細胞粘附蛋白、HER-2、ZO-1和VEGF與彌漫型胃癌侵襲轉移的相關性研究

劉俊驥 劉 蘭 顏贊芳 張志敏

胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的消化系統常見惡性腫瘤，在世界范圍內發病率和死亡率呈逐年上升趨勢[1-2]。好發年齡在50歲以上，但由于飲食結構的改變、工作壓力增大以及幽門螺桿菌的感染等原因，使得胃癌呈現年輕化傾向。絕大多數胃癌屬于腺癌，早期無明顯癥狀，常與胃炎、胃潰瘍等胃慢性疾病癥狀相似，易被漏診誤診，因此臨床上確診胃癌時多處于胃癌晚期，手術切除后胃癌的侵襲轉移仍是胃癌患者死亡的重要原因，也是影響患者臨床治療和預后的主要因素[3-4]。細胞間黏附分子-1(ICAM-1) 和緊密連接蛋白 1(ZO-1)為機體重要的細胞活性分子，不僅可以參與調節機體免疫炎癥反應過程，而且還可介導腫瘤細胞增殖轉移和黏附作用；血管內皮生長因子(VEGF)和人表皮生長因子受體-2 (HER-2)主要用于促進內皮細胞增殖、增加血管通透性，以誘導腫瘤間的血管生成[5-6]。本研究通選取2016年1月至2017年12月本院收治的胃癌患者60例，收集患者彌漫型胃癌組織、癌旁組織(距癌2 cm)和遠離胃癌的正常組織(距癌5 cm)，采用Real-Time PCR法檢測患者組織中ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA水平的表達，旨在探討ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2與胃癌侵襲轉移作用的相關性，及其與腫瘤發生發展的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象及一般資料

選取2016年1月至2017年12月本院收治的胃癌患者60例，經組織病理學確診為彌漫型胃癌。留取患者組織學標本包括患者胃癌組織60例、癌旁組織60例(距癌2 cm)和遠離胃癌的正常組織60例(距癌5 cm)。本研究經本院倫理委員會批準，患者及家屬自愿簽署知情同意書，男性 32例，女性28例；平均發病年齡(43.29±5.76)歲。

1.2 Real-Time PCR檢測方法

采用Real-time PCR法對患者胃癌組織、癌旁組織及正常組織內ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表達水平進行檢測。Trizol法提取胃癌組織、癌旁組織及正常組織中的總RNA，用TaKaRa公司的Prime Script?RT試劑盒逆轉錄合成cDNA后，用SYBR Premix Ex TaqTMII試劑盒進行ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA 實時熒光定量操作。實驗采用相對定量法，采取閾值循環數(cycle threshold,CT)值比較法，計算不同樣本之問ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA相對百分比。公式:ΔΔCt=(CT.實驗組的基因-CT.實驗組管家基因)-(CT.對照組目的基因-CT.對照組管家基因)。目的mRNA的量=2-ΔΔCT。

1.3 免疫組織化學法檢測

取胃癌患者的病理石蠟切片標本，室溫封閉40 min(5%血清)，加入單克隆抗體ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2，堿性磷酸酶二抗4 ℃孵育。PBS清洗后加入SP，和DAB恒溫顯色封片。用10×、40×物鏡顯微鏡進行觀察。ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2的主要陽性表達表現：棕黃色顆粒在結腸癌細胞內出現。每張切片隨機選取 10 個高倍視野，記錄陽性細胞的百分率，著色細胞占計數細胞百分率≤10為陰性表達；>10為陽性表達。

1.4 統計學處理

本實驗各組數據結果應用SPSS 22.0軟件處理，對數據行正態性和方差齊性檢驗，符合正態分布的計量資料，計量資料結果用均數±標準差表示，組間差異采用單因素方差分析和Bonferroni's Multiple Comparison Test。兩兩相關性分析采用相關性直線相關分析，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Real-Time PCR檢測結果

癌旁組織和正常組織 ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表達水平沒有顯著改變，與對照組和癌旁組織ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表達水平相比，胃癌組患者癌組織內ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表達水平顯著升高，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 Real-Time PCR檢測結果

注：*為與對照組相比，P<0.05；#為與癌旁組織相比，P<0.05。

2.2 ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2表達與胃癌臨床病理特征的關系

免疫組織化學法結果顯示，ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2陽性表達和彌漫型胃癌的淋巴結轉移、浸潤深度和TNM分期具有明顯的相關性，差異具有統計學意義(P<0.05)。ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2陽性表達和彌漫型胃癌患者的年齡、性別和腫瘤直徑沒有相關性，差異不具有統計學意義(P>0.05)，見表2-3。

表2 ICAM-1、VEGF表達與胃癌臨床病理特征的關系/例

表3 ZO-1和HER-2表達與胃癌臨床病理特征的關系/例

3 討論

細胞間黏附分子-1(ICAM-1) 屬于黏附分子免疫球蛋白超家族(IgSF)成員，主要用于介導內皮細胞間的細胞黏附、抗原遞呈功能的調節、T,B淋巴細胞的激活等免疫反應。當機體出現炎性反應、感染和免疫應激等情況時，ICAM-l可被過度激活和表達，參與調節機體細胞的免疫應答[7]。研究表明，高轉移的胃癌細胞中可檢測出ICAM-1高水平的表達，顯示了ICAM-1的表達與胃癌的侵襲和轉移存在顯著的相關性，可有效用于臨床監測胃癌的血源性淋巴性轉移[8]。緊密連接蛋白 1(ZO-1)是第1個被發現的緊密連接相關蛋白，在乳腺癌、胰腺癌和甲狀腺癌等侵襲性上皮性腫瘤細胞和組織中可檢測出ZO-1的迷離表達，調控上皮細胞的分化和形態，腫瘤細胞的分化和侵襲轉移，研究表明，ZO-1與腫瘤細胞的分化程度、浸潤深度、是否伴有淋巴結轉移及進展情況具有明顯的相關性[9-10]。人表皮生長因子受體-2 (HER-2)在正常人體腔上皮、 腺上皮等組織中僅僅微弱的表達，但在腫瘤細胞組織中呈過度表達，因此，檢測組織中HER-2表達對于判斷腫瘤的發生和發展具有重要作用，研究表明HER-2可以作為胃癌的1個不良的預后因素和治療靶點[11-12]。血管內皮生長因子(VEGF)是1種具有高度特異性的促血管內皮細胞分裂原的血管內皮細胞生成因子，在促進新血管的生成、維持血管壁的完整性和通透性等方面具有十分重要的作用[13-14]。

本研究結果表明，癌旁組織和正常組織 ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA含量沒有顯著改變，胃癌組患者癌組織內ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA顯著升高，說明在彌漫型胃癌患者腫瘤組織中，ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2呈現異常高表達狀態；同時，ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2陽性表達和彌漫型胃癌的淋巴結轉移、浸潤深度和TNM分期具有明顯的相關性，說明ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2與腫瘤細胞的分化程度、浸潤深度、是否伴有淋巴結轉移及進展情況具有明顯的相關性，在腫瘤細胞組織中呈過度表達。但ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2陽性表達和彌漫型胃癌患者的年齡、性別和腫瘤直徑沒有相關性。綜上所述，本研究結果表明ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2與彌漫型胃癌的侵襲轉移存在明顯的相關性，可作為判斷胃癌侵襲轉移能力的有效指標。