微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)在臨床血型鑒定與輸血中的應(yīng)用價(jià)值

黃婉怡

[摘要]目的 探討臨床血型鑒定與輸血中采取微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)的臨床價(jià)值。方法選取320例在我院進(jìn)行輸血的患者，時(shí)間為2016年5月～2018年5月，供血標(biāo)本320例，所有標(biāo)本的血型鑒定采取鹽水試管法及微柱凝膠法，通過(guò)聚凝胺法和微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血，對(duì)標(biāo)本交叉配血及血型鑒定情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 鹽水試管法正反定型不符率為5.0%，高于微柱凝膠法的0.31%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;微柱凝膠法的交叉配合不合率5.94%，高于鹽水試管法的0.63%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;微柱凝膠法較差配血不合的19例患者中，由自身抗體引起的交叉配血不合5例，由不規(guī)則抗體引起的8例，懷疑由藥物引起者6例。結(jié)論 微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)可減少交叉配血假陽(yáng)性的發(fā)生，使臨床輸血的安全性提高，且在臨床血型鑒定中的靈敏度較高，操作簡(jiǎn)單，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]輸血;血型鑒定;微柱凝膠免疫檢測(cè);鹽水試管法;特異性抗體

[中圖分類號(hào)]R457.11

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2019）03-85-04

輸血是臨床常見(jiàn)的治療手段，通過(guò)輸血能夠及時(shí)補(bǔ)充血容量，維持機(jī)體正常供氧能力，糾正休克。但為避免不同血型間的排斥，在輸血前需進(jìn)行血液鑒定與配對(duì)。因此，如何有效測(cè)定交叉配血及鑒定血型對(duì)輸血工作有重要意義。目前用于臨床方法有聚凝胺法、鹽水試管法等。本研究中通過(guò)對(duì)2016年5月～2018年5月對(duì)需要輸血的患者資料進(jìn)行回顧性分析，探討臨床血型鑒定與輸血中采取微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取320例在我院進(jìn)行輸血的患者，時(shí)間為2016年5月～2018年5月，其中女129例，男191例，年齡20～65歲，平均（38.6±10.3）歲，其中無(wú)輸血史220例，有輸血史100例。供血標(biāo)本320例，均為無(wú)償獻(xiàn)血者，其中女132例，男188例，年齡21～40歲，平均（30.5±2.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）受檢者均未服用影響檢測(cè)結(jié)果的藥物;（2）無(wú)明顯影響檢測(cè)結(jié)果的疾病;（3）無(wú)輸血禁忌癥;（4）非妊娠期、哺乳期;（5）受試者自愿接受此次檢測(cè)。

1.2 方法

所有標(biāo)本的血型鑒定采取鹽水試管法及微柱凝膠法，通過(guò)聚凝胺法和微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血，對(duì)標(biāo)本交叉配血及血型鑒定情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。儀器包括血型血清學(xué)多用離心機(jī)（TD-A型），免疫微柱孵育器（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限公司，F(xiàn)YQ型），由搏迅生物技術(shù)有限公司提供（長(zhǎng)春）試驗(yàn)試劑。血型鑒定：微柱凝膠法：所有標(biāo)本均進(jìn)行常規(guī)離心，取上層清夜，取6支凝膠微管，并以A～F進(jìn)行標(biāo)記，于A～D管中滴入0.5%紅細(xì)胞懸液，并于E～F管中分別紅細(xì)胞0.5%濃度懸液、血清，完畢后離心5min，離心后肉眼判定結(jié)果。鹽水試管法：標(biāo)本均進(jìn)行常規(guī)離心，對(duì)血清進(jìn)行分離，參照相關(guān)操作規(guī)程進(jìn)行血型鑒定[1-2]。離心后，對(duì)反定結(jié)果進(jìn)行觀察。同時(shí)做陰性對(duì)照管以集排除冷凝。交叉配血：微柱凝膠法：所有供血者及輸血者標(biāo)本均進(jìn)行常規(guī)離心，0.5%～1%紅細(xì)胞懸液，取凝膠微管2支，分別記為主側(cè)、次側(cè)，次側(cè)加輸血標(biāo)本及供血者標(biāo)本紅細(xì)胞懸液各50μL，主側(cè)加供血標(biāo)本及輸血標(biāo)本紅細(xì)胞懸液各50μL。完畢后37°C孵育15min，離心5min，完畢后肉眼判斷結(jié)果。凝聚胺法：所有供血者及輸血者標(biāo)本均進(jìn)行常規(guī)離心，對(duì)血清進(jìn)行分離，配制3%～5%紅細(xì)胞懸液，取凝膠微管2支，分別標(biāo)記為主側(cè)、次側(cè)，其中次側(cè)加1滴輸血標(biāo)本紅細(xì)胞懸液及2滴供血標(biāo)本，主側(cè)加供血標(biāo)本紅細(xì)胞懸液1滴及輸血標(biāo)本2滴，完畢后加0.6mL低離子介質(zhì)溶液混勻，之后滴加2滴凝聚胺溶液混勻，15s后離心，取管底0.1mL凝集液，將2滴重懸液滴入后肉眼判斷結(jié)果。

