miR-451、VEGF及TNF-α在食管癌患者血清中的表達水平及意義

邢艷麗

食管癌的發生與患者飲食習慣、基因、遺傳、環境等因素有關。該病在我國的發病情況呈現地區性差異，一定區域內的絕對高發率與周圍地區的相對低發生率成鮮明對比，是我國食管癌最典型的流行病學特征。目前研究發現，腫瘤細胞因子TNF-α、腫瘤生長因子VEGF參與食管癌的發生及轉移[1]。miR-451是機體病理狀態下細胞重要組成部分，在食管癌中表達異常。研究miR-451、VEGF及TNF-α血清表達水平能預測食管癌分期，指導臨床進行個性化治療[2]。本研究在治療前檢測食管癌患者血清中miR-451、VEGF、TNF-α表達水平，指導臨床治療，現將結果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年1月至2017年1月收治的80例食管癌患者納入觀察組；另于同期選擇80例健康受試者納入對照組。觀察組患者中男性70例，女性10例，年齡32～59歲，平均年齡(49.59±1.74)歲。對照組患者中男性69例，女性11例，年齡32～60歲，平均年齡(49.54±1.7)歲。2組患者一般資料比較無差異，具有可比性(P>0.05)。納入標準：①同意本研究，并自愿簽訂知情同意書的患者；②食管癌前、中期患者；③凝血功能正常的患者；④接受穿刺病理檢驗的患者。排除標準：①合并其他惡性腫瘤的患者；②不接受隨訪的患者。

1.2 方法

所有參與者入院后，空腹抽取患者靜脈血5 ml，檢驗醫生在5 h內離心處理，取其上清，并將2 ml血液的上清保存在-80 ℃的冰箱中待用，3 ml保存在-20 ℃的冰箱中。

⑴miR-451表達水平檢測：取-80 ℃的冰箱中上清，遵循miR-451說明書提取要求，先提取RNA，經脫洗后將RNA存于-80 ℃的冰箱中，在2 h內進行下一步反轉錄。將反轉錄引物進行排序，合成目的基因，使用熒光測量法測量miR-451水平，并將所得結果詳細記錄。⑵VEGF、TNF-α表達水平：取-20 ℃的冰箱中上清，采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)檢測血清VEGF、TNF-α表達水平，并記錄檢測結果。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 入選結果

病理證實鱗狀細胞癌50例，腺癌30例；伴有淋巴結轉移58例，無淋巴結轉移的22例。依據國際抗癌聯盟分期標準進行分期發現，Ⅰ期患者21例，Ⅱ期患者40例，Ⅲ期10例，Ⅳ期患者9例。

2.2 2組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

觀察組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 2組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

2.3 食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

Ⅰ期患者21例，Ⅱ期患者40例，Ⅲ期10例，Ⅳ期患者9例分別納入Ⅰ期組、Ⅱ期組、Ⅲ期組、Ⅳ期組。食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較發現，Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅰ期、Ⅱ期(P<0.05)，見表2。

表2 食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

2.4 食管癌轉移各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

將伴有淋巴結轉移58例患者，無淋巴結轉移的22例患者分別納入淋巴結轉移組及無淋巴結轉移組。研究發現淋巴結轉移組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平顯著高于無淋巴結轉移組(P<0.05)，見表3。

表3 食管癌轉移各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較

3 討論

食管癌是我國最常見的癌癥之一，前期隱匿性較強，5年生存率<15%[3]。有學者認為[4]，環境因素是影響食管癌發生的重要因素。朱煥鋒等[5]研究發現，相同條件的人暴露在相似環境內，卻只有極少部分人發生食管癌。提示，環境因素不是影響食管癌發生的主要因素，個人遺傳因素是影響食管癌發生的主要因素。食管黏膜最早是原位癌，進一步發展成早期浸潤癌，隨著病情的持續發展，逐漸發展成中晚期食管癌[6]，直至機體生命終結。食管癌病理演化屬于生物學中細胞生長、分化、遺傳范疇。該病病程少則1年，多則幾十年。臨床普遍認為，食管癌的產生與諸多因子有關[6-8]。該病屬于多階段發展疾病，但其發生與發展的確切機制尚未統一。隨著細胞分子生物學的發展，關于食管癌細胞因子作用研究越來越多。當前研究發現腫瘤的生長、浸潤、轉移均與血液供給有關。食管癌典型凋亡細胞形態的特點鮮明：細胞質紅染，細胞核染色質明顯濃縮[9]，部分細胞出現核裂解碎片。食管癌典型凋亡小體多為圓形，細胞質呈強嗜酸性。細胞凋亡速遞及指數隨病變逐漸加重。食管癌病理有隱伏型、糜爛性、板塊性、乳頭型、混合型[10]，其中除乳頭型癌外其他類型都無明顯腫塊形成。

