酸堿處理去除血液制品中熱原工藝的探索

閔朝

【摘 要】酸堿去除血液制品中熱原的工藝，操作方便、簡(jiǎn)單，一直在血液制品領(lǐng)域廣泛使用。可以說(shuō)，處理血液制品中熱原是一個(gè)非常重要且復(fù)雜的問(wèn)題。多年來(lái)，很多單位都在利用各種方法對(duì)熱原進(jìn)行處理，都在積極探索酸堿處理去除血液制品中熱原的工藝，通過(guò)調(diào)整高熱原制品的PH、離子強(qiáng)度、蛋白濃度等參數(shù)，來(lái)實(shí)現(xiàn)在不同的溫度條件下來(lái)觀察熱原的種種變化。通過(guò)研究表明：酸堿處理是去除血液制品中熱原較為科學(xué)、有效的方法。

【關(guān)鍵詞】酸堿處理；血液制品；熱原；免疫球蛋白

一、引言

各種人血漿蛋白制品統(tǒng)稱為血液制品，其中包括人胎盤血白蛋白、人血白蛋白、靜脈注射用人免疫球蛋白、肌注人免疫球蛋白、組織胺人免疫球蛋白等等。健康人血漿是血液制品的原料，人血漿中的水份占有92%左右，而蛋白質(zhì)則占有7%-8%，蛋白質(zhì)通過(guò)分離提純制成了血液制品。自然環(huán)境中普遍存在熱原質(zhì)，這也是目前很多大規(guī)模血液蛋白分離技術(shù)和方法，容易受到熱原污染，進(jìn)而產(chǎn)生熱原反應(yīng)的原因。熱原作為一種藥理活性很強(qiáng)的毒性反應(yīng)物質(zhì)，對(duì)血液制品有很深的影響。

二、方法

去除污染細(xì)菌毒素有很多方法，一般是根據(jù)血液蛋白相對(duì)分析的不同質(zhì)量來(lái)去除細(xì)菌內(nèi)毒素，常用的有超濾、分子篩等方法，這些方法主要適用于一些分子含量較低的輸液藥品中，比如生理鹽水和葡萄糖水等。【1】此外還有層析法，應(yīng)用的較為廣泛，但是由于設(shè)備成本較高，因此處理量并不大。而酸堿處理方法，在血液制品和其化學(xué)條件相對(duì)穩(wěn)定的條件下，則也有較為明顯的變化。把生理鹽水在注射前，平均分成均等的兩份，分別用lmol/LHCI或lmol/LNaOH調(diào)pH至4.0±0.5、10±0.5，分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素，使內(nèi)毒素濃度為4EU/而，除菌過(guò)濾后分成4份，分別放在57±0.5℃、37±0.5℃、20±0.5℃、（2—8）±0.5℃的溫度條件下孵放，分成不同的時(shí)間段，在相應(yīng)的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行取樣，然后對(duì)毒素含量進(jìn)行測(cè)量。【2】

三、酸堿處理熱原的處理方法

血液作為人體的液體組織，有著一定的堿性，正常人的血液會(huì)將血液酸堿度保持一個(gè)相對(duì)恒定的狀態(tài)，通常是以PH值作為衡量標(biāo)準(zhǔn)，其范圍一般在7.35～7.45，而人體的生命活動(dòng)耐受的最大變動(dòng)的那個(gè)范圍是6.9～7.8，酸堿度對(duì)機(jī)體有著較為明顯的作用。一般情況下，酸堿度對(duì)神經(jīng)肌肉組織的興奮程度可以產(chǎn)生一定的影響。當(dāng)血液酸堿度變化不明顯時(shí)，說(shuō)明人的血液酸堿度是正常的，這是由于人的血液中有著抗堿和抗酸的物質(zhì)，能夠?qū)θ梭w系統(tǒng)形成一定的緩沖作用，對(duì)腎臟排泄、肺呼吸等都有一定的影響。一旦出現(xiàn)身體疾病或者其他不良的反應(yīng)，身體就會(huì)出現(xiàn)酸堿失衡，導(dǎo)致系統(tǒng)紊亂，我們?cè)谂R床上把這樣的現(xiàn)象稱為酸堿中毒。結(jié)合我們?nèi)粘Ｋ釅A處理的熱原方法，我們進(jìn)行以下分析和論述。

