EB病毒DNA和ABCG2聯合檢測對鼻咽癌發病和預后的臨床意義

吳國謙 謝福權 康喜訊

[摘要] 目的 探討EB病毒DNA、ABCG2（乳腺癌耐藥蛋白）聯合檢測對鼻咽癌發病和預后的臨床意義。 方法 方便選取該科2016年7月—2017年12月收治的110例鼻咽腫瘤疾病患者為研究對象，所有患者均在鼻內鏡下采集鼻咽組織，送檢驗科進行EB病毒DNA熒光定量PCR檢查，根據檢測結果分為正常組41例、EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組6例、鼻咽癌組63例。將鼻咽癌組織送病理科進行ABCG2免疫組化分析，對EB病毒DNA進行原位雜交。將ABCG2陽性癌組織設為A組32例，將ABCG2陰性癌組織設為B組31例，比較兩組組織對應患者的疾病復發率和生存率。結果 共采集110例患者的鼻咽組織，正常組、EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組、鼻咽癌組的構成比分別為37.27%、5.45%、57.28%，鼻咽癌組EB病毒DNA陽性為100.00%。A組組織對應患者的疾病復發率為31.25%，較B組的6.45%高（P<0.05），生存率為75.00%，較B組的96.77%低，差異有統計學意義（χ2=4.795、4.186，P=0.029、0.041<0.05）。結論EB病毒DNA和ABCG2的陽性表達均為鼻咽癌發病和預后變差的促進因素，兩者聯合檢測可用于鼻咽癌的早期診斷和預后評估。

[關鍵詞] 鼻咽癌；EB病毒DNA；ABCG2；發病；早期診斷；預后評估

[中圖分類號] R739.63 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2019）03（c）-0004-03

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of combined detection of Epstein-Barr virus DNA and ABCG2 （breast resistance protein） in the pathogenesis and prognosis of nasopharyngeal carcinoma. Methods 110 patients with nasopharyngeal neoplasms admitted to our department from July 2016 to December 2017 were convenient selected and enrolled. All patients underwent endoscopic nasopharyngeal tissue collection and sent to the laboratory for EBV DNA quantitative PCR. According to the test results， there were 41 cases in the normal group， 6 cases in the EB virus DNA positive non-nasopharynx cancer group and 63 cases in the nasopharyngeal carcinoma group. The nasopharyngeal carcinoma tissues were sent to the pathology department for ABCG2 immunohistochemical analysis， and the Epstein-Barr virus DNA was in situ hybridized. The ABCG2 positive cancer tissues were set to 32 cases in group A， and the ABCG2 negative cancer tissues were set to 31 cases in group B. The disease recurrence rate and survival rate of the corresponding groups were compared. Results The total nasopharyngeal tissues of 110 patients were collected. The composition ratios of normal group， EBV DNA positive non-nasopharynx cancer group and nasopharyngeal carcinoma group were 37.27%， 5.45% and 57.28%， respectively. The EB virus DNA positive in the nasopharyngeal carcinoma group was 100.00%.The recurrence rate of disease in group A was 31.25%， which was higher than group B 6.45% （P<0.05）， and the survival rate was 75.00%， which was lower than group B 96.77%，The difference was statistically significant （χ2=4.795， 4.186， P=0.029， 0.041<0.05）. Conclusion The positive expression of Epstein-Barr virus DNA and ABCG2 are the promising factors for the worsening of the pathogenesis and prognosis of nasopharyngeal carcinoma. The combined detection can be used for the early diagnosis and prognosis evaluation of nasopharyngeal carcinoma.

[Key words] Nasopharyngeal carcinoma； EB virus DNA； ABCG2； Onset； Early diagnosis； Prognosis evaluation

本課題組前期研究結果已經證實，EB病毒DNA在鼻咽癌組織中的陽性表達率較高，但也有小部分非鼻咽癌患者鼻咽組織中的EB病毒DNA呈陽性表達[1-3]。ABCG2陽性表達與鼻咽癌患者淋巴結轉移、臨床分期均密切相關。結合已有的上述研究基礎，方便選取該院2016年7月—2017年12月收治的110例鼻咽腫瘤疾病患者作為研究對象，以探討EB病毒DNA和ABCG2聯合檢測對鼻咽癌發病和預后的臨床意義，旨在為鼻咽癌的早期診斷和預后評估提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的110例鼻咽腫瘤疾病患者作為研究對象。該組患者中，男59例，女51例，年齡32～70歲，平均年齡（50.19±4.07）歲，其中鼻咽良性腫瘤患者47例，鼻咽癌患者63例。根據EB病毒DNA熒光定量PCR檢查結果將110例患者分為正常組41例、EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組6例、鼻咽癌組63例，其中正常組男20例，女21例，年齡30～73歲，平均（50.21±3.97）歲。EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組男4例，女2例，年齡29～70歲，平均（50.17±4.04）歲。鼻咽癌組男35例，女28例，年齡29～72歲，平均（50.19±4.02）歲。3組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。將鼻咽癌組織送病理科進行ABCG2免疫組化分析，對EB病毒DNA進行原位雜交。將ABCG2陽性癌組織設為A組32例，將ABCG2陰性癌組織設為B組31例，該研究在通過醫院倫理委員會審核、獲取研究對象及其家屬知情、同意后實施。