miR-451是血清中一類斷鏈的小分子非編碼RNA，能調解多種細胞凋亡進程，可成為腫瘤細胞標志物。miR-451與靶信使RNA結合后控制及影響mRNA的翻譯，從而加快機體正常細胞的凋亡，促進癌性因子釋放。TNF-α是由機體活化巨噬細胞、單核細胞及T細胞分泌結合產生。該細胞因子主要負責機體炎癥期間的細胞轉移與調控，活性較好。王慶玉等[11]研究者認為，TNF-α具有前抗炎及抗活性的作用，能促進腫瘤細胞快速增殖，誘導健康細胞凋亡，促進癌細胞侵襲。TNF-α與惡性腫瘤的發生、發展、轉移密切相關。食管癌患者中血清低濃度的TNF-α與治療預后成正相關。李鐵志等[12]大鼠實驗證明，食管癌病鼠的TNF-α濃度與血液中蛋白表達量顯著提高。腫瘤血管的形成及生長受血管生長因子的調控，其中VEGF是目前所知作用最強、特異性最高的血管生長因子。VEGF是一種內皮細胞有絲分裂原，不僅能誘導血管通透性，還可導致血漿蛋白外滲到血管外間隙，從而形成蛋白纖維基質[13]，誘導內皮細胞增生，形成高度血管化的間質。機體新生血管及新基質可為腫瘤細胞生長提供基礎環境。VEGF在腫瘤壞死區表達明顯增高，并隨著腫瘤壞死區及新生腫瘤的缺氧程度增加。高巍等[14]研究者發現，VEGF能抑制樹突細胞的生成影響免疫機制，最終導致腫瘤細胞的免疫逃脫。研究實驗證實[15]，VEGF表達水平與惡性腫瘤成正相關。VEGF表達與食管癌分期及總生存率顯著相關。放射性治療后食管癌患者的VEGF陽性及陰性表達的生存期有明顯差異，有統計學意義。本文認為，VEGF可以成為食管癌的獨立預后指標。本研究結果表明，食管癌患者的miR-451、VEGF、TNF-α水平顯著高于健康人。提示，食管癌患者血清miR-451、VEGF、TNF-α高表達。表明，miR-451、VEGF、TNF-α因子參與食管癌發生。TNF-α除具有抗腫瘤細胞活性劑免疫調節功能外，還具有介導炎癥反應的作用，TNF-α參與諸多病理生理改變，TNF-α在許多惡性疾病有均有高表達。食管癌患者TNF-α表達高于健康患者。證實食管癌患者體內可能有一定的TNF-α活性物質存在。觀察食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較結果可知，病情越嚴重的食管癌患者血清食管癌分期各亞組患者血清miR-451、VEGF、TNF-α表達水平越高，Ⅳ期患者表達水平最高。miR-451、VEGF及TNF-α表達水平可作為診斷食管癌臨床分期的重要標準，輔助醫生判斷疾病分期。分析食管癌轉移各亞組患者血清miR-451、VEGF及TNF-α水平比較結果可知，淋巴結轉移的患者者血清miR-451、VEGF及TNF-α表達水平高于無轉移患者，表明患者血清miR-451、VEGF及TNF-α表達水平能提示食管癌患者是否出現淋巴結轉移，有利于手術治療。

綜上所述，食管癌的發生、發展在一定程度上取決于患者的生物學行為，食管癌在形成的早期有細胞增生及新血管生成，miR-451高表達能促使腫瘤細胞釋放，影響血管內皮功能，增加其通透性，促進腫瘤細胞轉移及生成，可成為腫瘤細胞標志物。VEGF高表達可誘導正常細胞凋亡，是食管癌的獨立預后指標。TNF-α高表達可促進癌細胞侵襲，為腫瘤細胞提供新的生存環境。術前檢查食管癌血清miR-451、VEGF及TNF-α表達水平能輔助醫生判斷疾病分期、是否出現淋巴結轉移，有利于臨床治療。