根痛平膠囊和根痛平片中川續斷皂苷Ⅵ的含量測定方法研究及續斷的投料情況分析

鐘建青，袁航，殷士寧，尹麗華，傅超，單秀明，張春輝，吳愛英

(青島市食品藥品檢驗研究院，山東 青島 266071)

根痛平系列制劑處方中續斷占比較重，屬于臣藥。續斷來源為川續斷科植物川續斷的干燥根，具“補肝腎，強筋骨，續折傷”的功能，屬于臨床常用中藥[1]。續斷中皂苷類成分含量較高，其中川續斷皂苷Ⅵ作為三萜皂苷類的主要活性成分其藥理活性已被廣泛研究，研究證實其具有抗骨質疏松、保肝降脂、保護神經、保護心肌等藥理作用，抗骨質疏松作用尤為顯著，與續斷藥典功效中的“補肝腎、強筋骨、續折傷”相吻合[2-5]。

我院承擔了根痛平膠囊與根痛平片兩個品種2017年度國家藥品評價抽驗工作，合計共收到根痛平膠囊244批次，涉及16家生產企業；根痛平片83批次，涉及3家生產企業。我們參照《中國藥典》2015年版中續斷藥材的標準，結合近年來多篇文獻研究，采用高效液相色譜(HPLC)測定方法考察了本次國評樣品中川續斷皂苷Ⅵ的含量[6-8]。由于各生產企業間處方量和添加輔料略有不同，生產工藝也不同，分別執行企業注冊標準，所有執行標準均未建立關于續斷含量測定的方法，因此本研究建立了HPLC法測定根痛平膠囊/片中川續斷皂苷Ⅵ含量的方法，主要通過此項考察摸清原材料的質量及企業投料情況，以期更深入有效的協助市場流通藥品的監管。

1 儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；BP-211D電子天平(北京賽多利斯)；超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設備有限公司)。色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)。川續斷皂苷Ⅵ(中國食品藥品檢定研究院；批號：111685-201506)。乙腈為色譜純(德國默克公司)，其余試劑均為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)。根痛平膠囊方法學考察選用陜西東泰制藥有限公司生產的樣品，批號：5L02。根痛平片方法學考察選用承德燕峰藥業有限責任公司生產的樣品，批號：16914012。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(27∶73)為流動相；檢測波長為212 nm。理論板數按川續斷皂苷Ⅵ峰計算，應不低于2 000。

2.2 對照品溶液的制備 取川續斷皂苷Ⅵ對照品適量，加甲醇制成每1 mL中含約700 μg的溶液，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液適量，加甲醇制成每1 mL中含約140 μg的溶液，作為對照品使用液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液(片劑)。取本品10粒內容物，精密稱定，研細，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液(膠囊劑)。

2.4 專屬性試驗 按處方比例及工藝配制缺續斷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法，制備陰性對照溶液。陰性樣品溶液在川續斷皂苷Ⅵ色譜峰保留時間相對應的位置上無色譜峰干擾，表明根痛平膠囊(片)中的其他藥物組分對川續斷皂苷Ⅵ的測定無干擾，見圖1。

2.5 線性關系考察 精密量取川續斷皂苷Ⅵ對照品儲備液適量，加乙醇制成每1 mL含川續斷皂苷Ⅵ分別為30、60、90、110、140、210、280 μg的溶液作為對照品。取對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以濃度(μg·mL-1)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明川續斷皂苷Ⅵ在30～280 μg·mL-1的范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為Y=2 029.357 0X+3.688 5，R2=0.999 7。

2.6 精密度試驗 取140 μg·mL-1的川續斷皂苷Ⅵ對照溶液按“2.1”項下的液相色譜條件連續測定6次，由峰面積計算精密度，RSD為0.61%(n=6)，表明方法的精密度良好。

2.7 重復性試驗 取根痛平膠囊樣品(陜西東泰制藥有限公司，批號：5L02)，按供試品溶液制備方法制備，重復測定6次，川續斷皂苷Ⅵ的平均含量為1.12 mg/片，RSD為0.67%(n=6)。取根痛平片樣品(承德燕峰藥業有限責任公司，批號：16914012)，按供試品溶液制備方法制備，重復測定6次，川續斷皂苷Ⅵ的平均含量為0.93 mg/片，RSD為1.52%(n=6)。表明此方法重復性良好。