1.3 評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

凝聚胺法判定標(biāo)準(zhǔn)[3-5]：匹配：非免疫性凝集可在1min內(nèi)散開(kāi);不匹配：免疫性凝集在1min內(nèi)不散開(kāi);微柱凝膠法判定[6]：不匹配：紅細(xì)胞于凝膠上或凝膠中聚集;匹配：紅細(xì)胞于凝膠管底沉積。試驗(yàn)結(jié)果3min內(nèi)判讀為有效。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定情況比較

鹽水試管法正反定型不符率為5.0%，高于微柱凝膠法的0.31%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。17例正反定型不相符者，其中4例為紅細(xì)胞濃度異常，4例為紅細(xì)胞懸液不新鮮，9例血漿中含有纖維蛋白，見(jiàn)表2。

2.2 交叉配血結(jié)果比較

微柱凝膠法的交叉配合不合率5.94%，高于鹽水試管法的0.63%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表3。微柱凝膠法交叉配血不合的19例患者中，由自身抗體引起的交叉配血不合5例，由不規(guī)則抗體引起的8例，懷疑由藥物引起者6例。

3 討論

近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，安全輸血越來(lái)越受到人們的重視。鹽水試管法檢測(cè)完全抗體的準(zhǔn)確性較高，已被廣大學(xué)者所認(rèn)可，且對(duì)儀器要求不高，在臨床上廣泛用于處血型的初次鑒定，但其也存在一定缺陷性，如需血量較多、操作復(fù)雜，自動(dòng)化程度低，在試驗(yàn)中，為避免發(fā)生假凝集現(xiàn)象，需清洗干凈試管，同時(shí)為方便核實(shí)是否漏加血清，通常多先加血清后加紅細(xì)胞懸液，試驗(yàn)對(duì)離心速度及離心時(shí)間要求較高，需要在光線充足的環(huán)境下對(duì)凝集程度進(jìn)行觀察，且需要立即對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行記錄，但臨床檢測(cè)中，常出現(xiàn)試劑不標(biāo)準(zhǔn)甚至污染的情況，且細(xì)胞及血清比例不合適，操作者因粗心加錯(cuò)試劑或樣本，離心速度及離心時(shí)間不恰當(dāng)，結(jié)果判斷失誤等因素導(dǎo)致鑒定錯(cuò)誤。而凝聚胺法可對(duì)配血結(jié)果進(jìn)行快速測(cè)定，但易受肝素、藥物等因素影響[7-10]。

