山東東部地區規模化奶牛場引起奶牛呼吸道綜合征的4種常見病毒血清學調查

陳鳳梅 程光民 曹雷 胡士林（山東畜牧獸醫職業學院 山東 濰坊 261061 ）

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山東東部地區規?；膛鲆鹉膛：粑谰C合征的4種常見病毒血清學調查

陳鳳梅 程光民 曹雷 胡士林*（山東畜牧獸醫職業學院 山東 濰坊 261061 ）

為了解目前山東東部地區牛病毒性腹瀉黏膜病病毒、傳染性鼻氣管炎病毒、呼吸道合胞體病毒、副流感病毒3型這4種病原的感染情況，為疫病防控提供依據，從山東濰坊、煙臺、青島、威海等地區采集牛血清樣品380份，采用ELISA方法進行了4種病毒的抗體檢測。結果顯示，BVDV抗體陽性率為62.11%；IBRV gB抗體陽性率最低為42.63%；BRSV抗體陽性率82.11%；BPIV3抗體陽性率81.05%，BRSV和BPIV3感染情況基本持平。被調查的14個牛場有12個牛場曾發生過4種病毒的感染，4種病毒均感染過的牛的比率在83.68%(318/380)。研究表明，山東東部地區多數規?；膛龃嬖谶@4種病毒的感染。

目前奶牛呼吸道綜合征給在奶牛場時有發生有愈演愈烈之趨勢。其中牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞體病毒(BRSV)和牛流行性腹瀉病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)等病毒性病原及巴氏桿菌等細菌性病原共同感染，是主要引起牛呼吸道綜合癥(Bovine respiratory disease complex，BRDC)的原因，感染率可達到100%，死亡率可達35%或更高，給養牛業造成嚴重的經濟損失[1-2]。（1）為了了解目前山東東部地區規?；膛鲞@4種病毒的感染情況，為牛場疫情預測及疫病防控提供依據，2017年8月至2018年5月，本團隊隨機選取山東東部地區14個規?；膛鲞M行了此次調查，所選牛場均未免疫上述4種傳染病疫苗。（2）牛病毒性腹瀉—黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD-MD)是由牛病毒性黏膜病病毒引起的一種傳染病，臨床上以發熱、腹瀉、黏膜糜爛、白細胞減少、流產或產畸型胎兒為主要特征，該病毒屬于黃病毒科、瘟病毒屬，是世界各地奶牛和肉牛發病、死亡以及造成經濟損失的一個重要原因。病毒引起的急性疾病稱為牛病毒性腹瀉，引起的慢性持續性感染稱為黏膜病。1980年以來，我國從西德、美國、加拿大、新西蘭等10多個國家引進奶牛和種牛，因處理不當造成陸續在20多個省市自治區檢出此病[3]。（3）牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis，IBR)又稱“壞死性鼻炎” “紅鼻病”，是牛皰疹病毒I型(BHV-1)引起的一種牛的呼吸道感染和繁殖障礙傳染病，主要表現為傳染性鼻氣管炎、眼結膜炎、高熱、流產、腦炎等。20~60日齡的犢牛、奶牛和肥育牛的易感性最高。運輸、密飼或分娩所引起的應激后暴發。自然病例潛伏期為2~6d。此病目前在世界范圍內流行，對乳牛的產奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有較大影響。在一些地區，IBR病毒抗體陽性率極高。（4）牛呼吸道合胞體(Bovine respiratory syncytial，BRS)是由牛呼吸道合胞體病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)引起的牛呼吸道疾病。該病毒屬于副黏病毒科肺病毒屬。犢牛感染BRSV常導致嚴重的毛細支氣管炎和肺炎，嚴重者可死亡；15~18月齡牛發病率高達80%~100%；在一些牛場急性感染牛的死亡率為5%~20%[4]，給養牛業造成了巨大的經濟損失[5]。1967年，該病毒在日本、比利時和瑞士首次檢出，并不久在英格蘭和美國分離到該病毒。目前已在所有品種的牛、綿羊、山羊和其他有蹄類動物中發現。近年來，我國分別從美國、日本、加拿大、澳大利亞等BRSV感染高發國引進各種高產牛，導致BRSV在我國發生和流行[6]；因此了解該病在我國的流行情況，進而做好防控至關重要。（5）牛副流行性感冒是由牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3，BPIV3)引起的牛的急性接觸性呼吸道傳染病，廣泛流行于世界各國。BPIV3屬于副黏病毒亞科呼吸道病毒屬，在呼吸道繼發細菌感染時發揮著重要作用，是引發運輸熱或呼吸道綜合征的首要因素[5]。在有壓力的環境下，牛副流感病毒3型的單獨感染或混合感染(牛病毒性腹瀉黏膜病、冠狀病毒、傳染性鼻氣管炎、呼吸道合胞體病毒等)的情況下，通常會導致細菌感染，尤其是巴氏桿菌的感染。呼吸道內皮細胞是BPIV3的最初靶細胞，但是2型肺細胞和肺泡巨噬細胞也會被感染，進而擾亂肺部正常防衛和清除機制，從而使機體更易受細菌感染導致肺炎。目前該病在世界范圍內流行，尤其是美洲和亞洲，每年都給養牛業造成嚴重的經濟損失[8]。我國在近期才開始研究該病毒，根據最近幾年的文獻報道，BPIV3己經在我國內蒙古、黑龍江、吉林、山東、山西和新疆等地存在[9-11]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 隨機選取山東東部地區14個規模化奶牛場，從中隨機選擇荷斯坦奶牛，TMR飼喂，2次/d擠奶。

