藍(lán)莓Vco-miR_n10的克隆及對(duì)干旱的響應(yīng)分析

單炳輝，謝 鑫，李 季，柴普今，李鶴鵬，張琳賀，翟璐璐

（吉林大學(xué)植物科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130062）

【研究意義】MicroRNA（miRNA）是一類參與動(dòng)植物轉(zhuǎn)錄后表達(dá)與調(diào)控的非編碼單鏈小分子RNA，一般由內(nèi)源基因編碼，長(zhǎng)度為18～24個(gè)核苷酸，通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則降解或抑制靶標(biāo)mRNA，從而對(duì)生物體內(nèi)的各項(xiàng)生命過程起到重要的調(diào)控作用［1］。最早的miRNA（lin-14）是1993年由LEE等在秀麗線蟲（Caenorhabditis elegans）中發(fā)現(xiàn)的，隨后幾年中并未有研究報(bào)道植物中也有miRNA的存在，直至2002年在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了miR171，這也是首次發(fā)現(xiàn)的植物miRNA［2-3］。隨著科研技術(shù)的不斷完善，越來越多的植物miRNA被鑒定到。截至目前，miRBase（Release 22.1，2018年8月）數(shù)據(jù)庫已釋放植物成熟miRNAs 10 414條，共涵蓋了大豆（756條）、苜蓿（756條）、水稻（325條）、擬南芥（428條）、馬鈴薯（343條）、蘋果（322條）、葡萄（183條）、番茄（147條）等在內(nèi)的82個(gè)植物物種。越來越多研究表明，在植物生命過程中，這些miRNA作為有效調(diào)控因子影響著包括營養(yǎng)器官［4-6］和生殖器官［7-9］發(fā)育、植物激素調(diào)控［10］、營養(yǎng)平衡［11-12］、脅迫響應(yīng)［13-14］和miRNA生物合成途徑自控［15］等大量生理和生長(zhǎng)發(fā)育過程。植物生長(zhǎng)過程中難免會(huì)受到非生物脅迫的影響，引發(fā)一系列生理生化反應(yīng)，可能會(huì)降低植物抗逆性、影響品質(zhì)、減少產(chǎn)量等［15-18］。因此，揭示植物對(duì)非生物脅迫的應(yīng)答反應(yīng)機(jī)制顯得尤為重要。【前人研究進(jìn)展】大量研究表明，植物中一些miRNA會(huì)在低溫寒冷、鹽堿、干旱等非生物脅迫條件下被誘導(dǎo)，其表達(dá)量發(fā)生變化后進(jìn)一步調(diào)控靶標(biāo)基因及其下游基因的表達(dá)，從而發(fā)揮相應(yīng)的功能。例如，擬南芥中，miR393、miR397b和miR402的表達(dá)量會(huì)在低溫、干旱、鹽堿和ABA處理后上升［19］。此外，擬南芥中miR397在高鹽條件下表達(dá)量增加，其靶標(biāo)基因LACs和CKB3的表達(dá)量降低，該基因過表達(dá)后轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽能力高于野生型擬南芥［20］。Zhang等［21］研究表明，低溫脅迫誘導(dǎo)miR319表達(dá)量下降，反而提高了植株抗低溫的能力。眾所周知，干旱是全球面臨的主要農(nóng)業(yè)氣象災(zāi)害之一，其發(fā)生頻率高、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、影響范圍廣、后延破壞力大，嚴(yán)重影響著我國很多地區(qū)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，不僅不利于植株的正常生命活動(dòng)，而且會(huì)降低產(chǎn)品性狀，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失［22］，因此，提高植物對(duì)干旱脅迫的耐受能力具有重要意義。