近年來(lái)，微柱凝膠法逐漸應(yīng)用于臨床，可有效協(xié)助醫(yī)師完成輸血工作，得到學(xué)者們的廣泛認(rèn)可。李玖平等[11]研究表明，該方法結(jié)合聚凝膠法和鹽水試管法的優(yōu)點(diǎn)，在交叉配血測(cè)定及判別血液中不規(guī)則抗體中，檢測(cè)準(zhǔn)確性良好。微柱凝膠法對(duì)于血液中不規(guī)則抗體能有效檢出，且能提高交叉配血的配對(duì)準(zhǔn)確性。微柱凝膠法在離心條件下，通過(guò)凝膠顆粒濾網(wǎng)，利用分子排阻層析原理，將紅細(xì)胞（與抗體有反應(yīng)）浮于膠中或膠表面，而微注凝膠的尖底部則為與抗體無(wú)反應(yīng)的紅細(xì)胞。該法樣本、試劑用量少，操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果易于觀察，且對(duì)結(jié)果的判讀易于標(biāo)準(zhǔn)化，可減少操作者主觀因素的影響，反應(yīng)結(jié)果圖譜穩(wěn)定，保存方便。本研究結(jié)果表明，鹽水試管法與微柱凝膠法正反定型不符率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明微柱凝膠法對(duì)血液中不規(guī)則抗體的檢測(cè)準(zhǔn)確性較高，與文獻(xiàn)報(bào)道的一致[12]。本研究中結(jié)果顯示，正反定型不相符者16例，其中4例為紅細(xì)胞濃度異常，4例為紅細(xì)胞懸液不新鮮，9例血漿中含有纖維蛋白。紅細(xì)胞濃度過(guò)高或未徹底離心，紅細(xì)胞懸液不新鮮、細(xì)菌污染等均可能會(huì)導(dǎo)致微注凝膠法出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。因此，應(yīng)合理控制好紅細(xì)胞濃度，從而提高準(zhǔn)確性，文獻(xiàn)報(bào)道[13-15]，紅細(xì)胞最佳濃度為2%。此外，5例正反定型不符者，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，1例自身凝集、1例有抗IgG抗體，1例有嚴(yán)重冷凝集（凝血功能障礙），1例自身免疫性溶血性貧血（紅細(xì)胞被抗體致敏），說(shuō)明某些疾病可引起的冷凝集、自身凝集等，引起的抗原減弱，對(duì)檢查結(jié)果產(chǎn)生影響，應(yīng)予以重視。此外，與聚凝胺法相比，微柱凝法交叉配血不合率明顯要高，提示其能有效監(jiān)測(cè)供血者及受血者血液不匹配情況。聚凝胺法在交叉配血中，凝集胺溶解后產(chǎn)生的正電荷較多，可下調(diào)紅細(xì)胞電位，引起非特異凝集，凝集胺的凝集在滴加枸櫞酸鈉后可得到中和，故配血配情況可依據(jù)是否順利散開(kāi)進(jìn)行判定，但在肝素、低濃度抗體等因素影響下，也會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞散開(kāi)。而檢測(cè)原理為生物凝膠過(guò)濾的微柱凝膠法，抗球蛋白試劑中的抗體與紅細(xì)胞內(nèi)的抗體球蛋白發(fā)生反應(yīng)，此時(shí)紅細(xì)胞體積增大，即便紅細(xì)胞凝集后散開(kāi)也無(wú)法通過(guò)凝膠通道，即不配對(duì)的紅細(xì)胞于凝膠管底部沉積，凝膠上或凝膠中聚集配對(duì)血型的紅細(xì)胞。本研究中，5例由自身抗體引起的交叉配血不合，反映格局為次側(cè)（-），主側(cè)（+），抗體篩選（+），DAT（-），判定原因?yàn)楣┱呒t細(xì)胞上的相應(yīng)抗原與患者血清中的同種抗體起反應(yīng)，患者復(fù)查ABO及RH（D）血型，排除鑒定錯(cuò)誤，之后選擇對(duì)應(yīng)抗原的血液輸入。8例存在自身免疫性疾病，反應(yīng)格局為次側(cè)（+），主側(cè)（-），DAT（+），自身（-），抗體篩選（-），患者做DAT試驗(yàn)，同時(shí)復(fù)查受供者ABO及RH（D）型，排除亞型，同時(shí)結(jié)合臨床資料分析，患者無(wú)溶血等臨床表現(xiàn)，符合輸血指征，給予適當(dāng)輸注主側(cè)相合的洗滌后紅細(xì)或少白細(xì)胞紅細(xì)胞懸液;此外還有6例患者由于感染、褥瘡等原因使用抗生素，如頭孢菌素類、青霉素類等，資料顯示上述藥物可干擾Coombs試驗(yàn)，紅細(xì)胞受膜改變，導(dǎo)致蛋白被紅細(xì)胞膜所吸引，造成DAT陽(yáng)性，這部分患者有明確的藥物使用史，無(wú)輸血史和自身免疫性疾病病史，同時(shí)血漿總蛋白正，無(wú)纖維蛋白原增高和白球蛋白比例倒置，考慮為藥物致敏。

綜上所述，微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)可減少交叉配血假陽(yáng)性的發(fā)生，使臨床輸血的安全性提高，且在臨床血型鑒定中的靈敏度較高，操作簡(jiǎn)單，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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