水稻小熱休克蛋白OsHSP20抗體特性鑒定及應用

何婧 劉寒 郭留明 李靜 張恒木

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水稻小熱休克蛋白OsHSP20抗體特性鑒定及應用

何婧1, 2劉寒1, 2郭留明1, 2李靜2張恒木1, 2, *

(1浙江師范大學 化學與生命科學學院，浙江 金華 321004;2浙江省農業科學院 病毒學與生物技術研究所/省部共建植物有害生物國家重點實驗室培育基地, 杭州 310021;*通訊聯系人, E-mail: zhhengmu@tsinghua.org.cn)

【目的】在前期克隆了一個水稻小熱休克蛋白(OsHSP20)的基礎上，進一步分析該蛋白多克隆抗體的免疫反應特性和應用范圍，為深入鑒定該類基因的功能奠定基礎。【方法】利用合成多肽和其原核表達產物分別免疫家兔制備了相應的多克隆抗體；ACP(Antigen-coated plate)-ELISA和dot-ELISA用于分析比較多克隆抗體效價和靈敏度；Western blot用于鑒定多克隆抗體的特異性和應用范圍。【結果】Western blot分析顯示，利用重組OsHSP20蛋白及其合成多肽所制備的多克隆抗體均可以在原核表達OsSHSP樣品中特異性檢測到1條大小與預期一致(37 kD)的條帶，表明兩種方法獲得的多克隆抗體都具有高度的特異性；ACP(Antigen-coated plate)-ELISA和dot-ELISA分析表明，利用重組蛋白制備的多克隆抗體效價和靈敏度均高于利用多肽制備的抗體。進一步的Western blot分析顯示該抗體可用于多種植物小熱休克蛋白(SHSP)的檢測。【結論】制備了OsHSP20蛋白質抗體，且具有高度的特異性和較高的效價和靈敏度，可廣泛地用于多種單、雙子葉植物HSP20蛋白的表達分析，有助于OsHSP20及其他植物同源蛋白的功能鑒定。

小熱休克蛋白；多克隆抗體；蛋白質印跡法

熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)是生物體細胞受到高溫等外界非生物條件刺激時產生的一類結構保守……