（一）酸孵放

靜脈注射免疫球蛋白中內(nèi)毒素在酸孵放中會(huì)產(chǎn)生影響，5%的低pH（pH4±0.2）靜脈注射丙種球蛋白中，分別按5SEU/ml及2.5EU/ml的量加入內(nèi)毒素，搖勻，采用家兔法來(lái)對(duì)熱原取樣進(jìn)行監(jiān)測(cè)，另將樣品于24±1℃孵放24d，同樣用家兔法檢測(cè)熱原。

（二）堿處理

利用家兔法和鱟試法對(duì)熱源的合格度進(jìn)行檢測(cè)，將20%的人血白蛋白制品利用注射鹽水或者其他水進(jìn)行稀釋，將其稀釋成10%的濃度，用1mol/L的Na0H把PH調(diào)到10.0±0.2，之后加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)的毒素，分解成3份，每份濃度變成4EU/mL，其中兩份的Na十濃度調(diào)為40mol/L，進(jìn)行除菌過(guò)濾，然后放于37±0.5℃、57±0.5℃孵放。而另外一份則將Na十濃度調(diào)為160mol/L，除菌過(guò)濾后則在37±0.5℃孵放，在不同的時(shí)間段來(lái)取樣進(jìn)行測(cè)試，利用鱟試法來(lái)測(cè)量?jī)?nèi)毒素含量，并觀察其樣品外觀。

四、結(jié)果

內(nèi)毒素濃度為4EU/mL的生理鹽水樣品，在不同PH（4、10）及不同的溫度下進(jìn)行孵放。同時(shí)在不同的時(shí)間段，利用鱟試法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)出的結(jié)果是：pH4，經(jīng)不同溫度孵放24小時(shí)之內(nèi)，內(nèi)毒素含量均下降較快，至35h均降到1（EU/mL；PH10，孵放溫度越高內(nèi)毒素下降越快，57℃孵放35h降為陰性，37℃孵放76h降為陰性，而20℃、28℃下%h內(nèi)毒素濃度只下降到1EU/mL，見圖l、圖2。

五、結(jié)語(yǔ)

隨著血液制品分離純化工藝的發(fā)展，血液制品的種類在不斷增加，其適應(yīng)癥也在不斷被發(fā)現(xiàn)，這些使得用于臨床疾病治療的血液制品數(shù)量顯著上升。根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則，生產(chǎn)工藝要具有一定的去除/滅活部分病毒能力，生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)有特定的去除/滅活病毒方法，以提高血液制品的安全性。通過(guò)上述酸堿處理的方法可以看出，酸堿處理的血蛋白制品，其檢測(cè)的熱原都符合我國(guó)相關(guān)生物制品的要求和規(guī)范，并且在酸孵化后的樣品（少了堿處理），高濃度的內(nèi)毒素樣品都和孵放前后有著明顯的濃度差異。【3】同時(shí)，堿處理的3份高熱原人血白蛋白制品，進(jìn)行檢測(cè)后均熱原合格，符合我國(guó)的關(guān)于生物制品的規(guī)格和要求。

【參考文獻(xiàn)】

【1】李軍英. 生物制品中常用滅活劑的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志， 2018， 31（09）：117-120.

【2】耿軍曉， 趙紅星. 血液制品二次包裝工藝分析與研究[J]. 中國(guó)包裝工業(yè)， 2014（24）：6-7.

【3】蘇峰， 孔冬冬， 周海云，等. 血液制品中病毒去除和滅活方法概述[C]// 中國(guó)輸血協(xié)會(huì)輸血大會(huì). 2014.