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)了大量干旱響應(yīng)基因，然而這些基因是如何在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平上協(xié)調(diào)從而發(fā)揮功能的仍不是十分清晰，而植物miRNA的功能研究對(duì)揭示上述問題提供了大量線索。前人研究表明，干旱脅迫條件下，擬南芥中miR394過表達(dá)植株相比于野生型植株對(duì)干旱的抵抗能力更強(qiáng)［23］。而miR169則會(huì)促進(jìn)植物葉片水分的散失，從而加速植株枯萎［24］。有研究報(bào)道，馬鈴薯在干旱條件下，miR171會(huì)激活SCR基因從而表達(dá)SCL蛋白，激活赤霉素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，增強(qiáng)抗旱能力［25］。此外，擬南芥中miR156、miR167、miR393、miR396 和 miR408［26］， 丹 參中 miR156、miR157、miR166、miR168［27］以 及水稻中miR169、miR393、miR395的表達(dá)量在干旱條件下均有提高［28］。對(duì)這些表達(dá)量變化的miRNAs，它們是否參與植物對(duì)干旱脅迫的應(yīng)答反應(yīng)？還有哪些miRNA能夠調(diào)控植物對(duì)干旱環(huán)境的耐受能力，又是如何進(jìn)行調(diào)控的？這些問題還需要進(jìn)一步深入研究。【本研究切入點(diǎn)】藍(lán)莓（Vaccinium corymbosum L.）為杜鵑花科越橘屬多年生常綠或落葉灌木，其果實(shí)呈深藍(lán)色，表皮被白霜，富含花青苷。藍(lán)莓因其為淺根系植物，主根不發(fā)達(dá)，且根系纖細(xì)，在栽培中不能吸收深層土壤的水分，故對(duì)土壤水分要求較高，容易受到干旱影響。本研究基于前期高通量測(cè)序的結(jié)果，從小RNA數(shù)據(jù)庫中篩選到Vco-miR_n10，該新型miRNA在藍(lán)莓果實(shí)成熟過程中表達(dá)量發(fā)生了變化，在藍(lán)果期表達(dá)量最高，而在果實(shí)生長(zhǎng)過程中藍(lán)莓對(duì)水分的需求量逐漸增大，此過程中干旱脅迫會(huì)嚴(yán)重影響果實(shí)品質(zhì)，我們推測(cè)該miRNA可能在藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育尤其是果實(shí)成熟期發(fā)揮重要的調(diào)控作用。【擬解決的關(guān)鍵問題】為了探究VcomiR_n10的基本功能，本研究對(duì)藍(lán)莓Vco-miR_n10進(jìn)行了序列驗(yàn)證，以確定其是否為miRNA，隨后克隆并將其轉(zhuǎn)化至擬南芥中，以探究其作用機(jī)理，同時(shí)，我們利用300 mmol/L甘露醇進(jìn)行處理，分析Vco-miR_n10對(duì)干旱脅迫的響應(yīng)情況，以期為進(jìn)一步研究藍(lán)莓Vco-miR_n10的調(diào)控功能及提高藍(lán)莓耐旱能力提供重要信息與研究思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