1.2 方法

鼻內鏡下采集研究對象鼻咽組織，送檢驗科進行EB病毒DNA熒光定量PCR檢查，陰性對照為雙蒸水，陽性對照為合成的DNA片段，反應條件：95℃，預變性，10 min；92℃，30 s；72℃，延伸，30 s，共40個循環。EB病毒DNA陽性判定標準[4]：拷貝數≥1×103copy/mL。

根據EB病毒DNA熒光定量PCR檢查結果將110例患者分為正常組、EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組、鼻咽癌組。將鼻咽癌組織送病理科進行ABCG2免疫組化分析，主要步驟為：組織脫水，石蠟包埋，連續切為厚度為4 μm的切片，二甲苯及乙醇脫蠟、水化后，枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）進行抗原熱修復，滴加一抗、二抗，DBA顯色，蘇木精復染，脫水、透明、中性樹膠封片，在高倍鏡下觀察。ABCG2陽性判定標準[5]：高倍鏡下隨機選取10個視野觀察，細胞膜呈黃色或棕黃色、褐色為陽性細胞，陽性細胞比例>10%判定ABCG2為陽性。對EB病毒DNA進行原位雜交。將ABCG2陽性癌組織設為A組，將ABCG2陰性癌組織設為B組，比較兩組組織對應患者的疾病復發率和生存率。

1.3 統計方法

研究數據的統計學處理應用SPSS 24.0統計學軟件，計數資料采用[n（%）]描述，進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 110例鼻咽疾病患者鼻咽組織的EB病毒DNA檢出情況

110患者中，正常組（EB病毒DNA陰性非鼻咽癌）共41例，所占比例為37.27%，EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組共6例，所占比例為5.45%，鼻咽癌組共63例，病理組織EB病毒DNA陽性率為100.00%，所占比例為57.28%。

2.2 兩組患者隨訪期間的疾病復發率、生存率比較

鼻咽癌組中，病理組織ABCG2陽性患者共32例，病理組織ABCG2陰性患者共31例，均接受放療+手術+化療，術后平均隨訪時間（8.12±0.96）個月。A組隨訪期間的疾病復發率較B組高（P<0.05），生存率較B組低（P<0.05），見表1。

3 討論

鼻咽癌為發生在鼻咽腔側壁或頂部的惡性腫瘤，具有預后不佳的特點。我國為鼻咽癌的高發國家，且近年來人群的鼻咽癌發病形勢仍呈現出不斷嚴峻的趨勢[6]。因此，探索能夠輔助該疾病早期診斷和預后評估的客觀指標具有重要意義[7]。早期提出的腫瘤干細胞學說認為腫瘤組織內有一小群細胞與干細胞具有類似的廣泛增殖、自我更新及分化潛能等特性，并能表達于某些正常干細胞相同的標記蛋白[8-9]。現階段研究發現，腫瘤干細胞的細胞膜上多有ABC轉運蛋白表達，其中ABCG2參與異外源性物質新陳代謝的第三階段，被認為是代謝物排出的“泵”，也是腫瘤干細胞亞群細胞的分選標志，與細胞增殖密切相關[10-11]。

該課題組早期研究結果顯示，鼻咽癌組織的ABCG2陽性表達率高達58%，且與鼻咽癌患者淋巴結轉移密切相關，EB病毒DNA在鼻咽癌組織中的陽性表達率高達100%。該研究主要探討EB病毒DNA和ABCG2聯合檢測對鼻咽癌發病和預后的臨床意義。研究內容共分為兩部分，第一部分為分析鼻咽疾病患者鼻咽組織的EB病毒DNA檢出情況，結果顯示小部分非鼻咽癌患者的鼻咽組織中EB病毒DNA也呈陽性表達，正常組、EB病毒DNA陽性非鼻咽癌組、鼻咽癌組的構成比分別為37.27%、5.45%、57.28%，鼻咽癌組EB病毒DNA陽性為100.00%，與早期研究結果基本保持一致，表明鼻咽組織EB病毒DNA陽性為鼻咽癌發生的危險因素。第二部分為根據ABCG2免疫組化檢測結果對EB病毒DNA陽性鼻咽癌組織進行分組，分為ABCG2陽性（A組）、陰性（B組），比較ABCG2陽性（A組）、陰性（B組）鼻咽癌組織患者的預后情況，分析兩者聯合檢測的作用，結果顯示A組組織對應患者的疾病復發率為31.25%，較B組的6.45%高，生存率為75.00%，較B組的96.77%低，差異有統計學意義（P<0.05），表明ABCG2陽性表達可導致鼻咽癌患者預后變差。這與葉倩等人[12]在相關研究中得出，根據ABCG2免疫組化檢測結果對EB病毒DNA陽性鼻咽癌組織分組后，ABCG2陽性對應患者的疾病復發率為29.12%，生存率為78.43%，其疾病復發率高于ABCG2陰性，生存率低于ABCG2陰性，與該文所得結論一致，具有臨床意義。

綜上所述，該研究得出EB病毒DNA和ABCG2的陽性表達均為鼻咽癌發病和預后變差的促進因素，兩者聯合檢測可用于鼻咽癌的早期診斷和預后評估。但由于現階段國內外尚無較多相關研究報道，且該次研究選取的樣本量較小。因此，所得研究結果的客觀性還有待日后開展更多實踐研究進行檢驗。

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（收稿日期：2019-01-03）