的有機溶劑，又避免色譜系統受到污染。

3.2樣品制備方法的選擇 本品為水溶液，但乙醚在水中溶解性較差，不符合《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則[9]項下有機溶劑對照品應在溶劑中完全溶解的要求。因乙醇與乙醚在DMF中具有良好的溶解性，故本實驗采用50%DMF溶液為溶劑，可以保證對照品溶液的濃度準確，且該溶劑對待測的兩種成分并無干擾，該方法專屬性、準確性和重復性良好。