檢測食品中伏馬菌素的研究新進展

馬騰達　王慧玲　周鳳霞　王宇　高澤岳

摘要：伏馬菌素主要是由串珠鐮刀菌屬產生的一類有毒害和致癌性的真菌毒素，包括FB1、FB2、FB3等11種，其中，伏馬菌素B1（FB1）是主要組分，也是毒性最強的組分，主要污染玉米、小麥、稻米等糧食作物及其制品。正因為伏馬菌素具有毒性，對伏馬菌素進行研究具有重要意義。本文總結了當前伏馬菌素的研究新進展，以期為今后的研究提供參考。

關鍵詞：伏馬菌素;食品檢測;新進展

中圖分類號： TS213.4? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：? A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號：? ?10.14025/j.cnki.jlny.2019.12.043

采食含有FB1的飼料和食品，可導致人及動物中毒，如馬的腦白質軟化癥、豬肺水腫癥、大鼠肝癌、人類食管癌和肝癌等。國際癌癥研究中心（IARC）將FB1列為2B類致癌物質（即人類可能致癌物），并對其在飼料及食品中含量做了限量（1～3m·kg-1）規(guī)定。因此，研究食品中伏馬菌素的檢測新進展具有重大意義。

1 伏馬菌素在食品檢測中的研究新進展

目前，檢測伏馬菌素的方法主要有儀器分析（高效液相色譜法、質譜及液相色譜-質譜）和免疫學。

近些年，由于伏馬菌素的強毒性作用，對其研究也備受關注。郭禮強等建立了芝麻醬中16種真菌毒素（赭曲霉毒素A、T-2毒素、伏馬菌素B2、伏馬菌素B1、O-甲基雜色曲霉素、蛇形菌素、新茄鐮孢菌醇、雜色曲霉素、黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2、曲酸、青霉酸、橘青霉素、黃曲霉毒素M1）多殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質譜 （UPLC-MS/MS）的檢測方法。芝麻醬樣品經乙腈-水-乙酸（80∶19∶1，體積分數，下同）溶液提取，QuEChERS方法凈化后，以含0.1%甲酸的水溶液與乙腈為流動相，經ACQUI TY UPLC BEH C18 色譜柱（2.1mm×50mm，1.7μm）分離，以多級反應監(jiān)測（MRM），外標法定量。結果表明：16種真菌毒素的檢出限為0.03～1.5μg/kg，定量限為0.10～4.0μg/kg;線性范圍在0.10～200μg/kg內各成分的線性相關系數均大于0.991;樣品在定量限1倍、2倍和10倍三個添加水平下的平均回收率為70.7%～99.2%，相對標準偏差（RSD）為3.26%～10.5%。該方法簡便、靈敏、快速，可用于芝麻醬中多種真菌毒素污染的監(jiān)控分析[1]。

姚靜靜等擬制備靈敏度高、特異性強的抗伏馬菌素B1（FB1）單克隆抗體，并初步應用于FB1的檢測，以期為FB1的免疫學快速檢測提供技術支持。采用碳二亞胺法（EDC）制備人工抗原FB1-BSA 和FB1-OVA。以免疫原FB1-BSA免疫BALB/c小鼠，每四周免疫一次。四免后，小鼠脾B細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合后，采用ELISA篩選，建立分泌抗FB1抗體的單克隆雜交瘤細胞株;采用動物體內誘生腹水方法制備出抗FB1單抗，并鑒定單抗的各種性能;初步建立FB1免疫學檢測方法。結果得到1株穩(wěn)定分泌抗FB1 單抗的雜交瘤細胞株2E11-H3，該細胞株分泌的mAbs的效價高達1∶1.02×106，親和力常數平均值為7.98×1010L·mol-1，亞型為IgG3。FB1 mAbs的工作濃度為1∶6.0×104，與FB1發(fā)生特異性反應，間接競爭ELISA測得IC50=43.65ng·mL-1;與FB1結構類似物FB2和FB3的交叉反應率分別為385%和72.4%，與其他霉菌毒素及載體蛋白BSA和OVA均無交叉反應。樣品回收率在85.85%～114.07%，平均值為98.81%;變異系數為10.11%。本研究制備出了靈敏度高、特異性強、親和力高的FB1單抗，并初步建立FB1免疫學檢測方法[2]。

任文潔等為制備一種快速檢測玉米中伏馬菌素B1（FB1 ）膠體金免疫層析試紙條。方法：采用碳化二亞胺法合成檢測抗原FB1-BSA，檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，辛酸-飽和硫酸銨法對抗FB1單克隆抗體腹水進行純化，將金標抗體噴于金標墊，檢測抗原FB1-BSA（T線）和羊抗鼠二抗（C線）噴涂于硝酸纖維素膜（NC膜）。結果：得到的單克隆抗體效價為1.28×105。該試紙條的NC膜噴涂的檢測抗原濃度為200 μg/mL，羊抗鼠二抗?jié)舛葹?.0mg/mL，噴涂量分別為0.74 μL/cm，試紙條靈敏度為20ng/mL，檢測時間只需5min，試紙條于4℃至少可保存12個月。結論：采用制備的試紙條對玉米實際樣品進行檢測，檢測結果與高效液相和酶聯(lián)免疫吸附法檢測結果相一致，說明該試紙條適合現(xiàn)場快速檢測伏馬菌素B1[3]。

2 展望

當前，對于伏馬菌素的研究越來越火熱。由于其毒性強大而備受關注。因此，研究伏馬菌素的檢測方法就顯得更為重要。在研究過程中也總結出了很多方法，每種研究方法都有各自的特點。在以后的研究中，應該致力于研究出更快，更加簡單、實用的測定方法，以更好地為食品檢測服務。

參考文獻

[1]郭禮強.超高效液相色譜-串聯(lián)質譜測定芝麻醬中16種真菌毒素[J].中國調味品，2017，42（10）：154-159.

[2]姚靜靜.伏馬菌素B1單克隆抗體的制備及免疫學檢測方法初步應用[J].畜牧獸醫(yī)學報，2016，47（5）：1009-1017

[3]任文潔.伏馬菌素B1膠體金免疫層析快速檢測試紙條的研制[J].食品工業(yè)科技，2015，58（6）：58-63.