Ⅳ期胃癌腫瘤組織miR-200c表達水平與含鉑方案化療療效及預后的相關(guān)性

馮 浪

胃癌是臨床常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤，由于自覺癥狀不明顯，胃鏡常規(guī)篩查普及率低，因此許多患者確診時已經(jīng)為晚期，此時全身化療成為主要治療手段。鉑類化療方案是晚期胃癌治療重要手段，但腫瘤細胞對鉑類藥物有耐藥性，僅部分患者此次方案敏感，因此尋找對鉑類化療療效敏感的觀測指標，以促進個體化療研究進展。MiRNA作為生物學研究熱點已有時日，人類miRNA具有充當腫瘤基因或抑制瘤基因作用，對其它靶基因表達和信號通路有調(diào)控作用，在腫瘤發(fā)生、進展及轉(zhuǎn)歸中有重要作用[1]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)miRNA-200c能經(jīng)靶基因ZEBI上調(diào)RASSFIA水平，從而對乳腺癌細胞ENT效應發(fā)揮抑制作用；且miR-200c在乳腺癌干細胞、乳腺癌細胞中表達下調(diào)；以上研究說明miR-200c表達下調(diào)在腫瘤發(fā)生和進展中可能發(fā)揮重要作用[2]。本研究分析Ⅳ期胃癌癌組織miR-200c表達與預后和鉑類化療效果的關(guān)系，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

根據(jù)本研究標準于2013年10月至2016年11月納入Ⅳ期胃癌患者87例，患者年齡45～74歲，平均(66.19±2.19)歲；男性52例，女35例；ECOG分值為(1.32±0.23)分；癌組織分化低+差共50例，高+中共37例；有腹膜轉(zhuǎn)移30例，無腹膜轉(zhuǎn)移57例；肝轉(zhuǎn)移31例，無肝轉(zhuǎn)移56例。

納入標準[3-4]：穿刺細胞學或胃鏡組織病理學診斷的Ⅳ期胃癌；未曾接受過放化療；影像學檢查發(fā)現(xiàn)可測量腫瘤靶病灶；ECOG≤2分；預計生存時間≥1個月；肌酐<1.5倍NL，膽紅素<1.5倍UNL，堿性磷酸酶≤2.5倍UNL，谷丙及谷草轉(zhuǎn)氨酶≤2.5倍UNL，血小板計數(shù)≥100×109/L，血紅蛋白≥80 g/L，中性粒細胞計數(shù)≥2.0×109/L，白細胞計數(shù)≥4.0×109/L。排除標準[5]：其它惡性腫瘤；未控制的高血壓、糖尿病、感染；哺乳期及妊娠期女性。從病理科獲取研究對象經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋組織標本和距癌組織至少2 cm的癌旁非癌組織標本。

1.2 方法

本實驗采用TRIzol試劑，由美國Invitrogen公司提供實驗引物，美國Fementas公司提供逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、Go Taq?Hot Start Green Master Mix及Go Taq?q PCR Master Mix，盟國AXYGEN公司提供無 RNaes 相關(guān)耗材。采用實時熒光定量PCR進行組織中miR-200c檢測，TRIzol提取細胞或組織中RNA，檢測RNA純度、濃度、完整性，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將mRNA或miRNA反轉(zhuǎn)錄呈cDNA，參考Go Taq?q PCR Master Mix說明書進行，采用ABI7500儀器Real-time RCP儀器進行PCR反應。相對定量結(jié)果用RQ=2-△△Ct表示，以U6為內(nèi)參，每個樣本均獨立實驗3次。所有操作均嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標

①對比癌組織與癌旁組織中miR-200c水平；②分析癌組織中miR-200c水平與臨床病理特征的關(guān)系；③將肺癌組織中miR-200c表達高于本研究中平均水平的患者歸為高表達組，低于平均水平的歸為低水平組，對比2組進展生存時間；④癌組織miR-200c水平不同療效組中的表達。療效參考RECIST1.1版本相關(guān)標準[6]：目標病灶：目標病灶完全消失，病理淋巴結(jié)短徑減少至10 mm以下，且所有非目標病灶消失，腫瘤標記物水平正常，無新發(fā)灶，為完全緩解；所有目標灶消失，病理淋巴短徑均將至10 mm以下，有1個或多個非目標灶持續(xù)存在或(和)腫瘤標記物水平持續(xù)高于正常值為部分緩解，或目標病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，無新發(fā)病灶或(和)非目標病灶進展也可判斷為部分緩解；目標病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，同時無新病灶出現(xiàn)或(和)非目標病灶進展，為穩(wěn)定；此外均視為進展。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁非癌組織中miR-200c水平對比

癌組織miR-200c平均值為(0.459±0.012)，癌旁非癌組織表達為(1.034±0.120)，兩者差異有統(tǒng)計學意義(t=44.47，P=0.0000)。