將Col-1野生型及轉(zhuǎn)基因擬南芥種子在4 ℃黑暗環(huán)境下春化3 d，播于蛭石與草炭以1∶3比例混合的濕潤基質(zhì)中，隨后于22 ℃、16 h/8 h（光照/黑暗）條件下培養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藍(lán)莓花器官RNA的提取與cDNA的獲得 采用RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（離心柱型）對(duì)所采集藍(lán)莓花組織進(jìn)行總RNA的提取，詳細(xì)步驟參考試劑盒說明書。反轉(zhuǎn)錄詳細(xì)步驟參照PrimeScript ? RT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）（TaKaRa Bio.，Code No. RR047A）試劑盒說明書。

1.2.2 藍(lán)莓Vco-miR_n10成熟體及前體序列數(shù)據(jù)來源 序列信息來源于本課題組藍(lán)莓不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)小RNA高通量測(cè)序的結(jié)果（原始數(shù)據(jù)已上傳至NCBI數(shù)據(jù)庫SRX2658700和SRX2676839中）［29］，并利用在線軟件The mfold Web Server（http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold）對(duì)該新型藍(lán)莓miRNA進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)，進(jìn)一步驗(yàn)證其確為miRNA。

1.2.3 藍(lán)莓Vco-miR_n10基因克隆 設(shè)計(jì)帶有Gateway接頭的引物Vco-miR_n10-F（5’-ggggac aagtttgtacaaaaaagcaggcttcGGATTGTTTGACGACGAG AGAGAG-3’）和 Vco-miR_n10-R（5’-ggggacca ctttgtacaagaaagctgggtcACATAGCCCATTTCCACTCA ACC-3’），以藍(lán)莓花組織混合cDNA為模板，利用高保真酶PrimeStar（TaKaRa）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，程序如下：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s；55℃復(fù)性30 s；72 ℃延伸30 s，35次循環(huán)；72 ℃延伸7 min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的特異性。將獲得的與預(yù)期產(chǎn)物大小一致的單一、明亮的條帶進(jìn)行回收，詳細(xì)步驟參照天根公司的普通瓊脂糖凝膠DNA純化回收試劑盒（離心柱型）說明書。

1.2.4 表達(dá)載體構(gòu)建 利用Gateway技術(shù)將pre-Vco-miR_n10重組到pDONR207入門載體中，然后轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，篩選陽性單菌落培養(yǎng)于37 ℃環(huán)境中，提取質(zhì)粒并進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。隨后，將陽性質(zhì)粒構(gòu)建到表達(dá)載體pEarleyGate101上，并將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌GV3101中。

1.2.5 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因陽性苗的篩選利用蘸花侵染法對(duì)長(zhǎng)勢(shì)良好且花蕾較多的擬南芥進(jìn)行侵染，隨后黑暗培養(yǎng)16～24 h。T0代種子經(jīng)次氯酸鈉消毒后播種于蛭石與草炭以1∶3比例混合的基質(zhì)中。生長(zhǎng)期間噴施0.2 mg/mL草胺磷進(jìn)行篩選，10 d后，將生長(zhǎng)狀況良好、仍保持綠色的轉(zhuǎn)基因植株定植到新的基質(zhì)中；收集T1代擬南芥葉片，采用CTAB法提取基因組DNA，經(jīng)過PCR檢測(cè)上述篩選出的陽性植株是否存在pre-Vco-miR_n10目的基因，以確定幼苗為陽性轉(zhuǎn)基因植株，繁殖并篩選轉(zhuǎn)基因擬南芥至T3代純合體。

1.2.6 Vco-miR_n10 轉(zhuǎn)基因擬南芥的干旱脅迫 用甘露醇模擬干旱脅迫處理，將WT種子、35Spro::pre-Vco-miR_n10-24和35Spro::pre-VcomiR_n10-52轉(zhuǎn)基因種子消毒后均勻地播種于分別含有0、300 mmol/L甘露醇的MS培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天定時(shí)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽數(shù)和綠苗數(shù)，連續(xù)統(tǒng)計(jì)14 d，分別計(jì)算發(fā)芽率和綠苗率。

2 結(jié)果與分析

2.1 藍(lán)莓pre-Vco-miR_n10的克隆

以藍(lán)莓花組織cDNA為模板，利用Gateway技術(shù)對(duì)藍(lán)莓pre-Vco-miR_n10基因序列進(jìn)行克隆，克隆片段大小為224 bp，PCR結(jié)果與預(yù)期一致（圖1A），利用Gateway系統(tǒng)中PDONR207和pEarleyGate101依次進(jìn)行BP和LR反應(yīng)后，進(jìn)行菌落PCR檢測(cè)，結(jié)果如圖1B所示。其中條帶1、條帶3和條帶4的大小與目的基因一致，條帶2的片段長(zhǎng)度略小，應(yīng)為假陽性克隆。隨機(jī)選取條帶1、條帶3菌液送去進(jìn)一步測(cè)序，結(jié)果顯示均為單峰且峰值較高（圖1C），表明測(cè)序結(jié)果可信度很高，測(cè)序結(jié)果與預(yù)期藍(lán)莓pre-Vco-miR_n10基因序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示二者幾乎一致，錯(cuò)配率較低（圖2），且Vco-miR_n10的成熟體序列完全一致。將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101中，收取侵染后野生型擬南芥種子，再次播種后，通過草胺磷篩選獲得陽性植株（圖3），T1代種子繼續(xù)篩選，進(jìn)一步繁殖后獲取T3代種子用于干旱脅迫分析。