1.1.2 儀器 （1）牛病毒性腹瀉-黏膜病抗體檢測試劑盒(美國IDEXX公司生產)。（2）傳染性鼻氣管炎病毒gB抗體試劑盒(美國IDEXX公司生產)。（3）牛呼吸道合胞體間接ELISA抗體檢測試劑盒(BIO-X公司生產)。（4）牛副流感病毒3型間接ELISA抗體檢測試劑盒(BIO-X公司生產)。

1.2 方法

1.2.1 血樣的采集 用10ml注射器隨機采取奶牛尾靜脈血大約5ml，立即將血液注入真空采血管，靜置，冷藏，盡快以3000rpm/min離心10min分離血清以備檢測。

1.2.2 檢測方法 （1）牛病毒性腹瀉-黏膜病抗體的檢測按照說明書進行。（2）傳染性鼻氣管炎病毒gB抗體的檢測按照說明書進行。（3）牛呼吸道合胞體抗體檢測按照說明書進行。（4）牛副流感病毒3型抗體檢測按照說明書進行。

1.2.3 統計學分析 檢測結果按照陽性、陰性進行判定，統計每個奶牛場牛病毒性腹瀉—黏膜病、傳鼻、呼吸道合胞體和副流感3型的血清抗體陽性率。

2 結果與分析

4種牛常見呼吸道疾病血清抗體檢查結果(見附表)。

附表 4種病毒血清抗體檢查結果 （%）

疾病BVD IBR BRSBPI3 牛場編號樣品數陽性數陽性率樣品數陽性數陽性率樣品數陽性數陽性率樣品數陽性數陽性率 1401537.50413073.1724241002424100 2393692.30322371.88322887.50322887.50 3292793.10241562.5028281002828100 419736.842328.70361233.30361233.30 53937.693200.00282485.70282485.70 618181002414.1724241002424100 7252184.0028517.8624833.3024833 8282485.713326.06282071.40282071.40 93000.002514.0024241002424100 10161593.7513861.54282485.70282485.70 1110880.0010550.00282485.70242083.30 12493163.27493673.472824100282485.70 13191789.47232191.30242485.70282485.70 14191263.16231356.5224241002424100 合計38023462.1138016242.6338031282.1138030881.05

2.1 牛病毒性腹瀉-黏膜病血清情況 依據BVDV血清抗體陽性率超過80%的牛場判定為BVDV高風險牛場(至少有一頭BVDV持續感染牛的存在)[12]，被調查的14個牛場中，有8個被判定為高風險牛場，其中1個牛場陽性率100%，4個牛場陽性率在90%以上。數據表明，被調查的牛場中有57.14%的牛場存在BVDV的持續感染；山東東部地區BVD血清抗體平均陽性率為62.11% (234/380)。

2.2 傳染性鼻氣管炎血清情況 依據曹杰等[13]提出的 IBRV血清抗體陽性率超過40%的小區和牛場判定為IBRV高風險牛場(可能出現明顯的臨床表現)，被調查的14個牛場中，有9個被判定為高風險牛場，4個牛場陽性率在70%以上，1個牛場陽性率為零，2個牛場陽性率很低，綜合分析得出山東東部地區IBRV血清抗體平均陽性率為42.57%(162/380)。

2.3 牛呼吸道合胞體抗體情況 在被調查的14個牛場中，有7個牛場陽性率100%，僅有2個牛場陽性率33%，其他在71.4%~100%之間，陽性率很高。山東東部地區BRSV血清抗體平均陽性率為82.11%(312/380)。

2.4 牛副流感病毒3型抗體檢測情況 在被調查的14個牛場中，有6個牛場陽性率100%，僅有2個牛場陽性率33%，其他在80%以上，陽性率很高。山東膠東地區BPIV3血清抗體平均陽性率為81.05%(308/380)。

3 討論

3.1 牛病毒性腹瀉-黏膜病的血清 （1）BVDV感染會給奶牛養殖帶來巨大的損失，需引起從業者的高度重視。2006-2013年間，很多專家調查了BVDV的流行情況，奶牛血清陽性率為22.5%~94.1%[14]。本次被調查的山東膠東地區14個牛場中，BVD血清抗體陽性率為62.17%，與王淑娟等[15]調查山東陽性率83.3%相比較低。本次調查牛場中有57.14%的牛場有BVDV持續感染牛(PI牛)的存在，說明山東濰坊及膠東地區牛場BVDV感染嚴重，應進行BVDV清除和控制。（2）在BVD凈化策略中，BVD疫苗發揮積極的作用，通過聯合應用滅活疫苗和弱毒疫苗，能有效防止胎兒的持續性感染和臨床感染。BVDV 持續性感染牛是重要的傳染源，目前，耳組織檢測已應用于BVD持續性感染牛的鑒定[16]，連續一年無新生 BVD 持續性感染牛即表明牛群已經凈化。牛群長久保持凈化狀態，仍需加強防疫檢疫措施，嚴格執行新進牲畜的隔離檢疫、消毒措施，嚴格產地、運輸和交易市場及其進出口檢疫，及時掌握牛場中BVDV的流行動態[17]。各大牛場需制定BVD清除計劃，加強牛群中PI牛的檢測，全群篩查淘汰PI牛，以逐步達到凈化目的。