2.2 癌組織中miR-200c水平與臨床病理特征的關(guān)系

有肝轉(zhuǎn)移的患者癌組織中miR-200c表達水平較無轉(zhuǎn)移患者更低，P<0.05。見表1。

2.3 癌組織miR-200c高表達組與低表達組預后對比

高表達組無進展時間為(3.61±0.21)個月，低表達組無進展時間為(1.71±0.32)個月，兩者差異有統(tǒng)計學意義(t=46.30,P=0.0000)。Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)miR-200c水平與無病生存時間呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.531，P<0.05)。

2.4 癌組織miR-200c水平不同療效組中的表達

miR-200c水平在癌組織中表達水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩(wěn)定組、病變進展組，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.05。見表2。相關(guān)性分析(Spearman)發(fā)現(xiàn)療效與癌組織miR-200c表達呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.560，P<0.01)。

表1 Ⅵ期胃癌癌組織中miR-200c與臨床病理特征的關(guān)系

表2 Ⅵ期胃癌癌組織中miR-200c在不同療效患者中的表達

3 討論

MinRNA是非編碼小分子RNA，轉(zhuǎn)錄后水平對目標基因表達實現(xiàn)負調(diào)控，引起靶mRNA分子降解，或出現(xiàn)翻譯抑制。本研究中miR-200c廣泛分布在人類細胞及組織中，是發(fā)現(xiàn)較早的miRNAs之一，在多種惡性腫瘤中有異常表達，例如上皮型卵巢癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌、黑色素瘤等[7]。目前許多研究發(fā)現(xiàn)其在組織中表達具有特異性，關(guān)于其在癌組織中的表達意義研究逐漸增多。本研究中對比Ⅵ期胃癌患者癌旁非癌組織和癌組中miR-200c表達水平，發(fā)現(xiàn)組織miR-200c平均值為(0.459±0.012)，癌旁非癌組織表達為(1.034±0.120)，差異明顯。這與唐錦莉等[8]報道的胃癌晚期患者癌組織中miR-200c、miR-192水平較癌旁組織表達低的結(jié)果基本一致。

近年來關(guān)于miR-200c與癌癥患者預后關(guān)系的研究逐漸深入化，大部分研究顯示miR-200c高表達患者預后相對較好；但也有研究發(fā)現(xiàn)miR-200c在惡性腫瘤發(fā)生進展中具有癌基因作用，其表達與預后為負相關(guān)[9-10]。miR-200c表達在不同腫瘤患者中表示不同的預后，這可能與腫瘤組織特異性有關(guān)，或是miR-200c樣本提取不同所致，例如一些研究者是觀察血漿miR-200c水平，一些研究者是觀察血清miR-200c水平，而本研究觀察組織miR-200c水平。在本研究中癌組織miR-200c水平高表達預示較好的預后。例如本研究發(fā)現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移患者癌組織中miR-200c水平較無肝轉(zhuǎn)移患者更高。而早期胃癌肝轉(zhuǎn)移患者病情更嚴重，其預后受諸多因素制約，單個肝轉(zhuǎn)移灶患者中生存期較多灶者長，肝轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移個數(shù)是預后不良因子[11]。這是因為miR-200c對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3B、DNMT3A有直接抑制作用，對DNMTI表達有間接抑制作用，能使胃癌中高甲基化基因得到恢復，從而抑制腫瘤侵襲、生長增殖，故miR-200c高表達預示著預后更好。本研究通過對比高表達組和低表達組無進展生存時間，發(fā)現(xiàn)高表達組無進展生存時間明顯較低表達組長，Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)miR-200c水平與無病生存時間呈正相關(guān)關(guān)系。以上研究結(jié)果均提示Ⅵ期胃癌患者癌組織中miR-200c水平高低與預后密切相關(guān)。

鉑類藥物是晚期胃癌一線用藥，但是腫瘤細胞有鉑類耐藥現(xiàn)象。尹杰等[12]研究發(fā)現(xiàn)miRNA異常表達與腫瘤對鉑類化療藥物的敏感程度相關(guān)；彭麗香等[13]研究指出晚期胃癌患者miR-21及miR-181b表達與含奧沙利鉑化療后預后有關(guān)，其中低表達組預后較高表達組好。但目前研究晚期胃癌組織miR-200c的研究甚少，現(xiàn)有研究均認為其表達與化療效果有一定關(guān)系。本研究通過對比發(fā)現(xiàn)miR-200c水平在癌組織中表達水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩(wěn)定組、病變進展組，差異有統(tǒng)計學意義。進一步相關(guān)性分析證明癌組織miR-200c表達與鉑類化療效果呈正相關(guān)關(guān)系。而張倩等[14]研究指出miR-200c能抑制鋅指 E-盒結(jié)合同源異型盒 1基因表達，從而抑制胃癌腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移；提示miR-200c有抑制胃癌基因作用，而鉑類化療方案可能具有調(diào)節(jié)癌組織miR-200c表達，從而發(fā)揮抗癌作用。

綜上所述，Ⅳ期胃癌組織miR-200c表達水平與患者預后及鉑類化療方案療效相關(guān)，通過觀察其表達水平評估預后，今后也可通過提高晚期胃癌組織miR-200c表達來進行治療。