圖1 藍(lán)莓Vco-miR_n10的克隆、菌落PCR及測(cè)序峰Fig. 1 Cloning, colony PCR and sequencing of blueberry Vco-miR_n10

圖2 藍(lán)莓Vco-miR_n10測(cè)序結(jié)果比對(duì)Fig. 2 Comparison of sequencing result of blueberry Vco-miR_n10

圖3 擬南芥陽性轉(zhuǎn)基因株系的鑒定Fig. 3 Identification of positive transgenic lines of Arabidopsis thaliana

2.2 藍(lán)莓pre-Vco-miR_n10的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

利用mfold軟件對(duì)藍(lán)莓pre-Vco-miR_n10的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)其可以形成一個(gè)比較典型的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，且成熟的miRNA序列位于莖環(huán)結(jié)構(gòu)的一條臂上、miRNA*落到對(duì)應(yīng)的另一條臂上，兩者間僅存在2個(gè)錯(cuò)配，同時(shí)具有較低的折疊自由能MFE（-75.58），詳見圖4。

圖4 藍(lán)莓pre-Vco-miR_n10的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)圖Fig. 4 Secondary structure diagram of blueberry pre-Vco-miR_n10

2.3 藍(lán)莓Vco-miR_n10的功能分析

為了更好地了解藍(lán)莓Vco-miR_n10基因在擬南芥中發(fā)揮的功能，我們將篩選得到的種子在加入甘露醇的MS固體培養(yǎng)基中進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，我們挑選了其中最顯著的2個(gè)株系（Vco-miR_n10-24和 Vco-miR_n10-52） 及 1個(gè)甘露醇濃度（300 mmol/L），對(duì)這2個(gè)株系在此條件下的生長(zhǎng)狀況進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，生長(zhǎng)在含有0 mmol/L甘露醇MS培養(yǎng)基中的野生型擬南芥和轉(zhuǎn)基因擬南芥沒有差別，0 mmol/L甘露醇下的擬南芥長(zhǎng)勢(shì)明顯優(yōu)于300 mmol/L甘露醇下的擬南芥（圖5）。在藍(lán)莓Vco-miR_n10基因的作用下，擬南芥對(duì)干旱條件的抵抗能力明顯降低（圖5）。300 mmol/L甘露醇下的野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥均從播種后第4天開始萌發(fā)、第5天萌發(fā)速率提高，且從第5天晚上起野生型擬南芥發(fā)芽率顯著高于轉(zhuǎn)基因株系發(fā)芽率，直至第9天發(fā)芽率基本趨于穩(wěn)定。野生型擬南芥的發(fā)芽率高達(dá)67.72%，相同條件下轉(zhuǎn)基因株系Vco-miR_n10-24的發(fā)芽率為33.53%，比野生型擬南芥低34.19%。同樣，轉(zhuǎn)基因株系Vco-miR_n10-52的發(fā)芽率為37.69%，比野生型擬南芥低30.03%（圖6）；此外，在300 mmol/L甘露醇MS固體培養(yǎng)基中，野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥從第7天開始綠苗，以一個(gè)比較穩(wěn)定的速率持續(xù)增長(zhǎng)，從第10天開始野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥開始出現(xiàn)顯著差異，到第14天綠苗率達(dá)到最大，之后不再變化。轉(zhuǎn)基因株系Vco-miR_n10-24和Vco-miR_n10-52的綠苗率分別達(dá)到33.53%和37.69%，同樣處理下野生型擬南芥的綠苗率為66.33%，比轉(zhuǎn)基因株系綠苗率分別高出32.80%和28.64%（圖7）。上述結(jié)果表明藍(lán)莓Vco-miR_n10基因在擬南芥中的過表達(dá)會(huì)降低擬南芥植株對(duì)干旱的抵抗能力。

