牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠酒精性肝損傷的影響研究

文/孫 宇 張 娟 卿德剛＊ 倪 慧 陳鋼糧 劉姍姍 徐建國

（1 新疆維吾爾自治區中藥民族藥研究所；2 新疆旺源駝奶實業有限公司）

駝乳是一種營養價值很高的乳品，含有多種免疫調節因子和抑菌抗炎成分，如免疫球蛋白、乳鐵蛋白、溶菌酶、維生素C等，具有調節免疫、抑菌、抗炎、抗病毒等作用，被稱為“沙漠白金”，具有較高的食療作用和醫用價值。世界各地駱駝產區的牧民常飲用駝乳以增強體質，并用駝乳輔助治療腸胃炎、糖尿病、肺結核、肝病等疾病[1，2]。駝乳中含有牛磺酸[3]，牛磺酸對神經系統、心血管系統、免疫系統和消化系統的多種動物疾病模型均有一定的治療作用。肝臟是牛磺酸代謝的主要場所，也是其重要的靶器官，因此牛磺酸與肝病的關系近年來成為研究熱點。有學者報道，駝乳對肝病患者來說是一種很好的輔助食品，對肝損傷有保護作用[4～6]。為進一步提升駝乳對肝損傷的保護效果，本文在駝乳粉中添加牛磺酸，以期考察牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠酒精性肝損傷的影響。

1 材料與儀器

1.1 材料

駝乳粉（新疆旺源駝奶實業有限公司提供）；牛磺酸（食品級，購自潛江永安藥業有限公司）。將駝乳粉和牛磺酸以9∶1（質量比）混合作為試驗材料。

1.2 動物

健康雄性ICR清潔級小鼠60只，由新疆維吾爾自治區實驗動物研究中心提供，生產許可證號SCXK（滬）2012-0002，體重18.0～22.0 g，按體重隨機分為5組，每組12 只。全部動物均給予飼料和飲用水，自由取用。

1.3 主要儀器

JY92-Ⅱ型超聲波細胞粉碎儀、離心機、MD酶標儀、振蕩器、恒溫水浴箱、AU-640生化分析儀、甘油三脂和總蛋白測定試劑盒、丙二醛和還原型谷胱甘肽測定試劑盒、冷凍切片機。

2 方法

2.1 動物分組及急性肝損傷模型建立

將小鼠按體重隨機分5 組，每組12 只，分別設為低、中、高劑量組（受試物含量分別為0.5 g/kg、1.0 g/kg、3.0 g/kg，統稱樣品組），空白組和模型組。各組連續灌胃30 d，灌胃體積20 mL/kg·BW，空白組和模型組給予純凈水。給予受試物結束后，樣品組和模型組一次灌胃給予50%乙醇（14 mL/kg·BW），空白組給予純凈水，禁食16 h，處死小鼠，取同一部位肝臟進行肝臟組織病理學檢查及肝組織勻漿中丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG）測定。

表1 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝臟組織病理學變化的影響

2.2 檢測方法

2.2.1 肝臟組織病理學檢查

取肝組織經12%福爾馬林溶液固定后，從肝左葉中部做橫切面取材，冰凍切片，蘇丹III染色，光鏡檢查。

2.2.2 生化指標測定

取0.2 g肝組織，制成5%肝組織勻漿，用生化儀測定勻漿中TG和蛋白質含量，用丙二醛和還原型谷胱甘肽測定試劑盒測定MDA和GSH含量。

2.3 統計方法

用SPSS統計軟件進行數據處理。小鼠肝組織勻漿中TG、MDA、GSH等數據均為計量資料，原始數據進行正態檢驗和方差齊性檢驗，在滿足“方差齊”和“正態分布”的要求后，用單因素方差分析法（ANOVA）進行統計，對P＜0.05的數據用多個試驗組和一個對照組間均屬的兩兩比較方法進行統計處理；對方差不齊和組織病理學檢測結果用秩和檢驗進行統計處理。