2.8 添加回收率試驗 取根痛平膠囊樣品(陜西東泰制藥有限公司，批號：5L02，川續斷皂苷Ⅵ含量為1.12 mg/粒，每粒裝0.5 g)0.25 g，精密加入濃度為0.708 3 mg·mL-1的川續斷皂苷Ⅵ對照品溶液1.0 mL，照供試品溶液的制備方法制備6份回收率測試溶液，測定，外標法計算回收率，結果見表1。取根痛平片樣品(承德燕峰藥業有限責任公司，批號：16914012，川續斷皂苷Ⅵ含量為0.93 mg/片，每片重0.3 g)0.25 g，精密加入濃度為0.708 3 mg·mL-1的川續斷皂苷Ⅵ對照品溶液1.0 mL，照供試品溶液的制備方法制備6份回收率測試溶液，測定，外標法計算回收率，結果見表2。

表2 根痛平片添加回收率試驗結果

2.9 樣品檢測結果 本次國評抽到的根痛平膠囊16家生產企業均執行不同的標準，16個現行標準共計4種處方量(處方1～4)，每種處方量下又有多種規格(0.35、0.4、0.5、0.3、0.37 g/粒)。由于不同企業生產工藝和處方量各不相同，為了直觀、準確的分析川續斷皂苷Ⅵ在不同生產企業中的含量，最終我們根據不同的處方量，分別以mg·g-1為單位擬定川續斷皂苷Ⅵ含量參考線度值，以避免規格和處方量疊加后產生過多頭續的限度值，不利于整體分析。本次國評抽到的根痛平片3家生產企業執行同一標準，處方量唯一，片劑均為薄膜衣片。以mg·g-1為單位擬定根痛平片中川續斷皂苷Ⅵ含量參考線度值，有利于整體分析。

根據各個企業執行標準中根痛平膠囊和根痛平片的處方及生產工藝，樣品取樣量為1 g時，平均每1 g樣品中含續斷飲片的量分別為0.27 g(片劑處方，膠囊處方1、膠囊處方2)、0.38 g(膠囊處方3)和0.49 g(膠囊處方4)。《中國藥典》2015年版規定，續斷飲片“含川續斷皂苷Ⅵ不得少于1.5%”， 以1.5%作為續斷中川續斷皂苷Ⅵ的含量底限，按照50%轉移率計算，結果見表3。

表3 根痛平膠囊和根痛平片不同處方參考線度值計算表

擬定上述限度值作為結果分析參考限度值，考察企業續斷的投料情況。結果244批次根痛平膠囊中有187批次低于此限度。83批次根痛平片中21批次低于此限度。有2家企業3批次樣品未檢出川續斷皂苷Ⅵ，提示企業未投料或投料用續斷質量差。

A.未檢出川續斷皂苷Ⅵ的樣品色譜圖 (企業A)；B.未檢出川續斷皂苷Ⅵ的樣品色譜圖 (企業A)；C.未檢出川續斷皂苷Ⅵ的樣品色譜圖 (企業B)圖2 未檢出川續斷皂苷Ⅵ的根痛平膠囊樣品高效液相色譜圖

3 討論

本次研究建立了HPLC法測定根痛平膠囊和根痛平片中川續斷皂苷Ⅵ的含量，該方法專屬性強、簡單、準確、方便、重復性好，能有效用于測定根痛平膠囊和根痛平片中川續斷皂苷Ⅵ的含量，為根痛平系列制劑的質量標準提高提供理論依據。

我們擬定了川續斷皂苷Ⅵ含量參考限度值，全面系統的考察了本次國家性評價抽檢的所有生產企業續斷的投料情況，結果有2家企業3批次樣品未檢出川續斷皂苷Ⅵ，提示個別企業存在疑似未投料或投料所用續斷飲片質量差的問題。

綜上，我們需要盡快開展根痛平系列制劑的標準提高工作，將處方中的重要藥味的標志性成分含量測定作為監測項目。日常檢驗中，標準檢驗項目較少的品種多留心多探索，才能發現隱藏的藥品生產質量問題，堵住監管漏洞。