圖5 0 、300 mmol/L甘露醇條件下野生型擬南芥和轉(zhuǎn)基因株系間發(fā)芽率比較Fig. 5 Comparison of germination rate between wild type Arabidopsis thaliana and transgenic lines treated with 0, 300 mmol/L mannitol

圖6 300 mmol/L甘露醇處理下野生型擬南芥和轉(zhuǎn)基因株系的發(fā)芽率Fig. 6 Germination rate of wild type Arabidopsis thaliana and transgenic lines treated with 300 mmol/L mannitol

圖7 300 mmol/L甘露醇處理下野生型擬南芥和轉(zhuǎn)基因株系的綠苗率Fig. 7 Cotyledon greening rate of wild type Arabidopsis thaliana and transgenic lines treated with 300 mmol/L mannitol

3 討論

隨著高通量測(cè)序技術(shù)與生物信息學(xué)不斷的結(jié)合與發(fā)展，越來越多的miRNA在不同植物中被預(yù)測(cè)與鑒定。近年來，國內(nèi)外研究表明成熟miRNAs作為有效調(diào)控因子在轉(zhuǎn)錄后水平可通過引導(dǎo)靶基因mRNA降解、介導(dǎo)翻譯抑制以及DNA甲基化等途徑調(diào)控靶標(biāo)基因的表達(dá)，從而參與植物的各項(xiàng)生命過程。目前關(guān)于藍(lán)莓miRNA的研究報(bào)道還很少，本研究中的研究對(duì)象Vco-miR_n10是通過藍(lán)莓果實(shí)高通量測(cè)序獲得的一個(gè)新型miRNA，關(guān)于其調(diào)控功能目前尚未見任何報(bào)道。為了解Vco-miR_n10的基本功能，第一個(gè)關(guān)鍵問題是鑒定該序列是否為真正的miRNA。本研究從兩個(gè)方面來驗(yàn)證：首先，其前體序列可以形成一個(gè)“莖-環(huán)”的二級(jí)結(jié)構(gòu)，且其成熟的microRNA序列在“莖”的其中一條臂（3′臂或5′臂）上，這與植物miRNA的生物合成機(jī)制相一致［30-31］；其次，DCL1和HYL1進(jìn)一步切割pre-miRNA形成miRNA/miRNA*復(fù)合體，隨后于細(xì)胞質(zhì)中分離為不同長(zhǎng)度的miRNA成熟體［32］，且該miRNA均為典型的18～24 nt切割產(chǎn)物，而本研究中的Vco-miR_n10成熟體序列大小符合這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，即長(zhǎng)度約為20個(gè)核苷酸，由此表明本研究所克隆的序列確實(shí)是miRNA。