3 結果

3.1 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝臟組織病理學變化的影響

在電鏡下觀察小鼠肝臟組織，根據脂滴在肝細胞內的分布、面積和范圍，將肝細胞脂滴含量分為5 級，以判斷小鼠肝臟組織的病理學變化情況。除空白組外，各組小鼠均出現不同程度的肝細胞脂肪變性（表1）；模型組肝細胞脂肪變性與空白組相比，差異極顯著（P＜0.01），表明建模成功；樣品組與模型組小鼠相比，肝細胞脂肪變性不同程度減輕，其中中劑量組差異顯著（P＜0.05），表明牛磺酸聯合駝乳粉具有減輕酒精性肝損傷小鼠肝細胞脂肪變性的作用。

3.2 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中MDA含量的影響

牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）含量的影響見表2。模型組小鼠肝勻漿中MDA含量升高，與空白組相比差異極顯著（P＜0.01），表明建模成功。樣品組小鼠肝勻漿中MDA值與模型組相比均有所降低，其中低、中劑量組與模型組相比差異顯著（P＜0.05），表明低、中劑量組能降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中MDA含量。

3.3 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中GSH含量的影響

牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響見表3。模型組小鼠肝勻漿中GSH含量降低，與空白組相比差異極顯著（P＜0.01），表明建模成功。樣品組小鼠肝勻漿中GSH含量與模型組相比均有所增加，其中低、中劑量組與模型組相比差異顯著（P＜0.05），表明低、中劑量組能增加酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中GSH含量。

3.4 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中TG含量的影響

牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中甘油三脂（TG）含量的影響見表4。模型組小鼠肝勻漿中TG含量增高，與空白組相比差異極顯著性（P＜0.01），表明建模成功。樣品組小鼠肝勻漿中TG含量與模型組相比均有下降，且各劑量組與模型組相比差異均極顯著（P＜0.01），表明各劑量組均具有降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中TG含量的功能。

表2 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）含量的影響（±s）

表2 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）含量的影響（±s）

值—1 7 13 71空白組 12 1.08±0.40 0.000

表3 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響（±s）

表3 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響（±s）

組別 動物數（只）GSH（mg/g蛋白質）F值模型組 12 4.43±2.29** —低劑量組 12 6.93±2.45# 0.045中劑量組 12 6.97±2.35# 0.041高劑量組 12 6.76±2.75 0.065空白組 12 7.22±0.97 0.002

表4 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中甘油三脂（TG）含量的影響（±s）

表4 牛磺酸聯合駝乳粉對小鼠肝勻漿中甘油三脂（TG）含量的影響（±s）

組 別 動物數 TG（μmol/g肝）F值模型組 12 14.4±4.5** —低劑量組 12 8.7±2.6## 0.002中劑量組 12 8.8±3.8## 0.002高劑量組 12 8.6±3.9## 0.002空白組 12 5.0±3.6 0.000

4 討論

機體大量攝入乙醇后，在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化成乙醛，乙醛可減少還原性谷胱甘肽（GSH）的濃度，引起脂質過氧化反應，產生過量的丙二醛（MDA），增加自由基的毒性作用，同時影響肝臟微管功能，減少微管蛋白分泌，阻礙脂蛋白的排除，甘油三酯（TG）在高爾基體中堆積，難以排出，使三羧酸循環障礙和脂肪酸氧化減弱，從而影響脂肪代謝，導致脂肪在肝細胞內沉淀，這與急性酒精性肝損傷的發病機制密切相關。

本研究結果顯示，灌胃30 d牛磺酸聯合駝乳粉后，低、中劑量組能顯著降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中MDA含量（P＜0.05），說明樣品可通過抑制自由基和脂質過氧化物的產生，從而部分抑制過氧化反應，保護肝細胞；低、中劑量組能顯著提高酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中GSH含量（P＜0.05），說明樣品可增強機體對于自由基的耐受，從而減輕氧化應激損傷；各劑量組均能顯著降低酒精性肝損傷小鼠肝勻漿中TG含量（P＜0.01），說明樣品可以改善肝臟的微管功能，促進脂蛋白排出，減少TG在肝臟內堆積，增強TG在肝臟內的代謝。此外，病理學變化表明，與模型組相比，各劑量組小鼠肝細胞脂肪變性有不同程度的減輕，其中中劑量組差異顯著（P＜0.05），說明樣品對小鼠肝臟組織病理學指標的影響呈陽性。綜上所述，牛磺酸聯合駝乳粉對酒精性肝損傷具有輔助保護作用，是一種很好的護肝產品。C