3.2 傳染性鼻氣管炎的血清 （1）IBR被OIE列為法定報告性動物疫病我國也將其列為進出口牛的必檢疾病。IBRV感染可引起牛群廣泛的免疫抑制，因而病畜常會繼發感染其他病毒或細菌[18]。IBRV可損傷巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞，從而降低其免疫應答能力，抑制IL-2受體表達，降低外周血單核淋巴細胞有絲分裂的速度，減少循環T淋巴細胞數[19]。單核細胞和巨噬細胞被感染后會導致吞噬能力和抗體依賴性細胞毒性作用的減弱[17]。（2）該病在美國每年至少造成5億美元的損失，我國尚未見有官方統計數據。據李棟梁等[23]調查北京地區IBRV陽性率在50.52%。在本次被調查的14個牛場中，總體IBR gB抗體陽性率為42.57%，該試劑盒可區分疫苗抗體和野毒感染產生的抗體，即本次被調查的對象牛中有42.57%的野毒感染牛。IBRV除了會引起呼吸道感染外還可也可引起流產，一般成母牛年流產率高于10%的牛場，除監測布氏桿菌病的感染情況以外，要加強對IBR的檢測。（3）目前，許多發達國家正在使用基因缺失疫苗降低發病率和感染率，同時利用鑒別診斷試劑盒，檢測、篩選出野毒感染牛，進行隔離飼養或直接淘汰，逐步使牛群得到凈化。我國IBR感染形勢嚴峻，應加大力度研發疫苗和檢測方法，逐步實施IBR的控制和凈化。

3.3 牛呼吸道合胞體抗體 牛呼吸道合胞體在牛群中的隱性感染是非常普遍的[7]。本次調查牛呼吸道合胞體血清抗體陽性率在82.11%。該病毒會引起肺部器官的纖毛上皮損傷，導致肺清除能力下降，從而誘發繼發性細菌感染。G蛋白是及病毒蛋白中特有的，因其高度的O-linked糖基化的特性有助于逃脫免疫監控。盡管免疫對牛的合胞體病毒感染是不完備的和短暫的，但接種疫苗仍然是控制的常用手段。美國的數據表明，接種疫苗能減少與牛合胞體病毒感染相關疾病的嚴重暴發；無論如何新疫苗的研制仍在進行中，包括載體疫苗及其類似物。

3.4 牛副流感3型抗體 牛副流感是引起牛呼吸系統疾病最重要的病毒之一。因BPIV3多發生于運輸后的牛，被認為是導致運輸熱的主要病毒[21]。但該病毒常和其他病原混合感染，很少發現該病毒單一致病現象。H gglund S等[22]對病毒引起的呼吸道系統疾病進行6年的研究發現，BPIV3在牛群中每年都會造成感染，并且具有很高的感染水平，Solís-Calderón JJ等[23]調查發現墨西哥肉牛BPIV3血清陽性率為85.6%。芬蘭進行的牛血清學調查發現80%的血清樣本呈BPIV3陽性[24]。我國霍志云等[25]調查BPIV3陽性率吉林97.35%，內蒙84.31%，山西95.15%。本次調查山東膠東地區BPIV3的陽性率81.05%。總之，從已經獲取的調查資料得出BPIV3陽性率都很高。而目前我國尚未找到控制牛副流感病毒3型的相關疫苗，僅通過提高牛免疫力等途徑控制牛呼吸道疾病綜合征，應積極借鑒國外的防控機制，防止牛群病情加重。

3.5 牛場混合感染情況 所調查的引起奶牛呼吸道綜合征的4種病毒病中，IBR平均陽性率最低為42.63%；BRSV抗體陽性率82.11%；BPIV3抗體陽性率81.05%，，BRSV和BPIV3陽性率很高，感染情況基本持平。被調查的14個牛場有12個牛場曾經發生過4種病毒的感染，4種病毒均感染過的牛的比率在83.68%(318/380)，有1個牛場BVD陰性，1個牛場IBR 陰性。經咨詢，BVD陰性的牛場已經做過牛群中PI牛的凈化。現在部分牛場已經意識到BVD所帶來的弊端，開始實施凈化，而其他3種病毒的重視程度還遠遠不夠?？傊?，在山東東部地區，4種病毒的感染情況不容樂觀，需要各部門配合做好相應的防控措施，以減少奶農經濟損失。

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（2019–03–26）

山東省現代農業產業技術體系牛產業創新團隊建設項目(SDAIT-09-05)

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