在前期研究中，我們對(duì)Vco-miR_n10在5個(gè)藍(lán)莓果實(shí)發(fā)育關(guān)鍵時(shí)期（綠果初期、綠果末期、白果期、轉(zhuǎn)色期和藍(lán)果期）的表達(dá)模式進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示該新型miRNA在藍(lán)莓藍(lán)果期呈現(xiàn)了最高的表達(dá)量［29］，說明Vco-miR_n10極有可能在果實(shí)成熟過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。因此，我們利用課題組的藍(lán)莓轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)資源結(jié)合近緣物種越橘的相關(guān)基因組序列，分析并克隆了pre-Vco-miR_n10，并將其轉(zhuǎn)入野生型擬南芥，以期對(duì)藍(lán)莓Vco-miR_n10的功能進(jìn)行研究，除了對(duì)獲得的T3代轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行表型觀察，我們同時(shí)觀察擬南芥35S::pre-Vco-miR_n10在甘露醇處理?xiàng)l件下的發(fā)芽率和綠苗率變化，結(jié)果顯示Vco-miR_n10過表達(dá)的擬南芥抗干旱能力顯著變?nèi)酢Ｍ瑯拥模琇i等［24］研究已表明miR169a和miR169c在植物中過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致植物對(duì)干旱更敏感，這與本研究結(jié)果一致。與之相似的是，苜蓿缺水時(shí)，miR169在根中的表達(dá)量下降［33］；在擬南芥中，miR169則會(huì)通過調(diào)控NFYA5來提高干旱脅迫的耐受能力［24］；玉米miR168通過靶標(biāo)基因MAPK在種子中表達(dá)，參與種子新陳代謝，進(jìn)而參與對(duì)干旱脅迫的調(diào)控［26］。然而，水稻miR169g、miR169n/o［26］， 苜 蓿 miR398、miR408［33］與 番茄miR169c［26］在干旱脅迫條件下，表達(dá)量均會(huì)升高。大豆中OSA-miR319和miR394的過表達(dá)會(huì)提高植株對(duì)干旱的抵抗能力［26,34-35］。此外，gma-miR172c在擬南芥中過表達(dá)會(huì)提高植株在甘露醇處理下的發(fā)芽率和綠苗率［15］。這些研究結(jié)果與本文相反，可能是因?yàn)椴煌琺iRNA的表達(dá)水平隨著脅迫處理過程而變化，而其靶標(biāo)基因的不同也會(huì)導(dǎo)致調(diào)控機(jī)制存在差異。本研究從抗干旱脅迫的角度闡釋了藍(lán)莓Vco-miR_n10的功能，為藍(lán)莓Vco-miR_n10的進(jìn)一步研究提供了重要信息和研究思路。

遺憾的是，在整個(gè)轉(zhuǎn)基因擬南芥植株生長(zhǎng)期間，我們沒有觀察到轉(zhuǎn)基因植株明顯異于野生型植株的表型變化，這可能是因?yàn)閂co-miR_n10在擬南芥正常生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)發(fā)生過程中存在功能冗余，單一提高了該miRNA的表達(dá)量并不能引起任何外部形態(tài)上的顯著變化。后續(xù)還將進(jìn)一步挖掘藍(lán)莓Vco-miR_n10基因在植物包括藍(lán)莓中的靶標(biāo)基因及其下游基因，以期分析藍(lán)莓Vco-miR_n10基因在植物生長(zhǎng)過程中及脅迫條件下的功能調(diào)控機(jī)制。

4 結(jié)論

本研究利用藍(lán)莓轉(zhuǎn)錄組、小RNA數(shù)據(jù)庫資源結(jié)合近緣物種越橘的相關(guān)基因組序列，篩選到藍(lán)莓新型miRNA（Vco-miR_n10），其具有較為典型的“莖-環(huán)”二級(jí)結(jié)構(gòu)且符合miRNA鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。將克隆到的pre-Vco-miR_n10轉(zhuǎn)化到擬南芥中使其異位表達(dá)，并觀察不同生長(zhǎng)環(huán)境條件（0 mmol/L和300 mmol/L甘露醇）下的表型變化。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型擬南芥相比，在利用300 mmol/L甘露醇進(jìn)行的模擬干旱條件下，發(fā)芽率和綠苗率呈現(xiàn)比較明顯的下降趨勢(shì)，即藍(lán)莓Vco-miR_n10在擬南芥中過表達(dá)降低了擬南芥對(duì)干旱脅迫的抵抗能力，使種子在干旱條件下的萌發(fā)能力和綠苗率均降低，這可能是由于該miRNA所調(diào)控的靶標(biāo)基因的表達(dá)量變化引起的，該結(jié)果對(duì)提高植物抗旱能力、提升植物品質(zhì)有著重要的理論指導(dǎo)意義。