淺析藍每盛世組培快繁技術

孫淼淼

摘要：本文以盛世莖段作為外植體試驗材料，研究了不同培養基對誘導率、增殖倍數的影響。通過研究藍莓盛世品種莖段組織培養再生體系，確定各培養階段的最佳培養條件，為藍莓盛世品種組培快繁提供依據。

關鍵詞：藍莓;盛世;外植體藍莓，又稱越橘，因其果實中富含花青苷、鞣化酸等抗氧化物質，具有緩解眼疲勞、預防心血管疾病、提高人體免疫力等功效，頗受全球消費者青睞，被列為人類五大健康水果之一，堪稱21世紀“世界水果之王”。藍莓盛世品種是2000年由美國佛羅里達大學選育出的，樹體生長健壯，豐產性強，平均單果重2.37克，果實天藍色，果蒂痕小且干，質地極硬，風味甜且高抗莖干潰瘍病，具有廣闊的市場前景。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

該試驗以藍莓盛世半木質化莖段為外植體，采自遼寧省農科院大連分院試驗基地。

1.2 實驗方法

無菌株系的建立：晴天上午取溫室內生長健壯、腋芽飽滿的一年生枝條，去掉葉片，剪成1.0～1.5厘米長的單芽莖段，用飽和洗衣粉澄清液浸l0分鐘后，再用自來水沖洗30分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精浸30秒，無菌水洗1次，再用0.1%升汞滅菌6～10分鐘后，用無菌水沖洗3次，再放入帶3層濾紙的培養皿中，待莖段上的水被濾紙吸附后，將單芽莖段接種在誘導培養基上。

誘導培養基篩選：不定芽誘導以WPM為基本培養基，附加不同濃度的玉米素ZT（0.3，0.5，0.8，1.0，1.5）毫克/升，添加一定濃度的赤霉素GA30.5毫克/升與生長素IAA0.3毫克/升添加蔗糖30克/升，瓊脂4.6克/升，將培養基pH值調至5.4每天光照12小時，光照強度1500～3000勒克斯，培養溫度25°C。誘導試驗每個處理只接種了10個單芽，3次重復，20天調查其污染率與誘導率。

增殖培養：增殖培養以WPM為基本培養基，附加不同濃度的玉米素ZT（0.3，0.5，0.8，1.0，1.5）毫克/升，添加一定濃度生長素IAA0.3毫克/升，糖30克，瓊脂4.6克調pH值至5.4，待誘導出來的不定芽長高至2～3厘米時，接種到設定的培養基上，每處理接種3瓶，每瓶5個1.0～1.5厘米單芽莖段，3次重復，60天調查增殖倍數及生長勢。

煉苗：選生長健壯的試管苗進行移栽，將試管苗在大棚內逐漸打開瓶口，經常轉動瓶身，使之適應外界條件，一般需3～5天。

應用DPS軟件對試驗數據進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 不同ZT濃度對盛世外植體誘導率的影響

由表1可以看出，盛世的污染率都不高，這與在溫室內取外植體有一定的關系，枝條上的雜菌相對露地上要少很多。誘導率隨著ZT濃度的增加而升高，當ZT濃度增加到1.0毫克/升時，誘導率達86.67%，當ZT濃度增加到1.5毫克/升時的誘導率下降為83.33%。由此可以看出隨著ZT濃度的增加外植體誘導率逐漸升高，當ZT濃度達到一定高度時，誘導率達到最高，再增加ZT濃度，誘導率反而下降。

2.2 不同ZT濃度盛世的增殖倍數的影響

由表2可見，盛世增殖培養ZT濃度在0.3毫克/升時，試管苗生長較慢，隨著ZT濃度增加，試管苗株高、生長表現均有所提高，當ZT濃度增加到0.8毫克/升時，試管苗株高4.47厘米，試管苗生長健壯形態正常，增殖倍數達6.4倍，有效苗比例高，生長表現均好于其他處理，隨著ZT濃度的增加基部大量萌發叢生芽，增殖倍數變大，苗變細變弱，玻璃化苗增加將來可用于移栽的有效苗減少，不利于優質種苗的生產。

隨著ZT濃度增加，當ZT濃度達到0.8毫克/升時，盛世試管苗增殖率最高，達6.4倍，較其他處理差異顯著。

2.3 移栽

移栽前用煙熏劑（異丙威、腐霉利、百菌清等）熏棚。做寬1.0～1.2米的苗床，長按棚寬而定，苗床土要進行消毒，移栽基質為水苔，水苔浸泡1～2天后，鋪在消毒好的苗床上，厚度5厘米左右，澆透水后再用多菌靈對水苔進行殺菌。取出培養瓶內的植株，剪成2～3厘米長枝段，用1000倍液的海藻素浸泡5分鐘，扦插在經過消毒處理好的水苔上。枝1.5～2.0厘米，栽完澆水，做成小拱棚，上覆無紡布，大棚上外遮陽。溫度控制在25°C左右，相對濕度80%以上，一周后逐漸打開小拱棚，20天后植株開始生根，頂尖長出新葉。

3 小結

試驗結果表明，藍莓盛世品種的最佳誘導培養基為WPM+ZT1.0毫克/升+GA30.5毫克/升+IAA0.3毫克/升+糖30克+瓊脂4.6克，誘導率高達86.67%;最佳增殖培養基為WPM+ZT0.8毫克/升+IBA0.1毫克/升+糖30克+瓊脂4.6克，增殖倍數為6.4倍。藍莓盛世誘導與增殖培養過程中，通過提高玉米素ZT的濃度，可有效地提高誘導率和繁殖倍數。外植體誘導試驗中過高的ZT濃度會抑制腋芽的萌發，而在增殖試驗中過高的ZT濃度會使試管苗的叢生芽數量增加過大，苗變弱，玻璃化傾向增加，質量急劇下降。