補鋅對酞酸酯致睪丸萎縮的影響作用研究

李玲姣 程曉娟 胡雄鵬 蘇春 童輝 龍昱

【摘要】[目的]探討補鋅對鄰苯二甲酸二（2-乙基）已酯（DEHP）致雄性大鼠睪丸萎縮的影響作用研究。[方法]選擇2周齡KM雄性小鼠25只隨機分組為5組：對照組（玉米油）、DEHP染毒組、低劑量鋅組、中劑量鋅組、高劑量鋅組。DEHP和鋅灌胃染毒，連續隔天灌胃30天，處死小鼠并迅速剝離睪丸組織，計算臟器系數，測定MDA.[結果]與玉米油對照組相比，DEHP雄鼠睪丸系數下降有統計學差異（P<0.05）;與DEHP組相比，玉米油、低劑量鋅、高劑量鋅組MDA下降有統計學差異（P<0.05）;與玉米油組相比，DEHP、中劑量鋅和高劑量鋅組MDA升高有統計學差異（P<0.05）。鋅對睪丸組織脂質過氧化損傷有一定的保護作用。[結論]補鋅對DEHP致睪丸萎縮有一定的保護作用。

【關鍵詞】鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯鋅生殖毒性

鄰苯二甲酸二乙基己酯[di-（2-ethylhexyl）phtha]ate，DEHP]屬于鄰苯二甲酸酯類（PAEs）化合物，是使用最廣和產量最大的塑化劑，以增加塑料的可塑性和韌性，提高塑料強度。廣泛用于油漆、橡膠管、血袋、化妝品、包裝食物的材料及小孩玩具等。DEHP與塑料之間是氫鍵或范德華力結合，易于擴散至周圍環境中，造成空氣、水源和食物等污染。DEHP可通過飲食、呼吸、皮膚接觸等途徑進入人體，長期接觸可引起血液系統、生殖系統及腎臟、肺臟等器官損害。DEHP對雄性生殖系統的損害最為顯著，其主要靶器官是睪丸，可影響性腺和生殖器官的發育，損害生殖功能。DEttP是一種典型的環境內分泌干擾物（environmental endocrine disruptors，EEDs），具有擬雌激素或抗雄激素作用。DEHP可引起男/雄性動物生殖內分泌激素紊亂、睪丸萎縮、生精障礙等，然而，對于補鋅對DEHP致睪丸萎縮的影響作用研究較少，且結論尚不一致。因此，本研究采用DEHP染毒青春期雄性小鼠，觀察小鼠睪丸組織MDA水平變化以及臟器系數，探討補鋅對DEHP致雄性小鼠睪丸萎縮的影響。

一、材料與方法

（1）主要試劑與儀器。DEHP（分析純，無錫市亞泰聯合化工有限公司，中國）純度99.5%，溶劑為玉米油;硫酸鋅（國藥試劑集團），丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，中國），電子天平、可見分光光度計、高速離心機、恒溫水浴鍋、灌胃器、EP管等。

（2）實驗動物。25只2周齡昆明小鼠，性別雄，體重25.5～35.5g。

（3）分組與處理。隨機分為5組，每組5只，依次為A組（玉米油對照組，10ml/kg）、B組（DEHP高劑量組，1000mg/kg）、c組[補低鋅組（1000mg/kgDEHP+15mg/kg鋅）]、D組[補中鋅組（1000mg/kgDEHP+30mg/kg鋅）]、E組[補高鋅組（1000mg/kgDEHP+60mg/kg鋅）]。連續隔天染毒30d。于末次染毒次日，頸部脫臼處死小鼠。

（4）指標與方法。分離睪丸，除去其表面血漬并稱重，計算臟器系數。臟器系數（%）=[器官濕重（g）/體重（g）]×100%。丙二醛含量通過硫代巴比妥酸法（TRA）測定;10%睪丸組織勻漿與試劑95℃水浴40min，3500r/min離心10min，取上清液532nm處測吸光度（A）值。

（5）統計分析。數據用x±s表示，采用SPSS20.0軟件進行統計分析，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差法，以P<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

（1）臟器系數的變化。

（2）MDA的變化。

與DEHP組比較*p<0.05：與玉米油相比#P<0.05，與DEHP組相比，低劑量、中劑量和高劑量鋅組體重下降均有統計學差異（P<0.05），與玉米油組相比，高劑量鋅組體重下降有統計學差異（P<0.05）;與DEHP組相比，玉米油睪丸臟器系數升高有統計學差異（P<0.05），與玉米油相比，DEHP和低中高劑量鋅組下降均有統計學差異（P<0.05）。與DEHP組相比，玉米油、低劑量鋅、高劑量鋅組MI）A下降有統計學差異（P<0.05）;與玉米油組相比，DEHP、中劑量鋅和高劑量鋅組MDA升高有統計學差異（P<0.05）。

三、討論

正常狀態下臟器系數比值恒定，動物在某些因素暴露后因臟器受損可能發生變化，臟器系數增大見于臟器充血、水腫或增生肥大等，減小則是由于臟器萎縮和其他退行性改變。本研究結果表明，DEHP組睪丸系數較溶劑對照組有所降低，提示睪丸是DEHP作用的靶器官。活性氧（reactive oxygen species，ROS）在許多生理過程中發揮著重要作用，常作為第二信使調節細胞的氧化還原反應，ROS還可作用于多不飽和脂肪酸，引起脂質過氧化作用，產生過氧化自由基（如M1）A），MDA的高低可以反映機體的脂質過氧化程度和機體受自由基攻擊的程度。本次研究表示：DEHP組的MDA較溶劑對照組有所升高，補低劑量鋅和高劑量鋅的MDA較DEHP組有所下降。鋅是機體必需微量元素之一，與生殖系統發育和功能密切相關，本實驗設計DEHP+硫酸鋅組，對預防DEHP導致的睪丸毒性損傷作初步研究。實驗研究發現：補低劑量鋅能在一定程度上改善DEHP致睪丸萎縮的影響。

以上結果提示適量鋅對DEHP所導致的睪丸生殖毒性作用有拮抗和逆轉效應，相關機制有待進一步研究。